Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Injectie van dsRNA in Vrouw A. aegypti Mosquitos

doi: 10.3791/215 Published: July 4, 2007

Summary

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de James lab dsRNA injecteren in vrouwelijke A. aegypti muggen die de dengue virus haven. De techniek voor het kalibreren van injectienaalden, het manipuleren van de injectie setup, en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Abstract

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de James lab dsRNA injecteren in vrouwelijke A. aegypti muggen die de dengue virus haven. De techniek voor het kalibreren van injectienaalden, het manipuleren van de injectie setup, en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Maak micro-injectie naalden door te trekken glazen capillaire buizen. We maken gebruik van een naald trekker van Sutter Instrument CO, (Model P-2000). De naald trekker programma specificaties zijn:

    warmte: 275
    fil: 3
    vel: 37
    del: 250
    pul: 125

  2. Plaats een bekend volume (bv. 1 pi) van water in de naalden en handmatig de schaal markeren met een fijne Sharpie.
  3. Het opzetten van een post-injectie beker voor de muggen. Eerste snede het uiterste puntje af van een 1000 ui pipetpunt. Dan, een gat in de zijkant van een kopje en voeg het resterende deel van de pipet tip in de beker. Leg een net of een deksel op de top van de beker.
  4. Vul twee piepschuim dozen met ijs. Plaats ice box # 1 onder een stereomicroscoop en plaats een glazen horlogeglas op het ijs.
  5. Verdoven de volwassen muggen met CO 2 en plaats beker met volwassenen in ijs box # 2.
  6. Bereid naald voor injectie van dsRNA. Zet de naald gevuld met dsRNA op het plastic slang van injectie blok (voor een beschrijving van de injectie blok zie hieronder).
  7. Verplaats een verdoofd mug uit de beker naar het horlogeglas met een tang. Break injectienaald tip over muggen cuticula. Gooi deze mug.
  8. Voor injecties, wordt de naald ingebracht in de thorax van de mug. Met je vrije hand, aan te passen klep op injector van "rustpositie" naar "injectie positie" en te comprimeren zuiger tot de gewenste hoeveelheid dsRNA is geïnjecteerd.
  9. Plaats geïnjecteerd muggen in post-injectie cup.

Injectieblok opgezet

  1. Fix een 50 ml spuit met een sintel blokkeren.
  2. Bevestig een verstelbare 1-weg klep aan het einde van de spuit met minstens twee luchtuitlaten.
  3. Bevestig een luchtdichte plastic slang aan op een luchtuitlaat.
  4. Plaats een micropipet adapter in het vrije uiteinde van de slang.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Injectie van dsRNA in Vrouw A. aegypti Mosquitos
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).More

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter