Summary
Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, geç dönem post-travmatik immün yanıtların değerlendirilmesi için izin verir. Bu makale, usul yürütme, deneysel model kombinasyonları için potansiyel çoklu travma çalışma izni de dahil olmak üzere model adım adım açıklanmıştır.
Abstract
Travması sonrası çoklu organ yetmezliği ve travma hastalarında yüksek mortalite yol açabilir erken bir hiper-reaktif inflamatuvar yanıtı yoktur; bu yanıtı, sık sık enfeksiyon klinik komplikasyonlar ekler gecikmiş bir immünosupresyon eşlik eder ve ayrıca mortaliteyi artırabilir 1-9. Birçok çalışma, bağışıklık sisteminin reaktivite travması sonrası bu değişiklikleri değerlendirmek üzere başladı. 10-15
Immünolojik çalışmalar büyük ölçüde transgenik ve in vivo modelleme için kullanılabilir knockout farelerde çeşitli yoluyla desteklenmektedir; ayrıntılı araştırmalarda bu suşların yardım immünolojik yanıtlar yer alan moleküler yollar değerlendirmek için 16-21
Farelerde kırık tespit teknikleri, karmaşık ve kolayca tekrarlanabilir gibi deneysel fare travma modelleme meydan okuma, uzun vadeli bir araştırmadır. 22-30
Bu pseudofracture modeli, kolayca çoğaltılabilir travma modelinde, anestezi sürekli, uzun süreli kullanımı olmadan, hayvan ve uzun süreli sağkalım açısından hareket özgürlüğü sağlayan, immünolojik bir ekstremite kırığı ortamında taklit ederek, bu zorlukların üstesinden. Amaç, uzun kemik kırığı özellikleri yeniden; yaralandı kas ve yumuşak doku yerli kemiği kırmadan zarar görmüş kemik ve kemik iliği maruz kalmaktadır.
Ikili bir kas arka ayaklarında ezilme yaralanmaları, kemik çözüm bu yaralı kas içine enjeksiyon yoluyla takip pseudofracture modeli iki bölümden oluşmaktadır. Kemik çözüm, bir yaş ve kilo eşleştirilmiş singeneik donör her iki arka ayaklarında uzun kemiklerin hasat hazırlanmıştır. Bu kemikler daha sonra ezilmiş ve fosfat yeniden süspanse kemik çözüm oluşturmak için tamponlu salin.
İkili femur kırığı ekstremite travma, yaygın olarak kullanılan ve köklü bir model ve pseudofracture modelinin geliştirilmesi sırasında karşılaştırmalı bir model oldu. Mevcut kırık modellerin çeşitliliği arasında, steril henüz orantılı olarak ciddi bir çevresel doku travması modeli istediği gibi, pseudofracture karşılaştırma olarak yumuşak doku yaralanması ile kırık kapalı bir yöntem kullanmayı seçti. 31
Hemorajik şok, ağır travma ayarı sık rastlanan bir bulgudur ve küresel hipoperfüzyon bir travma modelinde çok ilgili bir öğe ekler 32-36 pseudofracture modeli yüksek şiddeti bir çoklu travma modeli için bir hemorajik şok modeli ile kolayca kombine edilebilir . 37
Protocol
1. Çalgı ve Cerrahi Alan Hazırlık:
Tüm deneysel prosedürleri aseptik teknikler kullanılarak yapılmaktadır. Başlamadan önce, deney alanı iyice temizlenmeli ve sterilize edilmelidir. Benchtop hava kuru ve daha sonra% 70'lik alkol ile silinmelidir izin dezenfekte edilmelidir. Deneysel çalışma alanı soyunma cerrahi mavi ped ve steril alan yerleştirin.
Kullanmadan önce tüm malzeme ve aletler otoklavda sterilize edilir. Şırınga ve iğneler steril alınır. Araştırmacı uygun laboratuvar önlüğü, cerrahi maske ve steril cerrahi eldiven garbed olmalıdır.
Her akşam Bizim cerrahi aletler otoklavda sterilize edilir. Cerrahisi sonrası antibakteriyel sabun ve su ile yıkanır. Onlar temiz bir cerrahi mavi ped üzerinde kurumasına izin verilir. Daha sonra dikkatli bir şekilde sterilizasyon kese içine yerleştirilir ve daha sonra kullanmak üzere sterilize edilir.
° F, deney başlamadan önce 300-350 uygun sıcaklığa ulaşıncaya sağlamak için sıcak boncuk sterilizatör açın. Bu sterilizatör ilgili fareler üzerinde deneysel prosedürleri arasında araçlarını temizlemek için kullanılan olacak. Paslanmaz çelik bir alet tepsisine alın ve% 70 etanol ile yolun 1 / 3 doldurun. Cerrahi aletler karşılamak için yeterli% 70 Etanol olmamalıdır. Dolaşımdaki ısıtma yastığı açın ve üzerine bir cerrahi mavi ped ve sonra bunun üstüne pansuman steril bir alana yerleştirmek. Bu ısıtıcı deneysel prosedür ve iyileşme döneminde fare yeterli sıcaklık sağlamak için kullanılır. Steril alanında soyunma tüm steril aletler, gazlı bez, şırıngalar, iğneler ve bir 1.5mL mikrofuge'de tüp yerleştirin. Herhangi bir steril alet ve diğer öğeleri açarken dikkatli olun, onlara dokunarak kontamine. Bu kurulum işlemi yaparken steril eldiven kullanmak en iyisidir.
2. Pseudofracture Model Deney Prosedürleri:
1. Anestezi indüksiyonu ve fare konumlandırma.
(70mg/kg) intraperitoneal Pentobarbitol yönetmek başlayın. Bu ilk kuyruğunu proksimal ucunu kullanarak, kafes fare kaldırma gerçekleştirilir. Fare sonra anestezi doğru dozu hesaplamak için tartılmalıdır. Hala kendi kuyruğunu tutarken Ardından, kafesinin üst hayvan. Fare fare forepaws hemen arkasında iki tarafında başparmak ve orta parmak ile boynun ense tut. Parmağı, baş / boyun bölgesinde cilt geri çekmek için kullanılan baş ve kısmen hareketsiz. Yüzük parmağı fare omurganın bel bölgeye basılı iken fare kuyruğu, küçük parmak ve yüzük parmağı arasında tutulur. Anestezi yaklaşık 5 dakika içinde tam etkisini almalı ve refleks testi ile teyid edilmelidir.
Hayvan uykuda sonra, pleksiglas bir tahta üzerine fare yatar pozisyonda yerleştirin ve ekstremitelerde taping onları hareketsiz gevşek bir döngü bant tekniği kullanın. Gevşek döngü tekniği sadece ince şerit bant kesme ve her ekstremitenin distal kısmının etrafında gevşek bir şekilde bant sarma gerektirir. Kaset daha sonra kendisine geri sıkışmış ve bant üzerinde sol kuruluna bağlı. Bu tutarlı bir şekilde, farelerin ekstremitelerde sağlamak yanı sıra yapılacak deneysel manipülasyon daha doğal bir pozisyonu sağlar. Hayvanın karın, kasık ve uyluk bölgelerinden sonra steril bir alanda korumaya yardımcı olmak için Oster A5 kesme makineleri (boyutu 40 bıçak) kullanarak traş edilir. 4x4 gazlı bez betadin doused ve sonra sterilize etmek için cerrahi alan silinir. Steril bir alan soyunma sonra katlanmış ve sadece alt ekstremite ve baş maruz izin fare üzerinde bol dökümlü.
Immobilizasyon ve sterilize edildikten sonra deney prosedürü başlamadan önce birkaç saniye için farenin burun üzerinde izofluran bir burun konisi. 50cc konik tüp gazlı bez ile dolu bir burun konisi oluşur. Tüpün alt ucunda yarısı farenin burun içine sığacak bir boşluk yaratarak kesilir. Izofluran buharlar tüp kullanılmadığı kalmasını sağlamak için bir kap (bir doku saklama kabı yani düz tarafı geniş ağızlı kavanoz alt) konik kesme ucuna yerleştirilir. Bir ml izofluran, koni içinde gazlı bez eklenmelidir. Titiz dikkat fare anestezi kullanımı sırasında ödenen ve özellikle burun konisi ile izofluran kullanmak olmalıdır. Hayvanın solunum yavaş başlar sonra, denemeyi başlatmak ve burun konisi kaldırılmış ve kapalı olmalıdır.
