Summary
O intestino médio do mosquito e glândulas salivares são entrada de chave e pontos de saída para patógenos como vector Plasmodium falciparum e do vírus da dengue. Este vídeo demonstra as técnicas de dissecção para a remoção das glândulas salivares e intestino médio de Aedes aegypti.
Abstract
O intestino médio do mosquito e glândulas salivares são entrada de chave e pontos de saída para agentes patogénicos, tais como parasitas Plasmodium e vírus Dengue. Este protocolo vídeo demonstra técnicas de dissecção para a remoção das glândulas salivares e intestino médio de Aedes aegypti.
Protocol
Dissecação de intestino e tecidos das glândulas salivares dos mosquitos exige uma preparação prévia do fosfato 1X Buffered solução (1X PBS) e Saline anestesiados de mosquitos submetendo a uma temperatura de 4 ° C, até imobilizada. Os mosquitos permaneçam anestesiados, colocando em um prato de Petri, que é mantido frio no gelo. Outros materiais necessários são: microscópio de luz equipadas com objetiva de 10x, pipetador, com pontas finas pinças, lâmina de vidro, a ponta da agulha-sondas.
Dissecção do intestino médio
- Coloque uma gota de 1X PBS numa lâmina de vidro montado sob o microscópio de luz.
- Transferência de um mosquito para o slide elaborado por esfaquear o tórax mosquito com uma sonda de ponta da agulha.
- Mantendo pressionado o mosquito com a sonda, use a pinça para agarrar o segundo para o último segmento abdominal e puxe fora do abdômen mosquito em um único movimento. O intestino médio deve permanecer ligado ao tórax imobilizado.
- Descartar a abdome. Use a pinça para retirar o intestino médio do tórax.
Dissecção da glândula salivar
- Coloque uma gota de 1X PBS numa lâmina de vidro montada em um microscópio de luz.
- Pegar um mosquito por stabbling do tórax com uma sonda de ponta da agulha.
- Retire as pernas mosquito usando os dedos.
- Transferir o mosquito para o slide.
- Retire a cabeça do mosquito com a pinça.
- Enquanto pressiona o tórax mosquito com a sonda, use outra sonda para empurre para baixo no tórax.
- As glândulas salivares estão localizadas na porção anterior do tórax e podem ser isoladas através de uma sonda de ponta da agulha-e rompendo os anexos que ligam a glândula ao tórax. Intactas as glândulas salivares são compostos de três lobos: dois lobos laterais e um lóbulo medial.