Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

בידוד של תאים אנדותל valvular

Published: December 29, 2010 doi: 10.3791/2158

Summary

אנו מספקים שיטה בידוד אוכלוסיות culturing טהור של שסתום הלב תאים אנדותל (VEC). VEC יכול להיות מבודד צדי סף או העלעל ומיד הבאה, תא ביניים הבסיסית (ויק) בידוד היא פשוטה.

Abstract

שסתומי הלב הוא האחראי הבלעדי לשמירה על זרימת דם חד כיווני דרך מערכת הלב וכלי הדם. דקים אלה, סיבי רקמות חשופים מדגיש מכני משמעותי כפי שהם לפתוח ולסגור כמה מיליארדי פעמים על תוחלת חיים. סיבולת מדהימה של רקמות אלה נובע valvular התושב האנדותל (VEC) ותאי ביניים (ויק), כי כל הזמן לתקן לשפץ בתגובה לאותות מכני ביולוגי המקומית. רק לאחרונה התחלנו להבין את התנהגות ייחודית של תאים אלה, אשר בניסויים במבחנה יש תפקיד מפתח. מאתגר במיוחד הוא בידוד תרבות VEC. טיפול מיוחד יש להשתמש מרגע רקמה יוסר המארח באמצעות ציפוי הסופי. כאן אנו מציגים פרוטוקולים בידוד ישיר, בידוד צד מסוים, תרבות, ואימות של אוכלוסיות טהורות של VEC. אנו משתמשים עיכול אנזימטי ואחריו טכניקה גירוד עדין ספוגית כדי לסלק משטח תאים בלבד. תאים אלו נאספים אז לתוך צינור ו centrifuged לתוך גלולה. גלולה היא resuspended אז מצופה לתוך צלוחיות תרבות טרום מצופה מטריצה ​​אני קולגן. פנוטיפ VEC הוא אושר על ידי מגע עכבות הצמיחה ביטוי של סמנים ספציפיים כגון PECAM1 האנדותל (CD31), פון Willebrand Factor (vWF), ואת הביטוי השלילי של אקטין אלפא שריר חלק (α-SMA). המאפיינים של פונקציונלי VEC קשורים עם רמות גבוהות של LDL acetylated. בניגוד לתאי אנדותל כלי הדם, VEC יש יכולת ייחודית להפוך mesenchyme, אשר בדרך כלל מתרחשת במהלך היווצרות שסתום עובריים 1. זה יכול להתרחש גם במהלך ומחוברות משמעותית לפרסם ממושך בתרבות חוץ גופית, ולכן הטיפול צריך להיעשות כדי המעבר ליד או מפגש. לאחר בידוד VEC, אוכלוסיות טהור של ויק אז יכול להיות נרכש בקלות.

Protocol

1. הכנה

  1. החיטוי במכשיר מכוסה מגש את הפריטים הבאים:
    1. משוננת מלקחיים רקמה - לטיפול ברקמת העלון
    2. רקמות מספריים (8 ס"מ) - לקבלת זמירה רקמות העלון cusps
    3. ספוגיות כותנה - בשביל לבודד את שכבת האנדותל מתוך העלון או סף
  2. בצע פתרון collagenase סטרילית
    1. הוסף 4.0 גרם של אבקת DMEM ל 250 מ"ל מים MΩ 18.
    2. מוסיפים 1.11 גרם של סודיום ביקרבונט.
    3. הוסף (600 U / mL) 180,000 יחידות של collagenase.
    4. הוסף 1% (3mL) פניצילין / סטרפטומיצין.
    5. התאם את ה-pH של התמיסה עד 7.2.
    6. תביא את הפתרון עד 270 מ"ל.
    7. לעקר את הפתרון על ידי עובר דרך מסנן 0.2 מיקרומטר.
    8. הוסף 10% (30 מ"ל) של נסיוב סטרילי שור העובר.
  3. הפוך את תא סטרילי בינוני אנדותל
    1. הוסף 6.7 גרם של אבקת DMEM ל 400 מ"ל מים MΩ 18.
    2. מוסיפים 1.85 גרם של סודיום ביקרבונט.
    3. הוסף (50 U / mL) 25,000 יחידות של הפרין.
    4. הוסף 1% (5 מ"ל) פניצילין / סטרפטומיצין.
    5. התאם את ה-pH של התמיסה עד 7.2.
    6. תביא את הפתרון עד 450 מ"ל.
    7. לעקר את הפתרון על ידי עובר דרך מסנן 0.2 מיקרומטר.
    8. הוסף 10% (50 מ"ל) של נסיוב סטרילי שור העובר.
  4. הפוך את תא סטרילי בינוני ביניים
    1. הוסף 13.37 גרם של אבקת DMEM ל 800 מ"ל מים MΩ 18.
    2. הוסף 3.7 גרם סודיום ביקרבונט.
    3. הוסף 1% (10 מ"ל) פניצילין / סטרפטומיצין.
    4. התאם את ה-pH של התמיסה עד 7.2.
    5. תביא את הפתרון עד 900 מ"ל.
    6. לעקר את הפתרון על ידי עובר דרך מסנן 0.2 מיקרומטר.
    7. הוסף 10% (100 מ"ל) של בסרום שור סטרילית.

2. בידוד של עלונים שסתום הלב

  1. שורש והבלו אבי העורקים מיד בסביבה נקייה מחיידקים מהלב לאחר הקרבה.
  2. ביסודיות לשטוף את שורש האאורטה דם עם DPBS סטרילי קר. זה הכרחי להסיר את כל מרכיבי הדם מוקדם ככל האפשר להגביל את מותו VEC וזיהום חיידקי. אנטיביוטיקה antimycotics לא מומלץ בשלב זה, שכן הם מזיקים אל VEC.
  3. בודד עלונים שסתום (3 לכל שסתום) ישירות מן השורש ומכניסים צינורית סטרילית 15 מ"ל חרוטי מלא 12 DPBS קר מ"ל. לנער מספר פעמים כדי להסיר שאריות ולמלא עם DPBS טריים.
  4. התחבורה בחזרה למעבדה על הקרח.
  5. בהגיעם במעבדה, במקום מכולה עם הרקמה מתחת למכסה המנוע סטרילית.

3. בידוד של שכבת האנדותל

  1. מלאו צלחת 35mm סטרילי עם 3mL של פתרון collagenase קר לכל שסתום (3 כרוזים).
  2. מניחים את כל שלושת עלונים מהצינור 15 מ"ל לתוך צלחת מלאה הפתרון collagenase.
  3. דגירה הרקמה למשך 5-10 דקות ב 37 ° C.
  4. בעדינות להסיר את שכבת האנדותל ידי סיבוב משטח סטרילי יבש על פני השטח של העלון. את כיוון הסיבוב ואת כמות להחיל גזירה היא קריטית עבור טוהר המדגם שלך. הסיבוב של ספוגית צריך להיות בכיוון ההפוך לתנועה קווית של היד שלך ליצור גזירה מבוקר. גזירה זה מה מרימה את לתאי אנדותל של הרקמה. כמות הכוח המופעל צריך להיות מספיק כדי להרגיש את ההתנגדות של הרקמה, אבל לא לחדור את הקרום במרתף.
  5. מדי פעם, להספיג את ספוגית בתוך הפתרון collagenase כדי לסלק תאים הסיבים קצה. לאחר בניקוי תושלם, את המרקם של שכבת האנדותל צריך להרגיש קצת חלק יותר מאשר לפני כן.
  6. אסוף את ההשעיה תא / collagenase והעברת צינור חדש 15 מ"ל סטרילי.
  7. צנטריפוגה צינורות ב 1000 סל"ד במשך 5 דקות עד גלולה כל התאים מבודדים לשאוב supernatant. אם לבודד תאים ביניים וכן, לבצע את הפרוטוקול בעוד תאים אלה נמצאים centrifuged.
  8. הוסף 3 מ"ל של מדיום חזירי האנדותל אל צינורות 15 מ"ל, צנטריפוגה בפעם השנייה, התקשורת לשאוב. זה צנטריפוגה second עוזר לסנן חלק מהחומר לא רצויות כגון סיבים קצה.
  9. Re-להשעות לתאי אנדותל centrifuged ב 5 מ"ל של מדיום חזירי האנדותל צלחת התאים בבקבוק T-25 מראש מצופה קולגן (שימוש 1 בקבוק לכל צינור צנטריפוגות).
  10. בואו התאים לגדול לפחות 2-3 ימים לפני שינוי בינוני האנדותל. זה עוזר לתאים להתאושש מאז לחלק את תהליך הבידוד היא קשה למדי התשואה התא עלול להיות נמוך. זה קריטי לתאי המעבר ליד מפגש מאז עיכוב הקשר יכול להוביל שינוי התא.

