Biology

Инъекция дсРНК в женский А. Комары aegypti

Published: July 4, 2007 doi: 10.3791/215

Brian M. Luna¹, Jennifer Juhn¹, Anthony A. James²

¹Department of Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine (UCI), ²Department of Molecular Biology and Biochemistry, Department of Microbiology and Molecular Genetics, University of California, Irvine (UCI)

Summary

Обратные генетические подходы оказались чрезвычайно полезными для определения того, какие гены лежащие в основе сопротивления вектора патогенов в комаров. Это видео показывает протокол метод, используемый Джеймсом лаборатории, чтобы придать дсРНК в женские A. aegypti комаров, которые гавани вируса денге. Техника для калибровки инъекции иглами, манипулируя инъекции установки, и потребителей инъекционных дсРНК в грудной клетки показано на рисунке.

Abstract

Protocol

Сделать микроинъекции иглы, потянув стеклянные капилляры. Мы используем иглы съемник из СО Инструмент Саттер, (модель P-2000). Иглы спецификации съемник программы являются:

тепла: 275
Фил: 3
Vel: 37
дель: 250
Пул: 125
Нагрузка известного объема (например, 1 мкл) воды в хвое и вручную знак масштаба с тонкой шулер.
Настройка после инъекции чашка для комаров. Первое сокращение outmost наконечник офф 1000 мкл кончиком пипетки. Затем вырезать отверстие в сторону чашку и вставить оставшуюся часть пипетки в чашке. Положите чистый или крышки на верхней части чашки.
Заполните два пенополистирола коробки со льдом. Место ледовой коробке № 1 под стереомикроскопа и место стекла препаратного стекла на льду.
Обезболить взрослых комаров с CO ₂ и место чашки вместе со взрослыми в ледовой коробке # 2.
Подготовка игла для инъекций дсРНК. Положите иглу заполнены дсРНК на пластиковый шланг инъекций блока (для описания инъекции блока см. ниже).
Перемещение наркозом комара от чашку часовым стеклом щипцами. Перерыв инъекций иглой на противомоскитные кутикулы. Сбросьте эту комара.
Для инъекций, игла вводится в грудную клетку от комаров. Свободной рукой, отрегулируйте клапан инжектора от «позе покоя» до «инъекций позицию" и сжатия поршнем до необходимого количества дсРНК были введены.
Место инъекции комаров в после инъекции чашку.

Инъекция блок создан

Fix 50 мл шприца шлакоблок.
Прикрепить регулируемый 1-ходовой клапан до конца шприца, по крайней мере 2 выхода воздуха.
Присоединить шланг герметичной пластиковой до 1 для выхода воздуха.
Вставьте микропипетки адаптер в свободный конец шланга.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.