In Vivo Elektroporering: En platsspecifik metod för att transfekt zebrafisk

Overview

Denna video beskriver in vivo elektroporation, som är en teknik för DNA leverans till ependymoglial celler i vuxna zebrafisk.

Protocol

1. Elektroporering

1. Ta bort fisken från injektionsuppsättningen medan du fortfarande håller den i svampen.
2. Sänk ned den inre sidan av elektrodernas spets i ultraljudsgelen.
3. Täck fisken telencephalon med en liten mängd ultraljud gel.
4. Placera fiskhuvudet mellan elektroderna, placera den positiva elektroden på fiskens ventrala sida och den negativa elektroden på dorsalsidan (figur 1C), samtidigt som fiskens kropp fortfarande hållers i svampen. Detta anger riktningen för flödet av den ström som krävs för att elektroporera ependymoglia placerad i subventricular zon.
5. Tryck elektroderna försiktigt och exakt mot telencefalonen (Figur 1 C). Administrera strömmen med fotpedalen. Håll elektroderna på plats tills alla fem pulserna är klara.

Representative Results

Figur 1: Schematisk representation av koronaldelen av den everted zebrafish telencephalon. a)System av en koronal del av zebrafisk telencephalon, belyser positionen för ependymoglial celler, som är foder Ventrikulärt yta och bygga ventral Ventrikulärt väggen. Dorsal ependymalt skikt överbryggar de två halvkloten och täcker ventrikeln (V), som ligger mellan två cellskikt: ependymoglial och ependymal. B)Till vänster, ett fotografi av zebrafiskhuvudet taget ovanifrån, som belyser telencefalons position med en vit streckad linje. Ett glas kapillär avbildas i rött, tillsammans med målplatsen för kapillärinsättning. Bilden till höger är ett schema över zebrafiskhjärnan som visar positionen för plasmidinjektion i rött. Det bör noteras att glaskapillären inte rör telencephalon och att plasmid injiceras strax ovanför telencephalon i ventrikeln. T = telencefalon, OT = optisk tectum. (C) Avbildad till vänster är ett fotografi av zebrafiskhuvudet (sidovy), och till höger finns en skildring av huvudet (sidovyn) som visar elektrodernas position för att rikta in sig på telencefalonen.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662