4. הכנת תבשיל 60 מ"מ התרבות בידוד ספציפיות סייד

  1. קו 60 מ"מ זכוכית פטרי מנות עם רדיד אלומיניום (2 כוס מנות לכל leafle t). רדיד אלומיניום מסייע להסיר את פרפין, כך צלחת פטרי מזכוכית ניתן לעשות שימוש חוזר עבור isolations אחרים.
  2. המקום חרוזים פרפין בתוך המנות, כמחצית מלא, כיסוי מעוקר.
  3. לאחר מעוקר הוא מלא פרפין הוא נמס, להעביר את הרכב המנה על משטח שטוח מגניב. כמו פרפין מתקררת, להקשיח אותו רצון ליצור שכבה כי יתמוך דקירות מחט.
  4. לאחר 30 דקות, צלחת מעוקרים יכולים לשמש חדר בידוד כדי לשתק את הרקמה העלון.

5. בידוד של שכבת האנדותל לוואי ספציפיות

  1. הסר את כרוזים מן הצינורות 15ml ומניחים על צלחת מוכן תרבות 60mm לבידוד ספציפי בצד.
  2. לתפעל את העלון כך שהצד ventricularis היא עם הפנים כלפי מטה על פני השטח פרפין עוזב את הצד fibrosa חשוף. הצמד את הקצוות של העלון כדי לחשוף את שכבת האנדותל.
  3. מניחים כמה טיפות של collagenase קר על פני השטח (הפונה כלפי מעלה) כל האנדותל דגירה הרקמה למשך 5-10 דקות ב 37 ° C.
  4. כמו בעבר, בעדינות להסיר את שכבת האנדותל ידי סיבוב משטח סטרילי יבש על פני השטח של העלון. את כיוון הסיבוב ואת כמות להחיל גזירה היא קריטית עבור טוהר המדגם שלך. הסיבוב של ספוגית צריך להיות בכיוון ההפוך לתנועה קווית של היד שלך ליצור גזירה מבוקר. גזירה זה מה מרימה את לתאי אנדותל של הרקמה ולא שום דבר אחר. כמות הכוח המופעל צריך להיות מספיק כדי להרגיש את ההתנגדות של הרקמה, אבל לא לחדור בתוך הרקמה.
  5. מדי פעם, להספיג את ספוגית בתוך הפתרון collagenase כדי לסלק תאים הסיבים קצה. לאחר בניקוי תושלם, את המרקם של שכבת האנדותל צריך להרגיש קצת חלק יותר מאשר לפני כן.
  6. אסוף את ההשעיה תא / collagenase והעברת צינור חדש 15 מ"ל סטרילי. ציין סגוליות צד על התווית (כרוזים מן שסתום אותו ניתן ונקווה יחד).
  7. מעבירים את העלונים לצלחת תרבות חדשה כך שהצד ventricularis נחשפת עכשיו וחזור על שלבים (5.3-5.6).
  8. לאחר השעיית כל תא / collagenase נאסף, צנטריפוגה צינורות ב 1000 סל"ד עבור 5minutes כדי גלולה כל התאים מבודדים לשאוב supernatant. אם לבודד תאים ביניים וכן, לבצע את הפרוטוקול בעוד תאים אלה נמצאים centrifuged.
  9. הוסף 3 מ"ל של מדיום חזירי האנדותל אל הצינורות, צנטריפוגה בפעם השנייה, ואת לשאוב התקשורת. זה צנטריפוגה second עוזר לסנן חלק מהחומר לא רצויות כגון סיבים קצה.
  10. Re-להשעות לתאי אנדותל centrifuged ב 5 מ"ל של מדיום חזירי האנדותל צלחת התאים בבקבוק T-25 מראש מצופה קולאז' (1 להשתמש בבקבוק לכל צינור צנטריפוגות).
  11. בואו התאים לגדול לפחות 2-3 ימים לפני שינוי בינוני האנדותל. זה עוזר לתאים להתאושש מאז לחלק את תהליך הבידוד הוא קשה למדי. אם אתה מבחין התשואה יהיה נמוך מאוד, שקול להעביר את בקבוקון קטן או צלחת יפה מאז תאים תאים הידבקות מקדם צמיחה התא. זכור המעבר ליד מפגש מאז עיכוב הקשר יכול להוביל שינוי התא.

6. בידוד של תאים ביניים

  1. מלאו צנטריפוגה סטרילי 15 מ"ל עם שפופרת 10 מ"ל של תמיסת collagenase לכל שסתום (3 כרוזים).
  2. לאחר שטיפת כרוזים בתאי האנדותל, מיד למקם אותם בצינור 15 מ"ל מתאים עם פתרון collagenase.
  3. דגירה של כ -12 עד 18 שעות (להתסיס בעדינות אם רוצים).
  4. מערבבים בעדינות את הרקמה מושפל עם טפטפת סרולוגיות עד ההשעיה תא / collagenase הופך הומוגני. Homogenization זה עוזר לשבור את הרקמות ולשחרר את התאים ביניים.
  5. צנטריפוגה רקמת מתעכל במשך 5 דקות ב 1000 סל"ד ו לשאוב supernatant.
  6. הוסף 5 מ"ל בינוני ביניים חזירי את צינורות 15 מ"ל, צנטריפוגה בפעם השנייה, ואת לשאוב supernate.
  7. Re-להשעות לתאי אנדותל centrifuged ב 5 מ"ל של מדיום חזירי ביניים צלחת התאים T-75 צפחת (1 להשתמש בבקבוק לכל צינור צנטריפוגות).
  8. בואו התאים לגדול לפחות 1-2 ימים לפני שינוי המדיום הסלולרי ביניים. יהיו פסולת רקמות הרבה יותר מאשר עם לתאי אנדותל, אך זה צפוי. התאים צריכים גם לגדול מהר יותר מאשר מפגש בתאי האנדותל בגלל התשואה התא הטבע שלהם.

7. נציג תמונות

איור 1
באיור 1. מורפולוגיה של תאים מבודדים בבידוד בבית 2-3 ימים הדואר. (א) VEC מפגינים מורפולוגיה אנדותל טיפוסי הטופס אשכולות כדי לקדם צמיחה. (ב) ויק מורפולוגיה דומה myofibroblasts אשר בדרך כלל ציר בצורת להתפשט באופן שווה על פני הבקבוק.

class = "jove_content"> איור 2
איור 2. מורפולוגיה של תאים מבודדים בבית confluency. (א) VEC מפגינים מורפולוגיה אופיינית האנדותל אשר בדרך כלל המרוצף וקשר צמיחה עכבות. (ב) ויק מורפולוגיה דומה myofibroblasts אשר בדרך כלל בצורת כישור ולא לפנות צמיחה עכבות.

איור 3
איור 3. המאפיינים פונקציה של תאים מבודדים 6. (א) VEC קשורים עם רמות גבוהות של LDL ספיגת acetylated (אדום). (ב) ויק קשורים עם רמות נמוכות של LDL ספיגת acetylated.

איור 4
איור 4. סמנים נייד של תאים מבודדים 6. (א) פנוטיפ VEC הוא תרם מכתים חיובית פון Willebrand Factor (ירוק), כחול (גרעינים). (ב) פנוטיפ ויק הוא תרם מכתים שלילי גורם Willebrand פון.

איור 5
איור 5. סמנים נייד של תאים בודדים. (א) פנוטיפ VEC הוא תרם מכתים שלילי אלפא SMA (ירוק), כחול (גרעינים). (ב) פנוטיפ ויק הוא תרם מכתים חיובית SMA אלפא.

דיסוציאציה Agent דיסוציאציה טכניקה תא אוסף Cell כמות תא
טוהר
זיהום
EDTA (3mm) ללא CaCl 2 5, 20, 60 דקות.
לפני CaCl 2 בנוסף
20, 60, 120 דקות. לפני איסוף - + / - + + +
EDTA (6 מ"מ) ללא CaCl 2 5, 20, 60 דקות.
לפני CaCl 2 בנוסף
20, 60, 120 דקות. לפני איסוף + / - + + + +
טריפסין-EDTA (0.5 g / L) 5, 10, 15 דקות.
לפני שחרור משרות
בינוני נאסף מיד + + + +
Collagenase II (300 U / mL) 5, 10, 15 דקות.
לפני שחרור משרות
בינוני נאסף מיד - + + + - + +, + +
Collagenase II (600 U / mL) 5, 10, 15 דקות.
לפני שחרור משרות
בינוני נאסף מיד + + +, +
+ +
+ +, + +,
-
-

טבלה 1. תוצאות ראשוניות של פרוטוקולים valvular בידוד תא האנדותל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הבנה של הביולוגיה valvular נפגעה על ידי קשיים טכניים בידוד אוכלוסיות culturing טהור של בתאי האנדותל valvular. טכניקות בידוד אופייניים לערב עיכול אנזימטי של מטריקס הבסיס הבסיסי או כימי דיסוציאציה של אג"ח דבק אנדותל 2,3. ניסויים ראשוניים בידוד איכותית הוערכו על ידי סוכנים שונים דיסוציאציה תקופות הדגירה. תוצאות ניסויים אלה הראו כי EDTA (או טריפסין-EDTA) הדגירה של עד 60 דקות הצליח בכל התאים פירוק. עם זאת, מערכת העיכול collagense למשך 5-10 דקות הוכיחה את יעילותה לאחזור מספר שמיש של טהור לתאי אנדותל valvular (טבלה 1). אנזים פתרונות אחרים הוצעו כגון להשלים עם dispase, metalloprotease מסוגל למקד ספציפית לסוג קולגן IV ו פיברונקטין שהם המרכיבים העיקריים של המטריצה ​​בבסיס 4. תאים המשוחררים יכול להיות מטוהרים באמצעות עיבוד נוספים, כגון הרחבת משובטים או שיטות בחירה מגנטי 5.

ראיות אחרונים הראו כי שסתום אבי העורקים מכיל חלוקה הטרוגנית מאוד של סוגי תאים, אשר יכול להוביל לקושי כאשר להערכת הפנוטיפים הסלולר. בניגוד האנדותל של כלי הדם, VEC צריך גם ליישר בניצב לכיוון של זרימת הנוזל 6. פרופילים תעתיק של VEC תלויים הספציפיות הן בצד והסביבה מכני. אבי העורקים לעומת הצד האנדותל חדרית זוהו כבעלי פנוטיפים אנדותל נפרדים in vivo. הביטוי פרופילים הגן מראים כי האנדותל על שסתום אבי העורקים בצד נוטה לצד הסתיידות אך מוגן מפני ייזום דלקתית על ידי מנגנוני antioxidative 7. בנוכחות זרימה גזירה, בתאי האנדותל מווסת את הגנים calcific כגון BMP-4 ו POSTN לשמור על שקט הפנוטיפ שלהם. תזרים שאר נראה לפעול כאמצעי הגנה מפני סוגי תאים אנדותל בידול chondro / osteogenic, שהוא הסבר אפשרי של הגנה על חדרית אנדותל 8.

Isolations המשובטים מן האדם שסתומי העורקים ריאתי הציעו מגוון של אבות אנדותל קיימים לבטא כמויות שונות של α-SMA, CD144 ו CD31. חלקם הוצגו המעבר פנוטיפ mesenchymal, מקביל EMT, במיוחד בתגובה TGFB2 בבית בדרגות שונות 9. בידוד המשובטים להוכיח להיות דרך יעילה לטיהור אוכלוסיות תאים, אך בוחר עבור subpopulations ספציפיים שייתכן הייחודיות פנוטיפי זה לא להכליל. זה חשוב מאוד עבור האנדותל פני השטח, כמו הרבה סוגי תאים אחרים נמצאים בכמות שונה מאפס. אלה כוללים לתאי אנדותל במחזור, מח העצם תאים שמקורם, ומונוציטים, אשר כולם יכולים להביע אחת או יותר האנדותל כמו מאפיינים 10, 11. בנוסף, מבודד עוברים משובטים חלוקות תא רבות להגיע למספרים סלולריים מתאים לניסוי, שבו רבים נקודת אי - אבי פנוטיפים יהיו senesced או dedifferentiated. לכן, בידוד תא ראשוני כגון המתואר כאן נותן את הייצוג הטוב ביותר של אוכלוסיית הילידים שסתום האנדותל. האתגר יהיה לברר האם משנה פנוטיפים העולות הן פנימית או לצאת מן ההפרש תגובות לגירויים חיצוניים. עם גישה זו, אחד צריך להיות מסוגל לקבוע השכיחות היחסית של כל והשלכותיהם בתגובה טיפולים ספציפיים.

שיטות מיון מגנטי סיפקו גם דרך לטהר אוכלוסיות תאים, אך הם תלויים במידה רבה על תנאי תיוג נוגדן והאוכלוסייה תא נגזר. עם שסתום וגובר הבנה אוכלוסיות תאים, סמנים האנדותל כגון CD31, CD144, ושלילי α-SMA עלול שלא להספיק כדי למיין לאוכלוסייה valvular טהור. Isolations המשובטים הוכיחו כי תאי האנדותל מכילים קשת רחבה של ביטוי סמן המוביל דיוקים אפשרי עם מיון. כאשר בתאי האנדותל מיון מוינו עבור CD31, טוהר המדגם עלה ל 96% כמעט. עם זאת, תאים ביניים החלו להופיע בתרבויות צמח יום אחד לאחר המפגש 4. למרות מיון המגנטי הוא אופציה, יש לשקול מיון עבור סמנים נוספים כגון רמות ביטוי חיובי עבור CAD-11 ושלילי עבור periostin 6.

אנו מספקים שיטה בידוד אוכלוסיות culturing טהור של שסתום הלב תאים אנדותל (VEC). באמצעות שיטה זו, עיבוד נוספות כגון בידוד המשובטים ושיטות בחירה מגנטי ניתן לבטל להשיג האוכלוסייה נציג של הצד לתאי אנדותל ספציפיים. מורפולוגיה Cell, מאפיינים פונקציונליים, סמנים מרובים, רמות הביטוי צריכים להיות בחשבון כאשר מעריכים את האוכלוסייה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgments

מחקר זה נתמך על ידי פרס קריירה NSF, הקרן Hartwell, ואת איגוד הלב האמריקני (# 0830384N).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dulbecco’s Modified Eagle Medium Mediatech, Inc. 50-103-PB
Fetal Bovine Serum GIBCO, by Life Technologies 26140
Penicillin Streptomycin GIBCO, by Life Technologies 15140-122
0.25% Trypsin-EDTA GIBCO, by Life Technologies 25200
Heparin Sodium Salt Sigma-Aldrich H4784-1G
Collagenase Type 2 Worthington Biochemical LS004176
DPBS GIBCO, by Life Technologies 21300-058
Rat Tail Collagen BD Biosciences 354236
Critical Swabs VWR international 89031-270
Sodium Bicarbonate Sigma-Aldrich 55761
T25 Flasks BD Biosciences 353018
T75 Flasks BD Biosciences 353136
24 Well Plate Falcon BD 353047
60x15 mm Dishes VWR international 25384-092
60x15 Glass Dishes VWR international 89000-310
Paraffin Embedding Wax Electron Microscopy Sciences 19304-01
Precision Glide Needles BD Biosciences 305165
500 mL Nalgene Filters VWR international 73520-985
1L Nalgene Filters VWR international 73520-986
Tissue Forceps Fine Science Tools 11023-15
FSC Tweezers #5 Fine Science Tools 11295-00

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Thompson, R. P., Fitzharris, T. P. Morphogenesis of the truncus arteriosus of the chick embryo heart: the formation and migration of mesenchymal tissue. Am J Anat. 154, 545-556 (1979).
  2. Johnson, C. M., Fass, D. N. Porcine cardiac valvular endothelial cells in culture: A relative deficiency of fibronectin synthesis in vitro. Lab Invest. 49 (5), 589-598 (1983).
  3. Manduteanu, I., Popov, D., Radu, A., Simionescu, M. Calf cardiac valvular endothelial cells in culture: production of glycosaminoglycans, prostacyclin and fibronectin. J Mol Cell Cardiol. 20 (2), 103-118 (1988).
  4. Cheunyg, W. Techniques for isolating and purifying porcine aortic valve endothelial cells. JHVD. 17 (6), 674-681 (2008).
  5. Paranya, G., Vineberg, S., Dvorin, E., Kaushal, S., Roth, S. J., Rabkin, E., Schoen, F. J., Bischoff, J. Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro. Am J Pathol. 159 (4), 1335-1343 (2001).
  6. Butcher, J. T., Penrod, A., Garcia, A. J. M., Nerem, R. M. Unique morphology and focal adhesion development of valvular endothelial cells in static and fluid flow environments. Arterioscler Thromb Vasc Bio. 24 (1), 1429-1434 (2004).
  7. Simmons, C. A., Grant, G. R., Manduchi, E., Davies, P. F. Spatial heterogeneity of endothelial phenotypes correlates with side-specific vulnerability to calcification in normal porcine aortic valves. Circ Res. 96, 792-799 (2005).
  8. Butcher, J. T., Tressel, S., Johnson, T., Turner, D., Sorescu, G., Jo, H., Nerem, R. M. Transcriptional Profiles of Valvular and Vascular Endothelial Cells Reveal Phenotypic Differences: Influence of Shear Stress. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26, 69-69 (2006).
  9. Parachuri, S., Yang, J. H., Aikawa, E., Melero-Martin, J. M., Khan, Z. A., Loukogeorgakis, S., Schoen, F. J., Bischoff, J. Human Pulmonary Valve Progenitor Cells Exhibit Endothelial/Mesenchymal Plasticity in Response to Vascular Endothelial Growth Factor-A and Transforming Growth Factor-β2. Circ Res. 99 (8), 861-869 (2006).
  10. Shi, Q. Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells. Blood. 92, 362-367 (1998).
  11. Rehman, J., Li, J., Orschell, C. M., March, K. L. Peripheral blood endothelial progenitor cells are derived from monocyte/macrophages and secrete angiogenic growth factors. Circulation. 107, 1164-1169 (2003).

Tags

ביולוגיה של התא גיליון 46 תא האנדותל ספציפיות סייד בידוד שסתום אבי העורקים הלב Fibrosa עיכול Ventricularis אנזימתי
בידוד של תאים אנדותל valvular
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gould, R. A., Butcher, J. T.More

Gould, R. A., Butcher, J. T. Isolation of Valvular Endothelial Cells. J. Vis. Exp. (46), e2158, doi:10.3791/2158 (2010).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter