Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Transgenik, Üretimi C. elegans Biyolistik Dönüşüm

doi: 10.3791/2090 Published: August 23, 2010

ERRATUM NOTICE

Summary

Transgenik solucanlar yaygın olarak kullanılır

Abstract

Serbest yaşayan nematod C. kullanarak laboratuvarların sayısı elegans hızla büyüyor. Bu biyolojik model popülerlik hızlı bir nesil zaman ve kısa ömrü, kolay ve ucuz bakım, tam sıralı genom ve RNAi kaynaklarını ve mutant hayvanlar dizisi atfedilir. Ayrıca C, analiz elegans genom, solucan, araştırma yapılan çalışmalarda tüm fareler veya kültür hücreleri için önemli bir yardımcı olabileceğini düşündürmektedir solucanlar ve yüksek omurgalılar arasında büyük bir benzerlik ortaya koymuştur . Güçlü bir solucan araştırma ve önemli bir kısmı gen yerelleştirme ve fonksiyon çalışma transgenik hayvanlar kullanma yeteneği. Transgenik hayvanlar ya solucan germline mikroenjeksiyon yoluyla veya Biyolistik bombardımanı kullanmak suretiyle oluşturulabilir. Bombardıman yeni bir tekniktir ve laboratuarları bir dizi daha tanıdık geliyor. Burada Biyolistik Bio-Rad PDS-1000 sistemi kullanarak altın parçacıkları ile bombardımanı ile transgenik solucanlar oluşturmak için basit bir protokol açıklar. Hermafrodit germline içine DNA mikroenjeksiyon ile karşılaştırıldığında, bu protokol solucan anatomisi tanımlanması veya mikroenjeksiyon performans açısından operatör özel beceri gerektiren bir avantaja sahiptir. Ayrıca birden fazla transgenik hatları genellikle tek bir bombardıman elde edilir. Ayrıca mikroenjeksiyon aksine, Biyolistik bombardıman ekstrakromozomal diziler ve entegre transgenlerin ile transgenik hayvanlar üretir. Entegre transgenik çizgiler elde etme yeteneği, yabancı DNA'nın entegre mutajenik protokollerin kullanımını önlemek. Sonuç olarak, özellikle mikroenjeksiyon az becerikli olmak için gerekli olan zaman ve çaba yatırım ilgilenen araştırmacılar için Biyolistik bombardımanı, transgenik hayvan üretimi için cazip bir yöntem olabilir.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Genel bakış

Geleneksel olarak transgenik solucanlar C. transgen DNA microinjecting tarafından oluşturulan elegans germline 1,2,3,4. Başarılı olsa da, bu yaklaşım, özel ekipman ve solucan anatomi ve mikroenjeksiyon tekniği ile deneyim geliştirilmesi gerekli. Daha yakın zamanlarda Biyolistik bombardımanı germline 5,6 içine yabancı DNA tanıtmak için DNA kaplı altın parçacıkları kullanan bir alternatif yaklaşım olarak geliştirilmiştir. Bu yaklaşım, uygulama açısından başarılı olmak için daha az zaman yatırım gerektirir.

C. Biyolistik bombardımanı transgenik solucanlar oluşturmak için elegans başarı hayvanların büyük bir miktar gerektirir böylece, bireysel solucanın düzeyde, düşük verimlilik vardır. Bu çeşitli yollarla yetiştirilen, ancak ilgili plakaların çalışma ve sayısını azaltmak için yumurta plakları kullanmayın olabilir. Bizim protokol yumurta plakaları ve solucanlar hazırlanması ile başlar ve daha sonra Bio-Rad PDS-1000/He yedi Sistemi kullanarak bombardımanı protokol üzerinde duruluyor. Biz Berezikov ve ark 7 iş kısmen bizim protokol uyarladı.

