Dissecção das glândulas salivares e intestino médio de Ae. aegypti mosquitos

Summary

O intestino médio do mosquito e glândulas salivares são entrada de chave e pontos de saída para patógenos como vector Plasmodium falciparum e do vírus da dengue. Este vídeo demonstra as técnicas de dissecção para a remoção das glândulas salivares e intestino médio de Aedes aegypti.

Abstract

O intestino médio do mosquito e glândulas salivares são entrada de chave e pontos de saída para agentes patogénicos, tais como parasitas Plasmodium e vírus Dengue. Este protocolo vídeo demonstra técnicas de dissecção para a remoção das glândulas salivares e intestino médio de Aedes aegypti.

Protocol

Dissecação de intestino e tecidos das glândulas salivares dos mosquitos exige uma preparação prévia do fosfato 1X Buffered solução (1X PBS) e Saline anestesiados de mosquitos submetendo a uma temperatura de 4 ° C, até imobilizada. Os mosquitos permaneçam anestesiados, colocando em um prato de Petri, que é mantido frio no gelo. Outros materiais necessários são: microscópio de luz equipadas com objetiva de 10x, pipetador, com pontas finas pinças, lâmina de vidro, a ponta da agulha-sondas.

Dissecção do intestino médio

1. Coloque uma gota de 1X PBS numa lâmina de vidro montado sob o microscópio de luz.
2. Transferência de um mosquito para o slide elaborado por esfaquear o tórax mosquito com uma sonda de ponta da agulha.
3. Mantendo pressionado o mosquito com a sonda, use a pinça para agarrar o segundo para o último segmento abdominal e puxe fora do abdômen mosquito em um único movimento. O intestino médio deve permanecer ligado ao tórax imobilizado.
4. Descartar a abdome. Use a pinça para retirar o intestino médio do tórax.

Dissecção da glândula salivar

1. Coloque uma gota de 1X PBS numa lâmina de vidro montada em um microscópio de luz.
2. Pegar um mosquito por stabbling do tórax com uma sonda de ponta da agulha.
3. Retire as pernas mosquito usando os dedos.
4. Transferir o mosquito para o slide.
5. Retire a cabeça do mosquito com a pinça.
6. Enquanto pressiona o tórax mosquito com a sonda, use outra sonda para empurre para baixo no tórax.
7. As glândulas salivares estão localizadas na porção anterior do tórax e podem ser isoladas através de uma sonda de ponta da agulha-e rompendo os anexos que ligam a glândula ao tórax. Intactas as glândulas salivares são compostos de três lobos: dois lobos laterais e um lóbulo medial.