Summary
यह वीडियो सामान्य प्रयोगशाला में पीछे एनोफ़ेलीज़ gambiae तकनीकों का इस्तेमाल किया दिखाता है. प्रयोगशाला मच्छरों के लिए देखभाल करने के लिए तरीकों रक्त खिला वयस्कों के लिए pupae लार्वा से जीव के जीवन चक्र के सभी चरणों के माध्यम से प्रदर्शन कर रहे हैं.
Abstract
यह प्रोटोकॉल insectary में मच्छर पालन का वर्णन करता है. insectary कमरे 28 में रखा जाता है डिग्री सेल्सियस और ~ एक 12 घंटा के साथ 80% आर्द्रता,. दिन / रात चक्र. इस प्रक्रिया के लिए, आप मच्छर पिंजरों, 10% बाँझ sucrose के समाधान, कागज तौलिये, बीकर, वाटमान फिल्टर पेपर, कांच के भक्षण, मानव रक्त और सीरम, जल स्नान, parafilm, आसुत जल, साफ प्लास्टिक ट्रे, मच्छर भोजन (वर्णित की आवश्यकता होगी नीचे), ट्रे, निर्वात, और एक संग्रह चैम्बर कवर करने के लिए वयस्कों को इकट्ठा शुद्ध मच्छर.
Protocol
मच्छर भोजन:
- एक उड़ान मछली खाना (Aquaricare): खाद्य. एक छोटी सी चुटकी करने के लिए जोड़ा जाना चाहिए.
- खाद्य बी: कैट भोजन (Purina) पर आधारित है. एक छोटी सी चुटकी करने के लिए जोड़ा जाना चाहिए.
- खाद्य सी बिल्ली का खाना (Purina). दो गोलियाँ करने के लिए जोड़ा जाना चाहिए.
रक्त:
पशु या मानव रक्त पीछे मच्छरों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एक सिरिंज के साथ ताजा रक्त एकत्र किया जाता है और एक बाँझ 15 मिलीलीटर फाल्कन CPD (थक्का) के रक्त की प्रत्येक 10 मिलीलीटर के लिए 1ml युक्त ट्यूब में डाल दिया, फिर धीरे से मिश्रित और 5 मिनट के लिए 2000 rpm पर कमरे के तापमान पर centrifuged. सतह पर तैरनेवाला त्याग, ध्यान लेने के लिए जो अन्य रक्त कोशिकाओं (जैसे WBC) शामिल buffy कोट निकाल. आरबीसी गोली तो pipetting द्वारा RPMI मध्यम के एक बराबर मात्रा में निलंबित कर दिया, और आगे इस माध्यम का तीन बार में धोया. अंतिम धोने के बाद, pelleted लाल रक्त कोशिकाओं RPMI मध्यम के एक बराबर मात्रा में resuspended कर रहे हैं और 4 में संग्रहीत डिग्री सेल्सियस (8-10 दिनों के लिए रखा जा सकता है). बस खिलाने से पहले, आरबीसी (RPMI में) गोली (5 मिनट के लिए 2000 rpm) centrifuged कोशिकाओं के नीचे, और पैक आरबीसी सीरम (O + मानव सीरम) में resuspended है के लिए एक 40% हेमाटोक्रिट प्राप्त. रक्त डिग्री सेल्सियस हमेशा खिलाने के लिए 37 पर रखा जाना चाहिए.
1 दिन:
- 3-5 दिन पुरानी वयस्क मादा मच्छर अण्डे रक्त पर तंग आ चुके हैं.
- रक्त खिला के लिए, एक कृत्रिम झिल्ली (parafilm) खिला विधि इस प्रकार के रूप में प्रयोग किया जाता है:
- लाल रक्त कोशिकाओं (रक्त तैयार करने के लिए ऊपर देखें) गर्मी निष्क्रिय सीरम के साथ मिश्रित कर रहे हैं ~ 40% हेमाटोक्रिट (आरबीसी 40% और सीरम 60% पैक) प्राप्त करने के लिए. यह कांच फीडर से जोड़ा जाता है.
- फीडर एक गर्म पानी जैकेट (37 डिग्री सेल्सियस) से जुड़ा है, और पिंजरे पर रखा मच्छरों झिल्ली सतह के लिए उपयोग की अनुमति.
- मच्छरों ~ 30 मिनट के लिए फ़ीड करने के लिए अनुमति दी जाती है.
3 दिन:
- महिलाओं के दो दिन अण्डे के बाद वे रक्त पर फ़ीड. एक छोटा सा फिल्टर एक चोटीदार आकार में लिपटे कागज के एक छोटे से आसुत जल युक्त बीकर में डाल दिया है, सुनिश्चित करें कि फिल्टर पेपर नम हो जाता है. बीकर अंडे देना मच्छरों के लिए रातोंरात पिंजरे के अंदर रखा जाता है.
4 दिन:
- फिल्टर कागज युक्त मच्छर अंडे ~ 300 मिलीलीटर आसुत जल के साथ एक प्लास्टिक की ट्रे में रखा जाता है. भोजन की एक चुटकी एक ट्रे में जोड़ा जाता है और अगले कुछ दिनों के दौरान लार्वा को हैच अंडे की अनुमति दी जाती है.
5 दिन - 8:
- बढ़ते लार्वा भोजन सी के दो गोलियों के साथ हर दिन तंग आ चुके हैं, और घनत्व और जनसंख्या के लिए निगरानी. आठवें दिन (5 दिन पुराने लार्वा) में, लार्वा जनसंख्या 1 ट्रे से ~ 10 ट्रे पतला है प्रत्येक ट्रे में भोजन सी के एक और दो गोलियाँ भोजन की एक चुटकी के साथ. (~ 30 मिनट)
9 दिन - 12:
- लार्वा हर दिन भोजन में 12 वें दिन (9 दिन पुराने लार्वा) सी. के साथ तंग आ चुके हैं, ताजे पानी के साथ पानी में बदल जाता है, और भोजन (खाद्य बी और भोजन सी के दो गोलियाँ की एक चुटकी) जोड़ा जाता है. pupae इस स्तर पर विकास शुरू होता है. ट्रे नेट के साथ वयस्कों के भागने से बचने के कवर कर रहे हैं. (~ 8-10 मिनट)
13 दिवस - 15:
3 दिन - pupae अगले 2 के लिए वयस्कों के लिए उभरने के लिए अनुमति दी जाती है. खाद्य सावधानी से शुद्ध को हटाने के लिए वयस्कों के बचने से बचने के द्वारा हर दिन लार्वा / pupae के लिए दिया जाता है.
16 दिवस:
- वयस्कों को एक पिंजरे में एक वैक्यूम करने के लिए जुड़ा Aspirator के माध्यम से एकत्र कर रहे हैं. पिंजरे एक कपास की बाती है कि 10% (autoclaved) sucrose और तल पर एक कागज तौलिया अस्तर जो पिंजरे से निपटने के दौरान हो सकता है किसी भी संभावित चीनी फैल लेना से लथपथ है के साथ एक छोटे से 100 मिलीलीटर की बोतल के होते हैं. (~ 30-40 मिनट)
17 दिवस - 21:
- वयस्कों (दोनों पुरुषों और महिलाओं) तो 4-5 दिनों के लिए insectary कमरे में रखा जाता है, 10% sucrose को खिलाया इससे पहले कि वे फिर से रक्त सिंचित करने के लिए अगले चक्र शुरू. एक ही मच्छरों के अंडे रखना एक बार से अधिक के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
- मच्छरों कि प्रयोगों या पालन के लिए की जरूरत नहीं कर रहे हैं एक फ्रीजर में पिंजरे में रखकर मार डाला जा सकता है. इस्तेमाल ट्रे और पिंजरों और साफ सूखे इससे पहले कि वे फिर से इस्तेमाल किया जा सकता है की जरूरत है.
नोट: मच्छर पालन विधि में कुछ बदलाव हो सकता है और विभिन्न प्रयोगशालाओं विभिन्न तकनीकों हो सकता है सकते हैं .
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Food A | Aquaricare | Grounded fish food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food B | Purina | Grounded cat food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food C | Purina | Cat food. Two tablets needs to be added | ||
| RBC | prepared red blood cells: 40% hematocrit in human serum | |||
| RPMI | Medium | |||
| CPD | anticoagulant | |||
| serum | O+ human serum | |||
| Mosquito feeder | ||||
| parafilm | ||||
| Anopheles gambiae | mosquitos | |||
| 10% sucrose | mosquito food | |||
| insectary |
References
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