Summary
وسوف نظهر الإعداد وتحليل microRNA - 96 - جيدا قبل صفائف QPCR باستخدام الروبوت وكذلك جنب مع ماصة العلمية الحرارية الأقنية ماتريكس.
Abstract
وقد برزت الكمي في الوقت الحقيقي PCR (QPCR) كأداة قيمة ودقيقة في توصيف مستويات التعبير الجيني. واحدة من مزاياها العديدة هو الحد الأدنى للكشف بالمقارنة مع غيرها من أساليب التعبير الجيني التنميط أثناء استخدام كميات صغيرة من المدخلات لكل مقايسة. وقد تحسنت الآلي qPCR الإعداد هذا المجال من خلال السماح لمزيد من التكاثر. الإعداد لها مريحة وسريعة تتيح للتجارب التي مرت عالية ، مما مكن من التنميط جينات كثيرة مختلفة في وقت واحد في كل تجربة. هذا الأسلوب مع لوحة التحكم الداخلية يقلل أيضا من المتغيرات التجريبية المشتركة لتقنيات أخرى. قمنا بتطويرها مؤخرا لفحص qPCR التنميط المسبق من microRNAs (ما قبل miRNAs) باستخدام مجموعة من أزواج التمهيدي 186. ظهرت MicroRNAs كطبقة رواية صغيرة ، الرناوات غير الترميز لديهم القدرة على تنظيم العديد من الأهداف مرنا في مرحلة ما بعد النسخي. وكتب أولا هذه الرنا RNA الصغيرة بوليميريز الثاني باعتباره ميرنا الابتدائي (الحزب الثوري المؤسسي ، ميرنا) نسخة ، وهو المشقوق ثم إلى ميرنا السلائف (ما قبل ميرنا). ويتم تصدير ما قبل miRNAs إلى السيتوبلازم حيث يشق المقامر حلقة منعطف حاد لانتاج miRNAs ناضجة. ويمكن ملاحظة زيادة في مستويات ميرنا على السلائف وعلى صعيد ميرنا ناضجة والتنميط من كل من هذه الأشكال يمكن أن تكون مفيدة. هناك عدة فحوصات متوفرة تجاريا للmiRNAs ناضجة ، ولكن تكلفتها العالية قد تردع هذه التقنية الباحثين من التنميط. هنا ، نحن نناقش فعالة من حيث التكلفة وموثوق بها ، وطريقة qPCR SYBR القائمة على التنميط المسبق miRNAs. التغيرات في مستويات ما قبل ميرنا غالبا ما تعكس التغييرات ميرنا ناضجة ويمكن أن تكون مؤشرا مفيدا التعبير ميرنا ناضجة. ومع ذلك ، قد التنميط المتزامن لكلا miRNAs قبل أن تنضج وmiRNAs الأمثل لأنها يمكن أن تساهم المعلومات nonredundant وتوفير نظرة ثاقبة تجهيز microRNA. وعلاوة على ذلك ، يمكن توسيع هذه التقنية وصفها هنا ليشمل مجموعات من التنميط مكتبة أخرى لمسارات محددة أو مسببات الأمراض.
Protocol
يمكن تعيين صفائف qPCR التنميط المسبق على النحو ميرنا مؤتمتة بالكامل مع الروبوت Tecan ايفو الحرية (A) أو باليد مع مصفوفة متعددة ماصة الإلكترونية (B).
1) تحضير مزيج الرئيسي ، لوحات التمهيدي والعينات.
- يجب أن يتم تخزين لوحات تحتوي على أزواج التمهيدي التمهيدي 96 - 186 في شكل جيد (ما مجموعه 2 لوحات) في 12:05 في درجة مئوية -80 لوحات من ذوبان الجليد في درجة حرارة الغرفة ، ودوامة لفترة وجيزة قبل استخدام أجهزة الطرد المركزي.
- لتحضير مزيج رئيسي ، إلى تحسن SYBR الأخضر ميكس PCR 2X في درجة حرارة الغرفة. كل رد فعل يستخدم مزيج 8ul رئيسية مع 2ul التمهيدي. تكوين مزيج الرئيسي في رد الفعل هو مزيج 4ul SYBR ، 3ul المياه الصف PCR و 10-20 نانوغرام عينة الحمض النووي أو [كدنا].
- لإعداد كل طبق التمهيدي 96 - جيدا ، سوف تحتاج إلى أربعة أنابيب مزيج الرئيسي. يمكن تشغيل عينات 4 عينات في لوحة (singlicate) ، و 2 في عينات لوحة (مكرر) أو عينة واحدة في quadruplicate.
- تحضير مزيج الماجستير من خلال الجمع بين SYBR والماء والعينة في كل من أنابيب إيبندورف 4 - 2ml. وينبغي أن تحتوي على ما يكفي من كل أنبوب رئيسي لمزج ما يقرب من 100 ردود الفعل ، مما يسمح للفائض pipetting النفايات. الدوامة إلى المزيج.
A. الإعداد من قبل ميرنا الرزن باستخدام Tecan الحرية ايفو الروبوت.
- بعد التهيئة للروبوت وتحميل البرنامج Evoware ، دافق ثلاث مرات مع كل 30mls لمسح نظام فقاعات الهواء التي من شأنها أن تتداخل مع pipetting الدقة.
- الإعداد منصة الروبوت لتشمل ما يلي :
- 384 المسمى كذلك لوحة
- 96 - جيدا وحة التمهيدي (1)
- سيد يمزج
- التبييض التي تحتوي على حوض 2 ٪
- ألف حاوية مملوءة نظام السوائل
- نفايات الحاويات الفارغة
- بدء تشغيل الروبوت الآلي عن طريق اختيار "تشغيل" مرتين.
- في نهاية البرنامج ، وإزالة 384 لوحة وكذلك مع ختم احباط الختم LightCycler 480 والطرد المركزي لفترة وجيزة. مختومة مكان لوحة 384 في موقف جيد 1 من الفندق.
- انتقل إلى الخطوة 2.2 و تكرار لوحة التمهيدي 2 مع يمزج رئيسية جديدة لوحة جديدة و384 أيضا.
- مكان لوحة مختومة في موقف 2 من الفندق.
- فتح برنامج جديد لتحميل Evoware في Lightcycler من الفندق وحدد "تشغيل" مرتين.
- والحرية ايفو تلقائيا تحميل كل لوحة في LightCycler وتشغيل البرنامج التالي الدراجات SYBR الأخضر الأول / HRM :
قبل (1 دورة) :
50 درجة لمدة 5 دقائق في معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
95 درجة لمدة 5 دقائق في معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
أمبير (45 دورات) :
95 درجة لمدة 15 ثانية في معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
62 درجة لمدة 30 ثانية في معدل زيادة قدره 2.5 درجة / ثانية
(واحدة الحصول على البيانات خلال هذه الخطوة)
ذوبان منحنى :
95 درجة لمدة 5 ثوانى على معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
60 درجة لمدة 1 دقيقة بمعدل المنحدر من 2.5 درجة / ثانية
95 درجة المستمر في معدل زيادة من 0.11 درجة / ثانية
مع 5 درجة مئوية في عمليات الاستحواذ
باردة :
50 درجة لمدة 30 ثانية بمعدل المنحدر من 25 درجة / ثانية
- والحرية ايفو تلقائيا تحميل كل لوحة في LightCycler وتشغيل البرنامج التالي الدراجات SYBR الأخضر الأول / HRM :
باء الإعداد من قبل ميرنا الرزن باستخدام ماصة مصفوفة متعددة الإلكترونية :
- محتويات مكان الانبوب الرئيسي مزيج 1 في المكمن.
- تعيين ماصة الالكترونية لنضح 16ul مزيج رئيسية مع 8ul - 2 الاستغناء عن الخطوات تليها خطوة تطهير.
- لمزيج الرئيسي 1 ، الاستغناء 8ul في كل جانب الآخر من اللوحة 384 جيدا (على تعيين 384 جيدا تباعد غيض) ، بدءا A1 جيدا. (أي الآبار A1 ، C1 ، E1 ، الخ) ل8ul second الاستغناء والانتقال إلى العمود 3 (أي الآبار A3 ، C3 ، E3 ، الخ) ، ثم تطهير أكثر من حاوية النفايات والتخلص منها نصائح.
- تتبع هذا النمط لدورات 5 المتبقية حتى تصل A23 أيضا.
- تكرار لمزيج الرئيسي 2 ، (A2 مع بداية جيدة ، C2 ، E2 ، الخ) ؛ الرئيسي مزيج 3 (B1 في بداية جيدة ، D1 ، F1 ، الخ) ؛ الرئيسي مزيج 4 (في بداية B2 ، D2 ، F2 ، الخ. .)
- لوحة من aliquotting التمهيدي ، تعيين ماصة الالكترونية لنضح 2ul والاستغناء 2ul مع تطهير التالية الخطوة. الاستغناء 2ul من المشارع من العمود 1 من 96 لوحة جيدا التمهيدي (ه) في لوحة 384 جيدا ، والآبار A1 ، C1 ، E1 ، الخ إزالة أكثر من حاوية النفايات والتخلص منها نصائح. كرر لA2 الآبار ، C2 ، E2 ؛ B1 ، D1 ، F1 ؛ و B2 ، D2 ، F2 ، الخ.
- تكرار للصفوف من 2-12 الاشعال 96 - جيدا ، وتتحرك على كل الأعمدة 2 لكل عمود التمهيدي ، حتى تم aliquotted كامل جيدا 384 لوحة.
- لوحات الختم مع ختم احباط LightCycler وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة.
- لوحات المكان الى LightCycler 480 ودورة لوحات وفقا للإعدادات التالية باستخدام الخضراء SYBR I / HRM تنسيق الكشف :
قبل (1 دورة) :
50 درجة لمدة 5 دقائق في معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
95 درجة لمدة 5 دقائق في معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
أمبير (45 دورات) :
95 درجة لمدة 15 ثانية بمعدل المنحدرمن 4.8 ° / ثانية
62 درجة لمدة 30 ثانية في معدل زيادة قدره 2.5 درجة / ثانية
(واحدة الحصول على البيانات خلال هذه الخطوة)
ذوبان منحنى :
95 درجة لمدة 5 ثوانى على معدل زيادة قدرها 4.8 درجة / ثانية
60 درجة لمدة 1 دقيقة بمعدل المنحدر من 2.5 درجة / ثانية
95 درجة المستمر في معدل زيادة من 0.11 درجة / ثانية
مع 5 درجة مئوية في عمليات الاستحواذ
باردة :
50 درجة لمدة 30 ثانية بمعدل المنحدر من 25 درجة / ثانية - تكرار استخدام لوحة التمهيدي 2 ، aliquotting في لوحة جديدة 384 يمزج جيدا باستخدام الرئيسي الطازجة.
أسرار النجاح :
سمة هامة عند تصميم صفائف PCR هو أن جميع أزواج التمهيدي 186 ونفس درجة الحرارة الصلب ، بحيث يمكن تشغيل لوحة في نفس الإعدادات المثلى PCR تشغيل البرنامج.
يجب فحص كل مجموعة ثلاثة عناصر تحكم جديدة باستخدام عينات قبل التشغيل. هذه الضوابط هي :
1 تشغيل جميع أجهزة الاشعال تشغيل مع الماء أو 0.1 TE x لاستبعاد احتمال حدوث تلوث التمهيدي.
1 يركض من المياه بالتناوب / TE والتحكم إيجابية ، لضمان عدم وجود المرحلة.
3 يعمل باستخدام نفس عنصر التحكم إيجابية ، لضمان تكرارية بين تشغيله.
وينبغي أن يمزج الرئيسي الطازجة ، ويجب تشغيل لوحات في غضون 24 ساعة من أجل تحقيق النتائج المثلى
يجب إزالة التمهيدي لوحة احباط ببطء للحد من مخاطر التلوث بين الآبار.
عند استخدام الروبوت مع نصائح محددة ، 2 ٪ غسل التبييض هو ضروري لغسل نصائح pipetting بين كل خطوة ، يليه تدفق المياه. هذا يمنع ويزيل المرحل ، والتي يمكن أن تلوث خلاف البيانات وتؤدي إلى نتائج غير حاسمة.
بعد تشغيل لوحة من خلال Lightcycler ، لا ينبغي أن يكون فتحها مرة أخرى في غرفة الإعداد PCR. هذا يساعد على منع التلوث PCR.
ممثل النتائج :
تمثل عادة نتائج qPCR بالقيم CT كما هو محدد من برامج التحليل Lightcycler. A تشغيل الناجحة عادة ما تتألف من مجموعة من CTS للعينات ، وعادة ما بين 20-35 لعينات إيجابية. عينات المياه في تشغيل جيدة دائما في CT من> 40 وتعتبر أي عينات أو الآبار الخاصة مع أكثر من 37 CT سلبية أو لا تكتشف. وكقاعدة عامة ، مما أسفر عن عينات من CT <10 كما لا يمكن الاعتماد عليها ويتم استبعادها من مزيد من التحليل. هناك عدة طرق لتحليل البيانات qPCR وإدراج الضوابط الداخلية في مقايسة لدينا يساعد على التحكم عن اختلاف المدخلات العينة. الصفيف قبل مير يتضمن السيطرة U6 التمهيدي ، والذي يستخدم غالبا ما الجين اشارة الى تطبيع القيم CT من عينات مختلفة. ويشار إلى هذه القيمة لتطبيع كقيمة CT الدلتا (DCT). غالبا ما يتم رسم النتائج كما CT الخام ، قيمة DCT أو يمكن لمزيد من التحليل للقيم موحدة.
في الشكل 1 ، ويقدم تحليلا للمجموعة قبل microRNA كاملة مدتها أربع عينات مختلفة من تجربة timecourse في شكل خريطة للحرارة. يظهر التعبير النسبية لكل microRNA قبل وبرزت ثلاثة رئيسية ، مجموعات متميزة. وخضع معظم ما قبل ميرس تحليل الصغيرة ، والتغيرات ضئيلة كما هو متوقع (الشكل 1A). ومع ذلك ، كانت انخفضت بشكل ملحوظ على جزء صغير من microRNAs المسبق (1B الشكل) أو زيادة كبيرة (الشكل 1C) في كافة مراحل التجربة timecourse. وكانت مستويات طبيعية للتعبير عن كل microRNA مسبقا لtimepoint 0h (نموذج 1) وعلى مستوى خط الأساس. في بعض الحالات ، قد لاحظ أن بعض microRNAs قبل كتلة عنقودية معا أيضا في التحليل heatmap (مثلا : اسمحوا - 7A 1B الشكل ،). اعتمادا على التجربة ، قد تنشأ كتل التي تعتمد على العدوى الفيروسية ، الخلية نوع معين من التعبير microRNAs ما قبل أو ما قبل ميرس التي ينظمها جزيء مشتركة أو إشارات الطريق.
وفحص ما قبل microRNA الذي قمنا بتطويره أيضا يضم عددا من المعروف الفيروسية microRNAs المسبق والجينات المشفرة بواسطة ساركومة كابوزي المرتبطين الفيروسة (KSHV) وفيروس ابشتاين بار (EBV) بالإضافة إلى ميرس قبل الإنسان. ويمكن استخدام هذه الضوابط على النحو إيجابية أو سلبية ، اعتمادا على خط الخلية ووضعها الفيروسية للعينات المستخدمة. في الشكل 2 ، وتظهر التجارة في الخدمات في المتوسط من عينة KSHV سلبية في المدى quadruplicate. الأهم من ذلك ، لم يتم الكشف عن KSHV لنا في هذه العينة من قبل مجموعة qPCR حساسة للغاية. ومع ذلك ، U6 -- وأعرب عن بالغ التأثير وأعرب قبل microRNA ، على المستويات التي يمكن اكتشافها -- سيطرتنا الداخلية والسماح 7A. في النهاية ، كما فعل متوقع ، سيطرة سلبية من PCR الصف المياه لم تسفر منتج qPCR.
مؤشر آخر لتشغيل qPCR الناجح هو منحنى ذوبان جيدة التحليل ، والتي يمكن أن تعطي فكرة عن تلوث محتمل في العينات. لإنشاء درجة حرارة انصهار ، يسخن لوحة ببطء بعد اكتمال PCR. كما الحمض النووي مسارات منفصلة ، ويتم تحريرها SYBR الخضراء ، والنقصان إشارة مضان. درجة الحرارة في هذا الدكتور الذيالمرجع يحدث هو المجدولة ، وكما هو معروف في درجة حرارة انصهار العينة. تبعا لتسلسل الحمض النووي ، وعينات تذوب في درجات حرارة مختلفة عن بعضها البعض ، والتحكم في المياه من السلبية ، والتي لا ينبغي أن يكون على درجة حرارة ذوبان نظرا لعدم وجود الحمض النووي. ينبغي للمنتجات PCR من كل زوج التمهيدي تذوب في درجات حرارة مماثلة. على سبيل المثال ، يوضح الشكل (3) تحليل منحنى ذوبان لمدة الاشعال مختلفة باستخدام نفس العينة في مكررة. فمن الواضح أن درجة حرارة انصهار هو مختلف عن أزواج التمهيدي اثنين ولكن العينة في درجة حرارة انصهار نفسه بالضبط لكل تكرار. قد دلائل على وجود نموذج سيء أو يحتمل أن تكون ملوثة وتشمل ذوبان قمم عدة ، مما يشير إلى وجود اثنين من مصادر مختلفة من المدخلات.
الشكل 1. التمهيدية microRNA التواقيع يظهر عن طريق استخدام التنميط القائم على رواية qPCR الصفيف. تم احتساب متوسط deltaCTU6 وحملت قيم موحدة في صناعة البرمجيات ArrayMinerTM ، مما أسفر عن 3 مجموعات متميزة كما هو معروض heatmaps. (أ) تظهر قبل microRNAs مع تغييرات طفيفة في التعبير. قبل microRNAs التي انخفضت بشكل ملحوظ المستويات كانت (B) أو (ج) زيادة وتبين ايضا. الأزرق يقابل انخفاض مستويات التعبير ، بينما يمثل الحمراء زيادة مستويات التعبير.
الشكل 2. إدراج الضوابط الداخلية في الصفيف قبل microRNA qPCR مقرا لها. وتظهر القيم CT الخام لمدة 3 جينات مختلفة والتحكم قالب لا. كما يستخدم U6 سيطرة على الإيجابية الداخلية بينما PCR H2O بمثابة سيطرتنا سلبية. اسمحوا - 7A - 1 - 1 هو microRNA يعبر عنها عادة في كثير من أنواع مختلفة من الخلايا ، بينما يمكن استخدام KSHV LANA والسيطرة إما إيجابية أو سلبية ، على أساس الحالة الفيروسية من خط الخلية أو النسيج المستخدمة.
الشكل 3. تحليل الانصهار ذروة ما قبل microRNA الاشعال وعدم وجود تلوث العينة. تم الحصول على منحنيات الذوبان باستخدام التحليل يدعو تيم LightCycler في البرنامج. وترد اثنين الاشعال المختلفة (التمهيدي A و B) لتشغيل في نفس العينة مكررة. درجة حرارة انصهار لكل التمهيدي هو واضح. ومع ذلك ، نموذج واحد فقط الذروة ، مما يدل على عدم وجود تلوث العينة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
QPCR هو مقايسة حساسة للغاية والتي يمكن استخدامها للمقارنة بين مستويات التعبير الجيني بين العينات في الدراسة ، وكذلك لتحديد بالفيروس في حالة من الفيروسات. الفائدة من استخدام صفائف qPCR هو القدرة على تشغيل العديد من المشارع (في حالتنا ، أزواج التمهيدي 186) لكل عينة في فترة قصيرة من الزمن. ويمكن استخدام الروبوت pipetting مثل ايفو Tecan الحرية ، ومقدار الوقت اللازم لوضع التجربة حتى يمكن مزيدا من الانخفاض ، والدقة والاتساق في الروبوت تخفيض وإزالة الأخطاء pipetting. نحن هنا لشرح كيفية استخدام الحرية Tecan ايفو لاقامة مجموعة microRNA ، فضلا عن طريقة بديلة باستخدام مصفوفة الماصة المتعددة الإلكترونية ، والتي يمكن تنفيذها للمختبرات الذين لا يستطيعون الوصول إلى الروبوت pipetting. صفائف qPCR هي أيضا مفيدة لأنه لا يمكن تطبيع جميع الجينات لمجموعة واحدة من الجينات مرجعية تعمل على نفس المائدة ، وتقليل التكلفة وعدد من ردود الفعل.
كما ذكرت ، هناك العديد من السمات الرئيسية التي هي ضرورية عند تصميم مثل صفيف. منذ سيتم تشغيل جميع العينات على لوحة PCR في ظروف مماثلة ، من المهم جدا لتصميم الاشعال التي تعمل في درجات الحرارة وضبط نفس ، أو بعض أزواج التمهيدي ستفشل. عند تصميم أجهزة الاشعال ، يجب دائما متواليات يتم التحقق منها بواسطة BLAST البحث للتأكد من أن هناك تماثل إلى الجين اهتمامكم وأي جينات أخرى.
عند تشغيل الصفيف ، فمن الأهمية بمكان أن البيئة غير معقمة وخالية من الملوثات PCR التي قد تسفر عن ايجابيات كاذبة. إذا كان ذلك ممكنا ، يجب تعيين ما يصل PCR في غطاء العمل معقمة أو تنظيف غرفة منفصلة ، حيث يتم استخدامها أبدا المنتجات PCR. يجب غسلها مع Eliminase مقاعد ، والمياه ، والإيثانول ، ويتعرضون لضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة ساعة على الأقل بعد اكتمال تشغيل.
الاستفادة من هذه التقنية هو أن هذه الاستراتيجية هي نفسها المطبقة على أي مجموعة من الجينات لمحة عن طريق استبدال ببساطة مجموعة ميرنا مع مجموعة تحتوي على مجموعة مختلفة الزوج التمهيدي. مختبرنا يحتوي حاليا على المصفوفات لmiRNAs المسبق ، KSHV ، EBV ، البروتين p53 ، وNFkB -- وكلها يمكن تشغيل في طريقة مماثلة لتلك التي تظهر. المرونة في هذا الاختبار يسمح مختبرنا لأداء عالية الإنتاجية التنميط الجيني بسرعة وبشكل موثوق عن أي أزواج التمهيدي الذي نود أن الشاشة.
هنا ، وصفنا الصفيف باستخدام [كدنا] من خطوط الخلايا البشرية إلى مستويات التعبير الشخصية ميرنا عند التنشيط على مدى فترة من الزمن. بالإضافة إلى تميز خطوط الخلايا ، ويمكن أيضا أن تستخدم مجموعة لتحليل العينات السريرية. بعد عزل الحمض النووي الريبي ، يمكن إجراء التوليف [كدنا] ، ويمكن تشغيل [كدنا] باستخدام هذه المجموعة لتحديد خصائص التعبير الجيني. وهذا يمكن أن تكون مفيدة في تحديد بالفيروس الفيروسية ، أو ملامح التعبير الجيني لتوصيف مزيد من الجينات التي upregulated في عينات من المرضى المصابين. باختصار ، على أساس الآلي qPCR صفائف يتم استنساخه المقايسات والموثوق بها التي تسمح للكشف حساسة للغاية من مجموعة متنوعة من الأنسجة والجينات من خطوط الخلايا في الوقت المناسب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح DE018304 ، R01DE018281. معتمد من قبل KT GM07092 T32 - 34 ومنحة لجامعة ولاية كارولينا الشمالية في تشابل هيل من معهد هوارد هيوز الطبي (HHMI) من خلال مبادرة متوسطية في غراد. معتمد من قبل PC T32 CA009156.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Freedom Evo 150 | Tecan Group Ltd. | 30017587 | |
| Matrix Electronic Multichannel Pipette | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 2001-MTX | (or any comparable Thermo Scientific multichannel that can pipette the volumes described above) |
| Matrix Integrity Filter Tips, Sterile | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 7435 | (or comparable tip for multichannel used) |
| Lightcycler 480 SYBR Green 1 Master | Roche Group | 04 707 516 001 | |
| Lightcycler 480 Instrument II | Roche Group | 05015243001 | 384-well version |
| Lightcycler 480 Multiwell Plate 384, white | Roche Group | 04729749001 | |
| LightCycler 480 Sealing Foil | Roche Group | 04729757001 | |
| LightCycler 480 Multiple Plate Analysis Software | Roche Group | 05075122001 | |
| Eliminase Decontaminant | Decon Laboratories | 04-355-31 |
References
- Bustin, A. A. The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments. Clinical Chem. 55 (4), 611-622 (2009).
- Frégeau, C. J. Automated Processing of Forensic Casework Samples using Robotic Workstations Equipped with Nondisposable Tips - Contamination Prevention. J. Forensic Sci. 53 (3), 53-533 (2008).
- O'hara, A. J. Pre-micro RNA Signatures Delineate Stages of Endothelial Cell Transformation in Kaposi Sarcoma. PLoS Pathog. 5 (4), e1000389-e1000389 (2009).