Bombardımanı ile, unc-119 gen genellikle transgenik hayvanlar için bir belirteç olarak kullanılır. Bu mutasyonu taşıyan Worm suşları ciddi koordinasyonsuz ve zorlukla hareket, görünüm dumpy ve Dauer larva formu 8 için mümkün değildir. Dauer olumsuz koşullar altında üreme yetişkin gelişimini geciktirmek için kullanılan bir alternatif larva aşamasında olup, birden fazla genin 9 Dauer girmesinden tarafından düzenlenir. Unc-119 geni taşıyan birçok suşları C. edinilebilir. elegans Genetik Merkezi (CGC, Minneapolis, MN). Orijinal DP38 suşu (unc-119 (ED3)) ayrıca mansap deneyler etkileyebilecek alakasız bir Dauer oluşum bünye (Daf-c) mutasyon taşıyor. Çeşitli laboratuvarları bu mutasyon outcrossed ve HT1593 gerginlik CGC edinilebilir. Transgenik hayvanlar DP38 suşu ile biraz daha kolay belirlenir ve bu gerginlik transgenik hayvanlar oluşturmak için kullanma eğiliminde. Gerekli olduğunda, daf-c mutasyon kaldırmak için transgenik solucanlar outcross HT1593 kullanın. Transgenlerin hazırlarken büyüyen plakalarının stok tutmak için DP38 solucanlar büyümeye protokolde yavaş adımları biridir.

İfade ilgi gen ile birlikte unc-119 marker normal motilite ve vücut büyüklüğü 5 kurtarma dayalı transgen ifade hayvanların kolay tanımlama sağlar. Unc-119 gen, küçük bir C için çeşitli kaynaklardan ve vektörler unc-119 genomik DNA kullanarak unc-119 organizatörü ve cDNA ve genomik DNA elde edilebilir briggsiae gen 8,10 kullanılır. Biz son zamanlarda bir unc-119 kaset homolog rekombinasyon 11 ve Cre-lox rekombinasyon unc-119 geni taşıyan transgenik hayvanlar üretmek için 12 solucan fosmids değiştirmek için bir yöntem ampisilin direnç geninin içeren herhangi bir plazmid eklemek için basit bir protokol nitelendirdi . Plazmid Addgene A.Ş. (Cambridge, MA) mevcuttur.

Tek bir bombardıman gerçekleştiren yer çaba önemli ama yönetilebilir olmasına rağmen, tek bir günde birden fazla bombardımanları yer alan ek iş az. Sonuç olarak, rutin olarak her getirici iş azaltmak için, transgenik solucanlar üretim küme.

1. Yumurta Plaka Hazırlık

Unc-119 mutant solucanlar, çünkü bir tabak parçaları plaka diğer bölgelerinde hala yiyecek içeren süre açlıktan eğilimindedir engelli hareketlilik ile standart NGM plakalar üzerinde büyümek zor. Yumurta plakalar üzerinde kalın gıda tabakası unc-119 solucanlar daha kolay tarama ve tüm plaka 7 devralmaya izin Yumurta plakaları bu sorunu çözebilir. Yumurta plakaları da, solucanlar çok sayıda az plakaları 13 ihtiyaç vardır böylece büyümeyi destekleyen yararı var . Genellikle 5 yumurta plakaları, bir bombardıman için solucanlar büyümek için yeterli. Aşağıda tarif yaklaşık 50 plaka yapar ama, istenirse daha az yapmak için yarıya olabilir.

Plakalar, antibiyotik ve antifungal ilaçlar kullanın ve sadece tabak tohumlama için hipoklorit tarafından üretilen yumurta kullanın, böylece yumurta plakaları kolayca kontamine olabilirler.

1. Gün:

  1. 500ml şişe LB (400 mL) hazırlayın. Otoklav için 20 dk.
  2. ~ 50% 2 agar ile 1 litre NGA kullanarak 10 cm NGA plakaları dökün. 200 mg / ml 13 litre ve streptomisin başına nistatin 10 ml ekleyin.
  3. 200 mg / ml streptomisin, LB OP50-1 40 ml gecede kültür büyütün. Bu gerginlik, streptomisin dirençli ve CGC edinilebilir.
  4. 500ml şişe OtoklavErtesi gün.

2. Gün:

  1. Ayrı steril şişeye 10 tavuk yumurtası sarısında bulunur. Biz bir yumurta sarısı ayırıcı (Hedef de dahil olmak üzere ev mağazalar, mevcuttur) kullanın. Çalkalayınız.
  2. LB ile 400ml hacim kazandırın. Sallamak
  3. 1 saat 60 ° C'de inkübe edin.
  4. Oda sıcaklığında soğutun.
  5. OP50-1, 40ml ekleyin. Sallamak
  6. Plaka başına 5-8 ml karışımı dağıtın.
  7. Plakalar gece boyunca oda sıcaklığında yerleşmek için izin verin.

3. Gün:

  1. Plakaları kalan sıvı yavaşça dökün. Gece boyunca oda sıcaklığında kapakları ile kurumasını bekleyin.

4. Gün:

  1. Gerekli ° C kadar bir kutu ya da plastik torba ve mağaza, 4 tabak koyun. Bu plakalar, 1-2 ay kullanmak için Tamam gibi görünüyor.

2. Yumurta Tabaklar Seeding

  1. Konsantre OP50 son açlıktan plakaları ekleyerek 6 cm NGA plakalar üzerinde DP38 solucanlar genişletin. Tek bir bombardıman için, tohum 5 yumurta plaka ~ 6 küçük tabak kullanın. Birden fazla bombardımanları için, biz, yumurta plakaları ekim önce yerine tohum 2 zenginleştirilmiş pepton plakalar için küçük tabak kullanın.
  2. DP38 solucanlar 13,14 hipoklorit kullanımı ile yumurta Yalıtmak. Steril S-bazal veya M9 tamponlar 13,14 yumurta tekrar
  3. Yumurta plakaların uygun sayıda yumurta (plaka başına 10.000) ekleyin. Bombardımanı kullanmak için 7-10 gün boyunca 20 ° C'de yumurta plakalar üzerinde solucanlar büyütün. Plakalar, solucanlar, yemek tabakları temizlemek için bir kez başladıktan sonra kullanıma hazır olacaktır. Bu plakalar, açlıktan ve daha uzun süreler için büyüyen solucan verimi artıracak gerçekten zor.

Bombardıman

Önümüzde zaman altın stoku hazırlamak ve 4 ° C kullanılmak üzere saklanır tutmak. Ayrıca gerekli lekesiz ve 10 cm NGA tabak fark vardır. Lekesiz plakaları önceden iyi dökülür ve iyice kurumasını solucanlar ile eklenen sıvı emilimini kolaylaştırmak için izin verilmesi gerekir.

DNA kaplı altın parçacıkları, ilk önce hazırlamaya başlamadan bombardıman gününde, solucanlar yıkayın. Biz lekesiz NGA plakaları sonra solucanlar ve altın parçacıkları yıkama ve macrocarriers aktararak bitirmek.

Altın parçacık hazırlanması:

  1. 1.7mL bir tüp içinde altın parçacıkları 60 mg tartılır ve 15 dakika için% 70 etanol içinde bekletin. Spin altın parçacıkları çöktürmek için kısaca.
  2. 3 kez steril su ile yıkayın ve altın toplamak için kısaca her zaman döndürün.
  3. % 50 steril gliserol 1mL altın süspanse edin. Bu stok altın parçacık çözümü ve 4 ay süreyle saklanabilir ° C

Worms:

  1. S-bazal veya M9 tamponu ile yumurta plakaları kapalı DP38 solucanlar Float ve 50ml konik tüp aktarabilirsiniz.
  2. Tüpler, solucanlar alt kadar bankta tutun. Sonra tampon aspirat ve taze S-bazal veya M9 ekleyin. Tampon enkaz nispeten netleşene kadar, 2 veya 3 kere yıkayın. DNA kaplama işlemi tamamlanıncaya kadar, bu aşamada solucanlar tutun.
  3. Aspire edin ve yaklaşık 2-3 ml bombardımanı ortalama tamponunda solucanlar bırakın. Buz üzerinde 10 cm lekesiz NGA plaka transfer. NGA plaka bombardımanı önce tamamen kuru olarak transfer hacmi en aza indirmek önemlidir. Solucanlar plakanın tüm yüzeyini kapsayacak şekilde emin olun.
  4. Plaka buz üzerinde kurumasına izin verin. Buz kurutma sırasında topaklanma solucanlar önleyecektir.

Bu adım önemlidir: tabak kuru olmalıdır ve solucanlar NGA plaka üzerinde eşit dağılmış. Solucanlar buz üzerinde tutulması, plaka üzerinde hareket eden ve yığınları içine bir araya engeller.

DNA hazırlığı (bir bombardıman için):

  1. 1.7mL bir tüp içinde karıştırın:
    • 50μl altın parçacıkları. Eklemeden önce iyice süspanse edin.
    • 50μl DNA (10-15ug). Biz dairesel veya doğrusal DNA arasında çok az fark görüyoruz. Genellikle (Qiagen Inc, Valencia, CA) DNA saflaştırılması için Qiagen midiprep kartuşlarını kullanın.
    • 50μl 2.5M CaCl 2. Bu çözüm, oda sıcaklığında birkaç hafta boyunca stabildir.
    • 20μl 0.1M spermidin.

      Spermidin sulu çözeltide kararsız. -20 ° C'de 70μl spermidin alikotları ve mağaza olun Daha sonra bir 0.1M çözüm elde etmek için sağa kullanımdan önce su 1 ml ekleyin. Bu çözüm, her bombardımanı için taze hazırlanmış olmalıdır.

      Vorteks Biz genellikle vorteks sonra düşük bir hızda 1.7mL bir tüp içinde altın parçacıkları ve CaCl 2, DNA ve spermidin / protamin damla damla ekleyin. Kalsiyum fosfat ile transfekte olan insanlar için bu tekniği tanıdık.

      Biz çok iyi sonuçlar 15 ile yerine spermidin protamin da kullanılır. Biz su taze bir çözüm (1mg/ml) hazırlayacak ve bizee 50μl yerine spermidin 20μl. Eğer protamin kullanımı, genellikle buz üzerinde yerleştirme yerine 10 dakika boyunca karışımı oda sıcaklığında inkübe edin. Protamin dondurulmuş tutulmalıdır gerekmez ve bir toz bir sıvı yerine.
  2. 30 dakika için buz karışımı inkübe ve süspansiyon altın parçacıkları tutmak için periyodik olarak karıştırın. Daha sonra kısaca spin ve süpernatant aspire.
  3. 300μl% 70 etanol ile yıkayın. Kısaca Spin.
  4. 1 ml% 100 etanol ile yıkayın. Kısaca Spin.
  5. 170μl% 100 etanol içinde süspanse edin.

Macrocarriers, hazırlanması:

  1. 2-propanol içinde 7 macrocarriers (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) durulayın. Kağıt mendil koyun ve oda sıcaklığında kurumaya bırakın.
  2. Her macrocarrier merkezinde DNA / altın karışımı 20μl ekleyin. Süspansiyon altın tutmak için pipetleme önce vorteks sağ emin olun.
  3. Buharlaşması etanol edelim.

3. Bombardıman

Deney sistemi yoluyla helyum temizlemek için önce boş bir bombardıman gerçekleştirmek için emin olun.

  1. , Vakum pompası ve yakın vakum pompası kapanı açın. Biz yağsız vakum pompası kullanın.
  2. Helyum tankı açın. Basıncı ≥ 2200psi kontrol edin.
  3. 2-propanol içinde Islak rüptürü disk (1350 psi), yedi adaptör için istinat kap yerleştirerek.
  4. PDS-1000 sistemi içine adaptörü Vida ve verilen tork anahtarı ile sıkın.
  5. 7 sahibi ve koltuk onlara sağlanan bir aracı haline macrocarriers yerleştirin. Sonra sahibine yedi stop ekran ve alt koydu. Üst ikinci raf üzerinde yer tutucu ve çevirin. Macrocarriers altın benekli tarafı bu noktada aşağı bakacak şekilde olmalıdır.
  6. Yedi adaptör çıkışları ile macrocarrier sahibinin üst deliklerini.
  7. Bombardıman odasında en düşük raf solucanlar (kapak kapalı) ile kaplı NGA plaka koyun.
  8. Tamamen PDS-1000 vakum debi topuzu açın. Vac düğmesine basın odası Hg olarak 26 ulaşana kadar. Sonra vakum korumak için konumda tutun geçmek.
  9. Disk rüptürlerinin kadar yangın düğmesine basın ve basılı tutun. Basınç 1350psi ulaştığında bu olur. Bazen bu meydana 5-20 saniye sürer. Düğmesini bırakın.
  10. Vakum odası (havalandırma pozisyon) bırakın ve plakasını çıkarın.
  11. Vakum ve helyum kapalı açın.
  12. Yangın hattı helyum (helyum göstergesi 0 psi işaretlemeniz gerekir) içermez kadar birkaç kez.
  13. PDS-1000 sistemi kapatın.

Bombardımanından sonra Worm kurtarma:

  1. 20 ° C'de 20 dakika boyunca bombardımana plaka bırakın.
  2. 10 ml S-bazal veya M9 tampon plaka solucanlar Float.
  3. 20 - 10 cm benekli NGA plakaları 0.5mL solucanlar koyun.
  4. Yaklaşık 2 hafta ° C ya da oda sıcaklığında (22-24 ° C) kurtarıldı solucanlar için kontrol etmeden önce 20 bırakın.
  5. Diseksiyon mikroskobu ile unc-119 (+) fenotipi ile solucanlar için ekran. Kurtarıldı solucanlar kurtarıldı olmayan solucanlar üzerinde sağkalım avantajı beri plakaları açlıktan sonra tarama için en uygun zaman.
  6. Kurtarıldı solucanlar bulunan her 10 cm plaka tek bir hat oluşturun.

4. Temsilcisi Sonuçlar

Transgenik hayvanlar elde etmek için ilgili protokolün başarısı özellikle transgen bağlıdır. Organizatörü: GFP muhabiri transgenlerin 20 satır kadar almış. Daha tipik bir sonucu 3-10 satır. Transgenik hatların% 30 entegre çizgiler, ancak bu rastgele ve entegre bir çizgi özellikle isteniyorsa, biz tek bir günde birden fazla bombardımanları gerçekleştirecek.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Biyolistik bombardımanı C. dahil olmak üzere, birçok organizma içine yabancı DNA tanıtmak için basit bir yöntem elegans 1,5,6,7,16. CaCl 2 varlığı DNA ile bir kompleks oluşturan altın parçacıkları dayanmaktadır. Katyonik poliaminler, böyle bir spermidin olarak, in vivo nükleaz bozulması DNA korur. Spermidin labil bir molekül olduğu için, küçük alikotları -20 ° C'de saklayın ve sağ bombardımanı gerçekleştirmeden önce çözüm için önemlidir. Protamin bombardımanı protokolü de açıklandığı üzere, yabancı DNA'nın 15 sunmak için yerine spermidin olabilir. Protamin oda sıcaklığında daha stabil ve yerine viskoz sıvı bir toz olma avantajına sahiptir.

Unc-119 kurtarma gen transgen aynı plazmid veya kaplama altın parçacıkları önce transgen ile karışık olduğunu, ayrı bir plazmid cis ya da yerleştirilebilir. Bir veya birden fazla plazmid karıştırma genellikle başarılı olsa da, biz ve diğerleri birden fazla plazmid ile solucanlar bombardımanı bazı taşıyan transgenik hayvanlar oluşturabilirsiniz bulundu, fakat hepsi değil plazmid 6,11. Plazmid transgen unc-119 gen yerleştirerek kolaylaştırmak için, son zamanlarda hemen hemen tüm plazmid 11 ampisilin direnç geninin unc-119 gen eklemek için homolog rekombinasyon kullanarak bir protokol nitelendirdi .

Ayrıca, solucan suşlara unc-119 mutasyonu eksik DP38 gerginlik hareketli transgenlerin kolaylaştırmak için, biz de mCherry 11 için erimiş unc-119 ile oluşturulan bir plazmid. Pan-nöronal mCherry floresan sonra transgen varlığı, genetik geçmişleri 11 çeşitli izlemek için kullanılabilir .

Bazı transgenlerin zayıf bir ifade veya bir sahne özgü ifade nedeniyle bombardımanından sonra tespit etmek zor olabilir. Transgen varlığı genellikle transgenik solucanlar kullanarak PCR kullanımı yoluyla kontrol edilebilir. Transgenlerin için zayıf bir ifade ile, ek bombardımanları güçlü ifadesi ile satır tanımlanmasına yol açabilir. Alternatif olarak, bir bileşik veya konfokal mikroskop kullanımı genellikle floresan proteinleri ifade görselleştirme yardımcı olabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Bu çalışma, Pittsburgh NIH hibe AG028977 Üniversitesi ALF tohum fonları tarafından desteklenen

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Gold particles Inbio gold BD021 1micron
Midiprep kit Qiagen 12143
Spermidine Sigma-Aldrich S4139
Protamine Sigma-Aldrich P4505
Macrocarriers Bio-Rad 165-2335
PDS-1000/He Hepta System Bio-Rad 165-2257
Rupture disk Bio-Rad 165-2330
Nystatin Sigma-Aldrich N1638
Streptomycin MP Biomedicals 100556

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Evans, T. C. Wormbook. 1-15 (2006).
  2. Berkowitz, L. A., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Generation of stable transgenic C. elegans using microinjection. J Vis Exp. (2008).
  3. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451-482 (1995).
  4. Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO J. 10, 3959-3970 (1991).
  5. Praitis, V., Casey, E., Collar, D., Austin, J. Creation of low-copy integrated transgenic lines in Caenorhabditis elegans. Genetics. 157, 1217-1226 (2001).
  6. Wilm, T., Demel, P., Koop, H. U., Schnabel, H., Schnabel, R. Ballistic transformation of Caenorhabditis elegans. Gene. 229, 31-35 (1999).
  7. Berezikov, E., Bargmann, C. I., Plasterk, R. H. Homologous gene targeting in Caenorhabditis elegans by biolistic transformation. Nucleic Acids Res. 32, e40-e40 (2004).
  8. Maduro, M., Pilgrim, D. Identification and cloning of unc-119, a gene expressed in the Caenorhabditis elegans nervous system. Genetics. 141, 977-988 (1995).
  9. Riddle, D. L., Swanson, M. M., Albert, P. S. Interacting genes in nematode dauer larva formation. Nature. 290, 668-671 (1981).
  10. Maduro, M., Pilgrim, D. Conservation of function and expression of unc-119 from two Caenorhabditis species despite divergence of non-coding DNA. Gene. 183, 77-85 (1996).
  11. Ferguson, A. A., Fisher, A. L. Retrofitting ampicillin resistant vectors by recombination for use in generating C. elegans transgenic animals by bombardment. Plasmid. 62, 140-145 (2009).
  12. Zhang, Y., Nash, L., Fisher, A. L. A simplified, robust, and streamlined procedure for the production of C. elegans transgenes via recombineering. BMC Dev Biol. 8, 119-119 (2008).
  13. Lewis, J. A., Fleming, J. T. Basic culture methods. Methods Cell Biol. 48, 3-30 (1995).
  14. Sulston, J. E., Horvitz, H. R. The nematode, Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 587-606 (1988).
  15. Sivamani, E., DeLong, R. K., Qu, R. Protamine-mediated DNA coating remarkably improves bombardment transformation efficiency in plant cells. Plant Cell Rep. 28, 213-221 (2009).
  16. Johnston, S. A. Biolistic transformation: microbes to mice. Nature. 346, 776-777 (1990).

Erratum

Formal Correction: Erratum: Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation
Posted by JoVE Editors on 12/12/2012. Citeable Link.

The volume for a solution in, Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation, was incorrect. The volume has been corrected from:

The spermidine is unstable in aqueous solution. We make 70μl spermidine aliquots and store at -20°C. We then add 1mL of water right before use to obtain a 0.1M solution. This solution must be prepared fresh for each bombardment.

to:

The spermidine is unstable in aqueous solution. We make 16μl spermidine aliquots and store at -20°C. We then add 1mL of water right before use to obtain a 0.1M solution. This solution must be prepared fresh for each bombardment.

Transgenik, Üretimi<em> C. elegans</em> Biyolistik Dönüşüm
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hochbaum, D., Ferguson, A. A., Fisher, A. L. Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation. J. Vis. Exp. (42), e2090, doi:10.3791/2090 (2010).More

Hochbaum, D., Ferguson, A. A., Fisher, A. L. Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation. J. Vis. Exp. (42), e2090, doi:10.3791/2090 (2010).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter