Summary
In utero elektroporatie is een waardevolle methode voor het transfecteren neuronale stamcellen in vivo. Afhankelijk van de plaatsing van de elektroden en de ontwikkeling meetpunt van elektroporatie, kunnen bepaalde subsets van corticale cellen worden gericht. Gerichte cellen kunnen vervolgens worden geanalyseerd in vivo of in vitro voor de effecten van genetische manipulatie.
Abstract
In vitro onderzoek van primaire neuronale culturen zorgt voor kwantitatieve analyses van neurietuitgroei. Om te onderzoeken hoe genetische veranderingen neuronale proces uitgroei, shRNA of cDNA constructen kunnen worden geïntroduceerd in primaire neuronen via chemische transfectie of virale transductie beïnvloeden. Echter, met primaire corticale cellen zijn een heterogene pool van de cel-types (glutamaat neuronen uit verschillende lagen, remmende neuronen, gliacellen) getransfecteerd met behulp van deze methoden. Het gebruik van in utero electroporatie tot DNA-constructen te introduceren in de embryonale knaagdieren cortex zorgt voor bepaalde subsets van cellen worden gericht: terwijl elektroporatie van de vroege embryonale cortex doelstellingen diepe lagen van de cortex, elektroporatie in de late embryonale tijdstippen doelen meer oppervlakkige lagen. Verder, differentieel plaatsing van de elektroden in de hoofden van de individuele embryo's resultaten in de targeting van dorsale-mediale versus ventrale-laterale gebieden van de cortex. Na de elektroporatie, kan getransfecteerde cellen worden ontleed uit, los, en uitgeplaat in vitro voor kwantitatieve analyse van neurietuitgroei. Hier bieden wij een stap-voor-stap methode om neuronale proces uitgroei kwantitatief te meten in subsets van corticale cellen.
De basis voor het protocol in utero elektroporatie is in detail beschreven in twee andere Jupiter artikelen uit de Kriegstein lab 1, 2. Zullen we een overzicht van onze protocol voor het in de baarmoeder elektroporatie, met de nadruk op de belangrijkste details, gevolgd door een beschrijving van onze protocol dat in utero elektroporatie van toepassing op de studie van gen-functie in neuronale proces uitgroei.
Protocol
De basis voor het protocol in utero elektroporatie is in detail beschreven in een ander artikel uit de Jupiter Kriegstein lab 1, 2. Deze techniek werd oorspronkelijk beschreven in het Osumi lab 3 en ons protocol is gebaseerd op een ontwikkeld in de LoTurco lab 4. Zullen we een overzicht van de onze protocol voor in utero elektroporatie van de rat embryo's, gericht op de belangrijkste details, gevolgd door een beschrijving van onze protocol dat in utero elektroporatie van toepassing op de studie van gen-functie in neuronale proces uitgroei.
1. In utero Elektroporatie
- Voorbereiden DNA en het laden van naalden
De eerste stap in utero electroporations is om uw experiment ontwerpen om te bepalen welke DNA-constructen die u wilt injecteren. Deze methode is handig voor zowel de misexpressing of neerhalen genen van belang. Als u van plan op misexpressing of overexpressie van een gen, moet u een promotor die actief is in neuronale voorloper cellen gebruiken. Wij raden de CAGGS promotor, die bestaat uit de kip beta-actine-promotor en de CMV enhancer 5. Aangezien slechts een kleine subset van cellen worden getransfecteerd met behulp van in de baarmoeder elektroporatie, is het essentieel om ook een plasmide dat codeert voor een fluorescent eiwit zoals GFP, zodat u kunt volgen die cellen die met succes werden geëlektroporeerd. Voor het plasmide coderend voor GFP, raden wij aan de voorbereiding van het DNA bij een concentratie van 0,5 ug per microliter. Voor shRNA constructen, hebben we ontdekt dat 0,5-1,0 ug per microliter resulteert in een efficiënte bewusteloos te slaan van je gen van belang. Voor overexpressie of misexpression, gebruiken we tussen de 1,0 en 3,0 microgram per microliter, afhankelijk van de grootte van het gen en het niveau van expressie die het experiment vraagt. DNA's worden bereid met een Qiagen endotoxine-vrij prep-kit, en verdund in 1 x PBS. We injecteren ongeveer 0,5-1,0 pl per embryonale hersenen, ja, voor een nest van dieren die we 10 pi van de DNA-mengsel te bereiden voor injectie. Wij voegen een pi van Fast Green aan het DNA, zodat we de geïnjecteerde DNA te volgen.
Pulling naalden tot de juiste vorm is een kritieke stap. Walantus et al.. Hanteert een ander systeem voor het leveren van het DNA en dus hun naald prep is ook slighly anders dan de onze 1,2. De instellingen die u gebruikt om uw naalden te trekken zal afhangen van het merk van de naald trekker die je hebt. We maken gebruik van Model 750 van David Kopf. De instellingen die we gebruiken zijn: Heat 1: 9,0, Heat 2: 0, Soleniod: 0, Filament grootte 3,0 mm, Heater Nabijheid: 3 mm, Tijd: 10 sec. Eenmaal getrokken, we onze naalden snijden met een scheermesje op een ~ 45 graden hoek zodat de afstand van het grootste deel van de opening tot aan de punt is 11 mm. Vervolgens hebben we last van de DNA van de back-end van de naald. Vervolgens hebben we vullen de resterende ruimte in de naald met maïsolie. Voor DNA-injectie, gebruiken we een Picospritzer III. Afhankelijk van de exacte schuine dat is geknipt voor elke naald, zetten we de Picospritzer 4,0 tot 6,0. We maken gebruik van een voetpedaal om de onder druk staande lucht die het DNA verdrijft van de naald te leveren. - Voorbereiden van dieren voor een operatie
We maken gebruik van SPF-Sprague Dawley ratten exclusief voor deze operaties. Verschillende andere laboratoria muizen gebruik van verschillende genotypes ook. Hier beschrijven we tonen ons protocol voor elektroporatie van de E15 rat embryo's, maar in utero elektroporatie wordt routinematig uitgevoerd bij ratten in de leeftijd tussen E13 en E18. Terwijl een vroeg stadium elektroporatie doelstellingen diepe lagen van de cortex, latere fase electroporations doel meer oppervlakkige lagen.
Dieren krijgen een pre-operatieve dosis van buprenorfine (0,05-0,1 mg / kg) voor de operatie begint. Er zijn meerdere opties voor verlamming van het dier. Walantus et al.. Isofuorane maakt gebruik van inhalatie, terwijl wij regelmatig gebruik intraperitoneale injectie van ketamine (40-80 mg / kg) en xylazine (5-10 mg / kg) 1,2. Een teen snufje moet altijd worden uitgevoerd om ervoor te zorgen dat de dieren volledig verdoofd en niet reageren. Dieren worden gehouden op een verwarmde pad gedurende de chirurgische ingreep.
Het dier vacht is geschoren in de regio van de incisie, en drie keer gewassen met ethanol, gevolgd door drie keer met jodium. Een incisie gemaakt in de huid net lateraal van de middellijn, gevolgd door een incisie in de spier. De baarmoeder hoornen zijn zeer zorgvuldig blootgesteld. Ze zijn voorzichtig gepest uit van de lichaamsholte met uw vingertoppen. Houd embryo's gehydrateerd met steriele PBS terwijl ze buiten het lichaam holte. - Injecteren DNA en elektroporatie
Wanneer u voor het eerst starten met het uitvoeren van deze operaties, is het moeilijkste gedeelte vertrouwd te maken met waar je nodig hebt om het DNA te injecteren, zodat u vult de laterale ventrikels, en wennen je hoe diep Injecteer de naald in om de juiste regio te raken. Embryo's worden gemanipuleerd zachtjes met je vingertoppen, zodat u kunt identify waar het hoofd is, en als je goed kijkt zul je in staat om de middellijn hechting te zien. Dit dient als een algemeen mijlpaal die u kunt gebruiken om te bepalen waar de laterale ventrikel zich bevindt. We injecteren het DNA door de baarmoederwand en in de laterale ventrikel. We maken gebruik van een pedaal om de injectie van de DNA-controle - meerdere pulsen van het DNA worden uitgevoerd totdat de laterale ventrikel gevuld is met het DNA / kleurstof mengsel. We plaats dan peddelen elektroden aan weerszijden van het hoofd van het embryo en gebruik een andere voetpedaal om de pols te leveren over de kop van het embryo. De plaatsing van de elektroden is van cruciaal belang bij het bepalen welke regio van de cortex is geëlektroporeerd. Aangezien DNA is negatief geladen, wordt de DNA-reizen in de richting van de positieve elektrode wanneer een heffing wordt verdreven over de peddels. Afhankelijk van de precieze plaatsing van de elektroden, zullen verschillende subsets van cellen worden gericht. We regelmatig plaats de positieve elektrode de buurt van de rug-mediale posities over de grote hersenen. Echter, de LoTurco lab prachtig toonde aan dat wanneer je de elektroden in meer ventrale laterale gebieden van de hersenen kun je de cellen van de corticale-striatale grens en raakte cellen van de laterale cortex stroom 6 target. Elk embryo kan worden geëlektroporeerd, en verschillende combinaties van DNA-constructen kan gebruikt worden in elk embryo. - Hechten en post-operatieve zorg
Na de elektroporatie van alle embryo's, zijn de baarmoederhoorns voorzichtig terug naar de lichaamsholte, en zowel de spierlaag en de huid wordt gehecht. De techniek hiervoor is beschreven in Walantus et al. 1,2. Dieren worden continu gecontroleerd totdat ze herstellen van anesthesie, en de pijnstillende buprenorfine (0,05-0,1 mg / kg) is toegediend om de 8-12 uur.
2. Het kweken van geëlektroporeerd corticale neuronen
- Oogsten geëlektroporeerd hersenen en ontleden van geëlectroporeerd regio
Voor in vivo analyses volgend in utero elektroporatie, kunnen dieren worden geoogst op elk tijdstip van 24 uur na elektroporatie te vroeg na de geboorte tot volwassenheid. Echter, wanneer het kweken van primaire neuronen die oogsten we 24 uur na de elektroporatie op E16. Op dit moment worden de embryo's geëlektroporeerd uitdrukken detecteerbare niveaus van GFP.
Dieren zijn gedood met behulp van koolstof-dioxide inademing en snelle onthoofding. Embryo's ontleed uit de baarmoeder en geplaatst in HBSS met tweewaardige kationen, het bijhouden van die embryo's werden geëlektroporeerd met die DNA-plasmiden. Het is cruciaal om gefilterd HBSS, steriele buizen en platen, en geautoclaveerd tools voor dissectie gebruik. De cortex is ontleed uit en de hersenvliezen verwijderd met behulp van een microscoop in een capuchon. Deze cortex worden dan waargenomen onder een dissectiemicroscoop met de capaciteit om GFP te visualiseren. GFP positieve gebieden van de cortex worden geïdentificeerd, en wij ue een paar van Vanna schaar te snijden uit het GFP-positieve regio's van de cortex. Deze stukken zijn geplaatst in HBSS, zonder tweewaardige kationen in een 15 ml conische buis. - Dissociëren en plating neuronen
Zodra alle GFP positieve regio's zijn ontleed, wordt vervangen door HBSS met 0,25% trypsine, en geïncubeerd bij 37 graden gedurende 5 minuten. Trypsine wordt verwijderd, vervangen met plating media (DMEM + 5% FBS + Penn / strep + glutamine) en getritureerd 5-7 keer om de cellen te scheiden. Volumes gebruikt, hangt af van de hoeveelheid weefsel aanwezig is. Gescheiden cellen worden vervolgens uitgeplaat op CC2 gecoate kamer dia's. Voor twee kamer dia's, we plaat 200,000-350,000 cellen per kamer in een volume van 1,5 ml in de platen media. Na 4 uur, is plating media afgezogen en vervangen met 1,5 ml Neuronal cultuur media (Neurobasal media + B27 supplement + Glutamax + gentamycine) per kamer.