Deney herhangi bir bölümü boyunca ek anestezi gerekiyorsa, ek pentobarbital enjekte veya izofluran uygulanan olabilir. Isofluorane yönetiminin alternatif yöntemler kullanılabilir ve güncellenen kılavuzlar Tavsiye Edilenmümkünse, anestezi daha iyi kontrol sağlamak için hassas bir buharlaştırıcı kullanımı sonunda. Ancak, farenin solunum fizyolojisi yakın ilgi, bu yöntemlerden herhangi biri ile güvence altına alınmalıdır.
2. Pseudofracture deney.
Pseudo-kırık, yumuşak doku hasarının bir kombinasyonu yaralandı kas kemik çözüm enjeksiyon yoluyla takip ve arka ayaklarında iki taraflı olarak yapılır. Alıcı farelerde herhangi bir deneysel manipülasyon başlamadan önce kemik çözüm hazırlanmış olmalıdır.
3. Kemik çözeltisi.
Bir donör fare hazırlanan kemik çözümü 3 alıcı fareler için yeterli olacaktır. Singeneik donör fare yaş ve alıcı deneysel fare kilo eşleştirilmiş olduğunu kullanılmalıdır.
Fare donör inhale izofluran ile ötenazi olacaktır. Donör sonra bant sadece ayak ucunda alt ekstremite dikkat pleksiglas kurulu bantlanmış olacaktır. Alt ekstremitelerde dikkatle traşlı ve iyice betadin kaplı olacak ve daha sonra kısırlık için alkol ile silinmelidir gerekir. Sonra her iki alt ekstremite femur ve tibia cerrahi steril bir biçimde kaldırılmış olacaktır. Alt ekstremite uzun kemiklerin kaldırmak için, inguinal bölge deri içine bir cerrahi kesi yapmak ve ayak bileği, ekstremite uzunluğu boyunca deriyi kesmek için devam edin. Cilt geri çekin ve hem de maksimum maruz kalma medial ve lateral yönleri üzerinde subkutan fasya ve kas uzak teşrih. Makas, ön ve tibia (tibialis anterior, ekstansör digitorum longus, ekstansör hallicus longus, peroneus longus, peroneus brevis) ve temiz uzak kaslar kaldırmak için proksimale ve distale bıçak slayt yan yatan kasları altında bir bıçak takın kemik altında yatan. Posterior ve medial tibia alt kısmında tibia (gastroknemius, soleus, arka plantaris, tibialis, fleksör digitorum longus, fleksör hallicus longus) altındaki kasları ayırmak için bu tekniği tekrarlayın. Distalde sürgülü minimal bir ek efor, tibia fibula ek bileşenini için arka tarafında olmalıdır. Bu bacak kaslarında proksimal sonunda, küçük bir römorkör, ayak bileği eklemini aşağı moda bu kasların distal ekleri yayınlayacak birlikte kas grubu çekerken olarak mümkün olduğunca yakın, eklemeler tendon kesilmiş ve distal kaslar geri çekin. Ayak bileği eklemi, makas ile kesilebilir. Bu noktada femur tibia çıkarmayın! Bu bağlantı, kalça ekleminin femur diseksiyon yardımcı olacak ek kaldıraç verir. Femur kasların serbest bırakılması için benzer bir teknik takip edin ve bu posterior ve medial ve lateral gerekirse gerçekleştirmek. Diz eklemi onları serbest bırakmak için bu kas gruplarının distal ek kesin. Diseksiyon devam edin ve kalça ekleminin femur sonuna incelemek için kasların altına uygulayın. Bu diseksiyon yardımcı olmak için, cilt insizyonu kadar yeterli pozlama elde etmek için gerekli uzatılmalıdır. Kalça ekleminin femur Hareket Diseksiyon sırasında femur proksimal ucunu bulmak yardımcı olabilir.
Femur (ekli tibia) donör fare kaldırılır steril bir 4x4gauze koyun. Sadece ayrı bir yandan her kemik açgözlü ve hafifçe büküm / uzun ekseni boyunca zıt yönlerde dönen iki kemiğin diz eklemi iki kemiğin ayrılabilir. Elle manipülasyon herhangi bir aşırı efor ile kolayca kırık olabilir, bu iki kemik Nazik diseksiyonu ve kullanım önerilir. Uzun kemiklerin kalan tendon ekleri kaldırmak için, kemik uzunluğu sarılı 4x4 gazlı bez, kuru steril bir parça kullanın. Gazlı bez yapışır ve kemiklerden çekti hızlı ve kolay bir şekilde bu gazlı bez kemiğe sıkıca kavrayın bir kemik birkaç kez tam uzunlukta çekin, bu kemik yüzeyinden kalan dokularda kazıyın. Toplanan kemiklerin sonra steril bir 1.5mL mikrofuge'de tüp içine yerleştirilir ve taşıma için buz üzerinde yerleştirilmiş olmalıdır.
Bu dört donör kemiklerin kemik çözümü için hazırlık için bir biyolojik güvenlik kabini alınacaktır. Kaput kullanmadan önce iyice dezenfekte edilmelidir, kaput içinde çalışma alanı üzerine pansuman steril bir alana yerleştirin. Çalışma alanında koyun steril bir harç ve havaneli, steril 8 ml tüp ve steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS). 1mL pipetteman ve ilgili ipuçları kaput içinde mevcut olmalıdır.
Bir steril forseps çifti 1.5mL mikrofuge'de tüpten steril bir moda hasat kemikleri çıkarın ve harç yerleştirilir kullanılmalıdır; havaneli yavaşça kemiklerin ezmek için kullanılır. Phosphyedik Tamponlanmış Tuzlu, enjeksiyon için kemik parçaları tekrar süspansiyon kullanılan bir araçtır. Pipet harcın içine PBS 1mL ve tam tabanda sağlamak için ek dairesel hareketlerle, geri kalan parçaları ezmeye devam. Sonra başka bir 1ml PBS ekleyin ve 'kemik çözüm' oluşturmak için kırma devam edin. Bu çözüm, pembe bir renk olmalı, ve tam olarak kırılamaz harç alt kısmında sol kalıntıları olacaktır. Yavaş yavaş, daha büyük kalıntıları harç arkasında kalır sağlarken, maksimum ses yakalamak için 8 ml tüp içine harç çözüm dökmek. Bu kemik çözüm deneysel kullanım kadar buz üzerinde kalmalı ve enjeksiyon için 1 ml şırınga transfer edilecektir. Yirmi iğne daha sonra fare yönetmek amacıyla kemik solüsyon içeren 1 ml şırınga eklenecektir. Bu büyük bir iğne boyutu, tüm kemik parçaları enjeksiyon üzerine bölgeye girmek ve iğne bloke etmezler sağlamak için seçildi.
Alıcı fare, kemik çözümün bir damla enjeksiyon için bir kültür MacConkey agar plaka (24-48hours inkübasyon) yerleştirilmeden önce. Bu, kısırlık, kemik çözüm sağlamaktır. Kemik çözüm pH nötr pH sağlamak için kontrol edilmelidir.
4. Yumuşak doku yaralanması.
Bu yumuşak doku yaralanması, iki taraflı bir hindlimb ezilme yaralanması. Arka bacaklarda biraz kaçırılmış ve yanal döndürülebilir fare ilk konumlandırma, doğru kas grubunu, diz fleksör (biseps femoris, mufl ve semimembranosus kasları) erişilebilirlik yardımcı olur. Büyük bir 18cm hemostat ezilme yaralanması gerçekleştirmek için kullanılacaktır. Bu uygulanan hemostat kuvveti dağılımı analiz ve hemostat bakan dışbükey eğri femur, femur boyunca arka uyluk kasları, orta noktası etrafında kenetli olmalıdır Sensör Ürünleri A.Ş. tarafından Topaq Basınç Analiz Sistemi kullanarak 270psi olarak tespit edildi. Hemostat sonra yalnızca ilk tıklama kapandı kilitli ve 30 saniye süreyle devam edilmelidir. Bu hemostatı yerleştirme dikkat önemlidir kırılmış değildir sağlamak için femur üzerinde sıkıştırılır olmamalıdır. Bu fareler arasında tekrarlanabilir bir yaralanma garanti altına almak için her zaman tutarlı bir şekilde yapılmalıdır. Bu ezilme yaralanması, her iki alt ekstremite yapılır.
5. Kemik çözüm enjeksiyon.
Alıcı deneysel fare anestezi ve daha önce açıklandığı gibi hazırlanmış olacak ve bu kemik enjeksiyon için önce yumuşak doku yaralanması geçirmiş olacak.
Kemik çözümü daha sonra bilateral alıcı fare ezilmiş uyluk kas içine enjekte edilecektir. Bu çözüm, 0.15mL bir 20 iğne kullanarak her uyluk arka kas içine enjekte edilecektir. Deri yoluyla yaklaşık 2 ~ 3mm girin ve iğne iğne yerleştirilmesi mesafe dikkat konik ucu femur karşı dokunur gibi hissedeceksiniz, bu pozisyon idealdir. Şimdi kemik solüsyon enjekte edilir. Iğneyi çekiniz ve enjeksiyon sitesi üzerinden hızlı bir şekilde yara kemik çözümün herhangi bir geri akışını durdurmak için steril eldivenli parmak yerleştirmek. Birkaç saniye boyunca basılı tutun.
Fare, kafese sonra geri yerleştirilir ve tam özgürlük hareketinin doğrudan anestezi geçene izin olacaktır. Uygun ağrı yönetimi, fare uyanır olarak uygulanmalıdır.
6. Post-operative/recovery süre.
Gevşek bir döngü bant kaldırılır ve hayvanların birkaç saat sonrası kurtarma için dolaşan ısıtma yastığı tutulur temiz bir kafes yerleştirilir. Uygun sıcaklık, gerekirse ek bir ısı lambası ile sağlanmalıdır.
Gıda ve su hazır olacaktır.
Hayvanlar anestezi ağrı doğru yönetmek için de uyanmak başlar Analjezik uygulanmalıdır. Buprenorfin (0.1mg/kg) olarak, hayvanların fiziksel aktivite başlamadan subkutan enjekte edilir, fakat önce, böylece solunum fonksiyon ele geçirmesine değil.
Fareler sürekli olarak, anestezi sırasında anestezi ya da deneysel bir uç nokta kurtarma kadar izlenebilir olmalıdır. Fareler de ameliyat sonrası dönemde çok dikkatli bir şekilde izlenebilir olmalı ve gerekli olan tüm ek ağrı kesici ilaç gerektiği gibi uygulanmalıdır. Monitör hayvan fiziksel aktivite, solunum durum, yiyecek ve su alımı ve herhangi bir sıkıntı işaretleri (yorucu solunum, ağrı, yeme ve içme alışkanlıkları değişiklikleri) buna göre ele alınması gerekmektedir.
% 70'lik alkol içine yerleştirin ve cerrahi aletler, steril gazlı bez ile silin, sonra hayvanlar arasındaki sterilizasyon için ~ 20 saniye microbead sterilizatör içine koydu. Cerrahi aletler çıkarın ve% 70 alkol ile, onlara serinlemek yardımcı olmak için sprey. St üzerine yerleştirin.erile alanında soyunma. Sonraki hayvanların geri damla olacaktır araçların sol alkol olduğundan emin olun.
3. Karşılaştırmalı İkili Femur Kırılma Modeli - Deneysel Prosedürler:
Deneysel fare anestezi ve başlangıçta açıklandığı gibi hazırlanmış olacaktır. Hindlimb diz bakan dışbükey yüzeyi ile diz eklemi üzerinde yaklaşık 2-3mm çapında büyük bir 18cm hemostat kenetli olmalıdır. Başparmak hemostat ve kalça arasında kenetli hemostat ve işaret parmağınızın üstüne yerleştirin. Kırılma nerede biliyorum büküm önce femur hissediyorum emin olun. Diğer elinizi saat yönünde büküm büküm hemostat saat yönünün tersine.
Kontralateral bacak yordamı yineleyin.
4. Çoklu travma Model - Hemorajik Şok ile Pseudofracture kombinasyonu Deneysel Yöntem:
Alıcı fare anestezi ve başlangıçta açıklandığı gibi hazırlanmış olacaktır. Pseudo-kırığı ile birlikte hemorajik şok geçmesi Fare pseudofracture işlem öncesi femoral arter kanülasyonu olacak ve daha sonra sözde kırık tamamlandıktan sonra bu kateter hemorrhaged olacaktır.
5. Başarı Sırları:
Genel:
- Mümkün olduğu kadar steril kalmasını ekstra çaba emin olun.
- Anestezi sırasında titiz bir dikkat, solunum hızı da dahil olmak üzere, fare genel fizyolojik durumuna ödenen ve burun konisi yoluyla özellikle izofluran olmalıdır.
Kemik çözeltisi:
- Kemiklerin Nazik manipülasyon kadar kolay basit manuel manipülasyon sırasında aşırı efor ile kırılmış olabilir!
- Diseksiyonu üzerine tibia Fibula kaldırılması sağlanmalıdır.
- Ilk başta yavaşça kemikleri kırma başlayın harç içindeki tüm parçaları tutmak için!
- Başlangıçta sadece 1 ml PBS ekleyin ve bir zamanlar iyi bir süspansiyon kurdu, geriye kalan kemik parçaları kırma devam kalan 1 ml ekleyin.
- Sadece havanda çözüm olmalıdır toplanan tamamen aşağı kırılacak olamazdı büyük kalan dokularda olmadan bu alıcı fare içine enjeksiyon üzerine iğne teslim almak / engelleyebilir.
Yumuşak doku yaralanması:
- Femur üzerinde ya da kırılmış olacak - bu hemostat dikkatli yerleştirme önemlidir. Kelepçe tekrarlanabilir yaralanma için doğru kas (diz fleksör arka uyluk) üzerinde hemostat.
Kemik çözüm enjeksiyon:
- Solüsyon enjekte ederken, iğne yerleştirilmesi mesafe dikkat konik ucu femur karşı dokunur gibi hissedeceksiniz, bu pozisyon idealdir.
- Iğneyi çekiniz ve yaranın hızlı bir şekilde kemik çözümün herhangi bir geri akışını durdurmak için enjeksiyon sitesi üzerinden bir parmak yerleştirmek. Orada birkaç saniye boyunca basılı tutun.
6. Operatif Endişeler Mesaj:
- Bacak enfeksiyon olup olmadığını kontrol edin.
- Kemik çözüm kültürü kontrol edin.
- Hayvan deneysel manipülasyon ve ilişkili enflamasyon sonucu olarak arka bacaklarda kullanırken sorun olabilir. Uygun ağrı yönetin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, post-travmatik bağışıklık yanıtlarının değerlendirilmesi için izin verir. Pseudofracture modeli immünolojik özellikleri uzun bir kemik kırığı rekreasyon üzerinden bir ekstremite kırığı ortamında taklit: 38,39 bifazik bir bağışıklık yanıtı şu yaralandı kas ve yumuşak doku yerli kemiği kırmadan zarar görmüş kemik ve kemik iliği maruz görülebileceği. 48hrs etrafında bir çukur olarak tasvir gecikmiş immünosupresyon ikinci bir bileşeni tarafından 6 saatte pik görülebilir erken hyperinflammatory yanıt oluşur pseudofracture travma. Bu model, karmaşık ve kolayca tekrarlanabilir olabilir, kırık fiksasyonu gibi, deneysel fare travma modelleme bazı zorlukların üstesinden gelmeye yardımcı olur. Özellikle yerli kemik kırığı olmayan hayvanlarda uzun süreli sağkalım sağlar bu model, post-travmatik bağışıklık yanıtlarını geç dönem çalışma izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu ve Araştırma Davranış ve Uyum Ofisi Pittsburgh Üniversitesi, bir AALAS / AAALAC akredite kurum tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı. Hayvansal kaynaklar Jackson Laboratuvarları ve Charles Rivers Laboratuvarları içerir. Bütün hayvanlar, her satıcı ile kapsamlı sağlık güvencesi yanı sıra, Pittsburgh iç hayvan sağlığı izleme programları Üniversitesi uğrarlar. Bu araştırma, omurgalı hayvanların kullanımı için ABD hükümeti müdürleri uyarınca yapılır. Program USDA ile kayıtlı, ve Halk Sağlığı Laboratuvarı Hayvan Refahı Hizmet Ofisi güvencesi için bir harf vardır.
Acknowledgments
Hemorajik Şok GM053789 Finansman Kaynağı / Sayı Moleküler Biyoloji
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| Circulating heating pad 18"x26" | Harvard Apparatus | py872-5272 | |
| Hot bead instrument sterilizer | VWR international | 11156-002 | |
| Stainless steel tray 8" x 11" | VWR international | 62687-049 | |
| Plexiglass boards (10x15x0.5cm) | University of Pittsburgh Machine shop | ||
| Tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| 50cc conical tube | Any Supplier | ||
| Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR international | 159000-058 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR international | 10749-020 | |
| Surgical scissors (straight – 12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Hemostats curved -18cm | Harvard Apparatus | 81331718 | |
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Gauze 4"x4" | Any Supplier | ||
| 1.5cc microfuge tube | Any Supplier | ||
| Ice bucket | Any Supplier | ||
| Mortar and Pestle | Fisher Scientific | 12-961AA | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| 20G needle | Any Supplier | ||
| 1mL pipetteman | Any Supplier | ||
| 1mL pipette tips | Any Supplier | ||
| Falcon polystyrene 8ml tubes | VWR international | 60819-331 | |
| Sterilization pouch 3"x8" | VWR international | 24008 | |
| Sterilization pouch 5"x10" | VWR international | 24010 | |
| MacConkey II Agar plate | BD Biosciences | 221172 | |
| Ethyl Alcohol - 200 proof | Pharmco-AAPER | [70%] | |
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | OVATION Pharmaceuticals | 70mg/kg | |
| Aerrane (Isoflurane) | Baxter Internationl Inc. | 99.9% | |
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables | ||
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | |||
| Buprenorphine HCl | Bedford Laboratories | 0.1mg/kg |
References
- DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
- Deitch, E. A. Multiple organ failure. Pathophysiology and potential future therapy. Ann Surg. 216, 117-134 (1992).
- Carrico, C. J., Meakins, J. L., Marshall, J. C. Multiple organ failure syndrome. Arch Surg. 121, 196-208 (1986).
- Hauser, C. J., Joshi, P., Jones, Q. Suppression of natural killer cell activity in patients with fracture/soft tissue injury. Arch Surg. 132, 1326-1330 (1997).
- Faist, E., Baue, A. E., Dittmer, H. Multiple organ failure in polytrauma patients. J Trauma. 23, 775-787 (1983).
- Baker, C. C., Oppenheimer, L., Stephens, B. Epidemiology of trauma deaths. Am J Surg. 140, 144-150 (1980).
- Faist, E., Kupper, T. S., Bakeer, C. L. Depression of cellular immunity after major injury its association with posttraumatic complications and its reversal with immunomodulation. Arch Surg. 121, 1000-1005 (1986).
- Lenz, A., Franklin, G. A., Cheadle, W. G. Systemic inflammation after trauma. Injury. 38, 1336-1345 (2007).
- Flohe, S., Flohe, S. B., Schade, F. G. Immune response of severely injured patients--influence of surgical intervention and therapeutic impact. Lang Arch Surg. 392, 639-648 (2007).
- Ayala, A., Wang, P., Ba, Z. F. Differential alterations in plasma IL-6 and TNF levels after trauma and hemorrhage. Am J Physiol. 260, R167-R171 (1991).
- Kalicke, T., Schlegel, U., Printzen, G. Influence of a standardized closed soft tissue trauma on resistance to local infection. An experimental study in rats. J Ortho Res. 21, 373-378 (2003).
- Kobbe, P., Vodovotz, Y., Kaczorowski, D. J. The role of fracture associated soft tissue injury in the induction of sytemic inflammation and remote organ dysfunction after bilateral femur fracture. J Ortho Trauma. 22, 385-390 (2008).
- Kobbe, P., Vodovotz, Y., Kaczorwoski, D. J. Pattern of cytokine release and evolution of remote organ dysfunction after bilateral femur fracture. Shock. 30, 43-47 (2008).
- Flohe, S. B., Flohe, S., Schade, F. U. Deterioration of the immune system after trauma: signals and cellular mechanisms. Inn. Immun. 14, 333-344 (2008).
- Maier, B., LeFering, R., Lhenert, M. Early versus late onset of multiple organ failure is associated with differing patterns of plasma cytokine biomarker expression and outcome after severe trauma. Shock. 28, 668-674 (2007).
- Mestas, J., Hughes, C. W. Of mice not men: differences between mouse and human immunology. J. Immunol. 172, 2731-2738 (2004).
- Hoth, J. J., Wells, J. D., Brownlee, N. A. Toll like receptor 4-dependent responses to lung injury in a murine model of pulmonary contusion. Shock. 31, 376-381 (2009).
- Matsutani, T., Samy, A. nantha, Rue, T. S., W, L. Transgenic prolactin-/- mice: effect of trauma-hemorrhage on splenocyte functions. Am J Physiol Cell Physiol. 288, 1109-1116 (2005).
- Matsutani, T., Samy, A. nantha, Kang, T. S., S-C, Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage. Cytokine. 30, 168-117 (2005).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal models for trauma research: What are the options. Shock. 31, 3-10 (2008).
- DeMaria, E. J., Pellicane, J. V., Lee, R. B. Hemorrhagic shock in endotoxin resistant mice : Improved survival unrelated to deficient production of tumor necrosis factor. J Trauma. 35, 720-724 (1993).
- Jamsa, T., Jalovaara, P., Peng, Z. Comparison of three-point bending test and peripheral quantitative computed tomography analysis in the evaluation of the strength of mouse femur. Bone. 23, 155-161 (1998).
- Bounarens, F., Einhorn, T. A. Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone. J Ortho Res. 2, 97-101 (1984).
- Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U. Development of a locking femur nail for mice. J Biomech. 40, 215-219 (2007).
- Holstein, J. H., Garcia, P., Histing, T. Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration. J Orthop Trauma. 23, Suppl 5. S31-S38 (2009).
- Histing, T., Garcia, P., Matthys, R. An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model. J Orthop Research. 28, 397-402 Forthcoming.
- Manigrasso, M. B., O'Connor, J. P. Characterization of a closed femur fracture model in mice. J Ortho Trauma. 18, 687-695 (2004).
- Mark, H., Bergholm, J., Nilsson, A. An external fixation method and device to study fracture healing in rats. Acta Orthop Scand. 74, 476-487 (2003).
- Bhandari, M., Shanghnessy, S. A minimally invasive percutaneous technique of intramedullary nail insertion in an animal model of fracture healing. Arch Orthop Trauma Surg. 121, 591-593 (2001).
- Sonanis, S. V., Lampard, A. L., Kamat, N. A simple technique to remove a bent femoral intramedullary nail and broken interlocking screw. J Trauma. 63, 435-438 (2007).
- Kobbe, P., Kaczorwoski, D. J., Vodovotz, Y. Local exposure of bone components to injured soft tissue induces Toll-like receptor 4-dependent systemic inflammation with acute lung injury. Shock. 30, 686-691 (2008).
- Bumann, M., Henke, T., Gerngross, H. Influence of haemorrhagic shock on fracture healing. Lang Arch Surg. 388, 331-338 (2003).
- Santry, H. P., Alam, H. B. Fluid resuscitation: past, present, and the future. Shock. 33, 229-241 (2010).
- Hierholzer, C., Billiar, T. R. Molecular mechanisms in the early phase of hemorrhagic shock. Lang Arch Surg. 386, 302-308 (2001).
- Chaudry, I., Ayala, A., Ertel, W. Hemorrhage and resuscitation: immunological aspects. Am J Physiol. 259, 63-678 (1990).
- Kawasaki, T., Hubbard, W. J., Choudhry, M. A. Trauma-hemorrhage induces depressed splenic dendritic cell functions in mice. J Immunol. 177, 4514-4520 (2006).
- Kohut, L., Darwiche, S. S., Frank, A. M., Brumfield, J. M., Billiar, T. R. Fixed volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhgaic Shock. J Vis Exp. , (2010).
- Menzel, C. L., Pfeifer, R., Darwiche, S. S. Models of lower extremity damage in mice: time course of organ damage and immune response. J Surg Res. 166, e149-e156 (2011).
- Pfeifer, R., Kobbe, P., Darwiche, S. S. Role of hemorrhage in the induction of systemic inflammation and remote organ damage: Analysis of combined pseudo-fracture and hemorrhagic shock. J Orthop Res. 29, 270-274 (2011).
