여성 A. aegypti 모기에의 dsRNA의 분사

Summary

역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 뎅그열 바이러스를 항구 여성 A. aegypti 모기로 dsRNA를 주입하기 위해 제임스 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. , 주사 바늘을 보정 사출 설정을 조작하고, 흉부에 dsRNA를 주입에 대한 기술은 그림이다.

Abstract

역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 뎅그열 바이러스를 항구 여성 A. aegypti 모기로 dsRNA를 주입하기 위해 제임스 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. , 주사 바늘을 보정 사출 설정을 조작하고, 흉부에 dsRNA를 주입에 대한 기술은 그림이다.

Protocol

1. 유리 모세관 튜브를 당겨 microinjection의 바늘을 만듭니다. 우리는 서터 악기 CO에서 바늘 풀러 (모델 P - 2000)를 사용합니다. 바늘 풀러 프로그램 사양은 다음과 같습니다
   
   열 : 275
   fil : 3
   벨 : 37
   델 : 250
   pul : 125
   
   
2. 바늘에 물을 알려진 볼륨 (예, 1 μl)로드하고 수동으로 벌금 샤피로 규모를 표시합니다.
3. 모기에 대한 사후 분사 컵을 설정합니다. 먼저 1000 μl 피펫 팁의 해제 outmost 팁 잘라. 그런 다음, 컵의 측면에 구멍을 잘라 컵에 피펫 팁의 나머지 부분을 삽입합니다. 컵 위에 그물이나 뚜껑을 넣어.
4. 얼음 두 개의 스티로폼 상자를 채웁니다. 플레이스 아이스 stereomicroscope 아래의 상자 # 1과 얼음에 유리 watchglass를 놓습니다.
5. CO ₂ 얼음 상자 # 2 성인과 장소 한잔과 함께 성인 모기를 마취.
6. dsRNA의 주사 바늘을 준비합니다. (아래 사출 블록의 설명 참조)을 분사 블록의 플라스틱 호스에 dsRNA 가득 바​​늘을 넣어.
7. 컵에서 집게로 시계 유리에 anesthetized 모기로 이동합니다. 모기 표피에 주사 바늘 끝을 봐라. 이 모기를 폐기하십시오.
8. 주사의 경우 주사 바늘은 모기의 흉부에 삽입됩니다. 무료 손으로, "사출 위치"를 "휴식 위치"에서 인젝터에 밸브를 조정하여 dsRNA의 원하는 금액을 주입 때까지 플런저를 압축.
9. 장소는 이후 사출 컵에 모기를 주입.

사출 블록 설정

1. 신더 블록 50 ML의 주사기를 수정.
   
2. 최소한 2 공기 아울렛과 주사기의 끝에 조절 1 - 웨이 밸브를 연결합니다.
   
3. 1 에어 콘센트에 밀폐 플라스틱 호스를 연결합니다.
   
4. 호스의 무료 결국에 micropipette 어댑터를 삽입합니다.