3. Het analyseren van Neuronale Proces uitgroei
- Bevestigings-en immunokleuring culturen
Met het oog op korte termijn effecs van genetische manipulatie van deze cellen te meten, oogsten we de primaire neuronen na drie dagen in vitro. Als primaire neuronen langer worden gekweekt voor aanvullende analyses, moet de helft van de media worden vervangen om de drie dagen. Voor de bevestiging van culturen, we zuigen de media uit de kamers, en bevestig de neuronen in 4% paraformaldhyde gedurende 15 minuten. Na fixatie, worden de cellen gewassen twee keer in PBS en vervolgens in het blokkeren van oplossing (2% ezel serum met 0,1% Triton X-100 in PBS) gedurende een uur. Cellen worden dan geïncubeerd in primaire antilichaam gedurende 1 uur. Voor analyses van neuronale uitgroei proces, maken we gebruik anti-bèta tubululin antilichaam om neuronen te identificeren - beta II tubuline immunokleuring labels het neruonal cellichaam, dendrieten en axonen. Cellen worden vervolgens drie keer gewassen in PBS gedurende vijf minuten, en daarna geïncubeerd in Cy3-anti-muis voor een uur, gevolgd door drie meer PBS wassen, tegenkleuring kernen met DAPI en montage. - Het meten van neurite lengte
Beelden van GFP positieve, beta-III tubuline positieve neuronen worden verworven op een Zeiss Axioskop met een MC100 camera systeem. Meerdere variabelen kunnen worden onderzocht in deze GFP positieve cellen met lengte van alle neurieten, lengte van de langste neurieten, vertakking van neurieten, grootte van de cel soma, enz. We hebben gebruik gemaakt van deze methode om neuronale uitgroei proces te analyseren op knock-down of overexpressie van genen met betrekking tot neurologische en neurodegeneratie, met een focus op de neuronale proces lengte. Om de neuronale processen uitgroei te meten, gebruiken we AxioVision LE 4.4 software (uit Zeiss). Binnen deze software, is er een optie om de "outline" tool te kiezen. Met behulp van deze tool kunt u gebruik maken van uw computer muis om de lengte van elke neuronale proces op te sporen. Het is cruciaal om het doel dat u gebruikt om een accurate meting van uw neurieten te krijgen definiëren. Voor deze analyses hebben we meestal gebruik van een 20x doelstelling.
4. Representatieve resultaten
We hebben ontdekt dat Sprague Dawley worpgrootte varieert tussen de 6 en 14 embryo's. We meestal electroporate alle van de embryo's. Elk embryo kan worden geëlektroporeerd met een andere combinatie van DNA's. Echter, we meestal electroporate minstens vier hersenen met dezelfde aandoening en het zwembad deze hersenen voordat dissociëren en plating.
We hebben ontdekt dat met deze techniek ongeveer 75% van geëlektroporeerd hersenen zijn gericht op het gewenste gebied van de cortex, of dat nu dorsale mediale of laterale ventrale cortex (figuur 1). Daarnaast hebben we vonden vroeg electroporations op E13-14 doelwit diepe laag neuronen zoals Tbr1 positieve laag VI neuronen, terwijl later electroporations doel CTIP2 positief, TBR1 negatieve laag V-cellen, en nog later electroporations doel Brn2 positief layer II / III-cellen. Een uitstekende beschrijving van de verschillende markers en uitleg van de neuronale subtype specificatie in de cortex in gevonden een artikel van Moleneaux et al. 7. Figuur 2 toont coronale secties van de hersenen geëlektroporeerd aan beide embryonale dag 15,5 of 17,5 en geoogst op postnatale dag 5. Afgebeeld in het rood is immunokleuring voor Oct6. U kunt immunostain voor de markers in de cultuur om te bevestigen wat cellaag populaties u heeft gericht. Wij hebben geconstateerd dat u kunt verwachten om dezelfde cel laag populatie van cellen target in ieder embryo van hetzelfde nest (met andere woorden, het doelwit is afhankelijk van de embryonale meetpunt in plaats van op andere technische variaties).
In de cultuur, kan het percentage van cellen die GFP positieve lopen sterk uiteen, afhankelijk van hoe conservatief bent u bij het ontleden van de GFP positieve regio (figuur 3). Echter, zelfs wanneer we zijn erg conservatief en ontleden uit alleen de GFP positieve patch van cellen, het hoogste percentage die we waarnemen is 5-10% - hoewel u het ontleden van de regio van de cortex, dat was geëlektroporeerd, cellen in slechts een laag zal worden gericht. Deze lage transfectie effciency is nuttig in het identificeren van welke processen behoren tot de electoporated cel die u analyseert. Plating cellen op deze hogere dichtheid draagt bij aan het hebben van heathier culturen, is het echter moeilijk te onderscheiden welk proces hoort bij welke cel lichaam in de GFP negatieve cellen (Figuur 3).
Als je problemen hebt het zien van al het fijne van processen van de geëlektroporeerde cellen, kunt u verhogen de concentratie van GFP DNA dat je electroporating om de expressie van GFP te verhogen, of u kunt immunostain de gedissocieerde cellen met behulp van een anti-GFP antilichaam (van Invitrogen ), samen met een Cy2 secundair antilichaam.
Figuur 1. E15.5 Sprague-Dawley ratten werden geëlektroporeerd met GFP plasmide en drie dagen later geoogst. Op basis van de plaatsing van de elektroden, zal verschillende regio's van de cortex worden gericht. AF tonen GFP-fluorescentie in hele hersenen.
Figuur 2. E15.5 (A) of E17.5 (B) Sprague-Dawley ratten werden geëlektroporeerd met GFP plasmide en oogsten op postnatale dag 5. Hersenen zijn opgelost, coupes coronaalwaarts met behulp van een vibratome (100 micron secties), en immunostained voor Oct6 (rood). A en B tonen confocale beelden van immunostained secties.
Figuur 3. E15.5 Sprague-Dawley ratten werden geëlektroporeerd met GFP plasmide. 24 uur na elektroporatie, zijn hersenen geoogst en GFP-positieve, geëlektroporeerd regio's werden ontleed en gedissocieerde, zoals beschreven in de video. Na 3 dagen in vitro werden de cellen vast en immunostained voor BIII-tubuline (rood) en vlekken kernen met DAPI (blauw) (A, C). De lengte van de langste neurieten werd gemeten met behulp van software AxioVision(B, D).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In vitro onderzoek van primaire neuronale culturen zorgen voor kwantitatieve analyses van neurietuitgroei. Om te onderzoeken hoe genetische veranderingen neuronale uitgroei proces beïnvloeden, kan shRNA of misexpression constructen worden geïntroduceerd in primaire neuronen via chemische transfectie of virale transductie. Echter, met primaire corticale cellen zijn een heterogene pool van de cel-types (glutamaat neuronen uit verschillende lagen, remmende neuronen, gliacellen) getransfecteerd met behulp van deze methoden. Het gebruik van in utero electroporatie tot DNA-constructen te introduceren in de embryonale knaagdieren cortex zorgt voor bepaalde subsets van cellen worden gericht: terwijl elektroporatie van de vroege embryonale cortex doelstellingen diepe lagen van de cortex, elektroporatie in de late embryonale tijdstippen doelen meer oppervlakkige lagen. Verder, differentieel plaatsing van de elektroden in de hoofden van de individuele embryo's resultaten in de targeting van dorsale-mediale versus ventrale-laterale gebieden van de cortex.
Targeting van specifieke lagen:
Wanneer je DNA te injecteren in de laterale ventrikel en electroporate, worden alleen de cellen die direct langs de laterale venrtricle gericht: deze cellen zijn de radiale gliale progenitor cellen van de neocortex, evenals cellen die net hebben ondergaan, hun terminal mitose. Interessant is dat bij onderzoek in de dagen na elektroporatie, gericht op de cellen die overeenkomen met het patroon van birthdated cellen. Met andere woorden, cellen die geboren worden, dat wil zeggen degenen die hun terminal mitose op de dag van electropoartion ondergaan, zijn de cellen die zijn gericht. Sinds radiale gliale cellen ook aanwezig zijn op de ventriculaire oppervlakte, zou men kunnen veronderstellen dat deze cellen zouden worden gericht, en dat alle van de nakomelingen van deze cellen moeten ook worden gericht. Echter, dit niet het geval is, latere generaties van de cellen zich niet uit GFP. Het kan zijn dat er meerdere rondes van verdeeldheid in de radiale gliale cellen verdunt het plasmide.
Toepassingen:
Deze methode is een uitstekende manier om de effecten van gen naar beneden via elektroporatie van shRNA contructs kloppen, alsmede door misexpression van cDNA constructen te onderzoeken. We zijn de toepassing van deze techniqe aan de studie van genen betrokken bij neurodegeneratie en psychiatrische ziekte. Door middel van deze techniek, introduceren we zowel wild-type en mutante vormen van genen kritisch in deze ziekten, en onderzoekt de effecten op de neuronale morfologie. Bovendien kunnen we onderzoeken de effecten van de mutatie of alternatieve splice variant uitdrukking in de afwezigheid van het endogene gen product door co-electroporating de cDNA en de shRNA construeren. Co-electorporation ook kan worden gebruikt om op genetische interacties tussen twee genproducten look: door neerhalen meerdere genen en door te proberen om het effect van neerhalen van een gen product met andere genproducten 8, 9 te redden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
De auteurs willen graag Joseph LoTurco en Dennis Selkoe bedanken voor de nuttige discussies over deze techniek. De auteurs danken de donateurs van de American Health Assistance Foundation, voor de ondersteuning van dit onderzoek.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) (Ca+2 /Mg +2 free) | GIBCO, by Life Technologies | 14185-052 | |
| 10X Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) (with Ca+2 /Mg +2 ) | GIBCO, by Life Technologies | 14065-056 | |
| 1M HEPES pH 7.4 | GIBCO, by Life Technologies | 15630-080 | |
| 100 x 15 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| 60 x 15 mm Petri Dishes | BD Biosciences | 351007 | |
| 15 mL conical vial | Sarstedt Ltd | 62-547-205 | |
| 50 mL conical vial | Sarstedt Ltd | 62-554-205 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Standard Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | |
| Curved Forceps | Fine Science Tools | 11273-20 | |
| Fine Forceps | Fine Science Tools | 11255-20 | |
| Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| .25% Trypsin-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25200 | |
| Reichert Bright-Line Hemacytometer | Hausser Scientific | 1490 | |
| Hand-Held Tally Counter | Sigma-Aldrich | Z169021 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (D-MEM) | GIBCO, by Life Technologies | 11960-051 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F4135 | |
| Penicillin-Streptomycin | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| L-glutamine | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| NEUROBASAL Medium | GIBCO, by Life Technologies | 21103-049 | |
| B-27 Serum-Free Supplement | GIBCO, by Life Technologies | 17504-044 | |
| GlutaMAX -I Supplement | GIBCO, by Life Technologies | 35050-061 | |
| Gentamicin Reagent Solution | GIBCO, by Life Technologies | 15750-060 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | |
| Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T9284 | |
| Donkey Serum | Jackson ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| beta-III tubulin antibody | Chemicon International | MAB1637 | |
| MAP2 antibody | Chemicon International | AB15452 | |
| Donkey Cy3 anti-mouse | Jackson ImmunoResearch | 715-166-151 | |
| Donkey Cy2 anti-chicken | Jackson ImmunoResearch | 703-226-155 | |
| DAPI | GIBCO, by Life Technologies | D3571 | |
| CC2 Coated Two-Chamber Slides | Lab-Tek | 154852 | |
| Fluorescent Mounting Media | KPL Inc | 71-00-16 | |
| 24 x 60 mm Micro Cover Glasses | VWR international | 48393-106 | |
| Clear nail polish | Electron Microscopy Sciences | 72180 | |
| Ketamine | Henry Schein | 995-2949 | |
| Xylazine | Henry Schein | 4015809TV | |
| buprenorphine | Henry Schein | 1118217 | |
| Picospritzer III | Parker Hannifin Corporation | ||
| BTX square wave electroporator | Fisher Scientific | BTXECM830 | |
| Tweezertrodes, 7 mm, platinum | Harvard Apparatus | 450488 |
References
- Walantus, W., Castaneda, D., Elias, L., Kriegstein, A. In utero intraventricular injection and electroporation of E15 mouse embryos. J Vis Exp. , (2007).
- Walantus, W., Elias, L., Kriegstein, A. In utero intraventricular injection and electroporation of E16 rat embryos. J Vis Exp. , (2007).
- Takahashi, M., Sato, K., Nomura, T., Osumi, N. Manipulating gene expressions by electroporation in the developing brain of mammalian embryos. Differentiation. 70 (4-5), 155-1562 (2002).
- Bai, J., Ramos, R. L., Ackman, J. B., Thomas, A. M., Lee, R. V., LoTurco, J. J. RNAi reveals doublecortin is required for radial migration in rat neocortex. Nat Neurosci. , 1277-1283 (2003).
- Okada, A., Lansford, R., Weimann, J. M., Fraser, S. E., McConnell, S. K. Imaging cells in the developing nervous system with retrovirus expressing modified green fluorescent protein. Exp Neurol. 156 (2), 394-406 (1999).
- Bai, J., Ramos, R. L., Paramasivam, M., Siddiqi, F., Ackman, J. B., LoTurco, J. J. The role of DCX and LIS1 in migration through the lateral cortical stream of developing forebrain. Dev Neurosci. , 144-156 (2008).
- Molyneaux, B. J., Arlotta, P., Menezes, J. R., Macklis, J. D. Neuronal subtype specification in the cerebral cortex. Nat Rev Neurosci. , 427-437 (2007).
- Young-Pearse, T. L., Bai, J., Chang, R., Zheng, J. B., Loturco, J. J., Selkoe, D. J. A Critical Function for -Amyloid Precursor Protein in Neuronal Migration Revealed by In Utero RNA Interference. J Neurosci. 27, 14459-14469 (2007).
- Young-Pearse, T. L., Chen, A. C., Chang, R., Marquez, C., Selkoe, D. J. Secreted APP regulates the function of full-length APP in neurite outgrowth through interaction with integrin beta1. Neural Develop. 3, 15-15 (2008).
