Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Fysiologiska Inspelningar av hög och låg utgång NMJs på Kräftor benböjning Muscle

Published: November 17, 2010 doi: 10.3791/2319
* These authors contributed equally

Summary

Den här artikeln visar hur man genomför elektrofysiologiska inspelningar av synaptiska svar på extensor muskeln i går benet av en kräftor och hur nervändslut visualiseras för att visa de grova morfologiska skillnaderna mellan hög-och låg-utgångsplintar nerv.

Abstract

Vi förklarar i detalj hur man exponera och genomföra elektrofysiologiska inspelningar av synaptiska svar för hög (phasic) och låg (tonic) utgång motoriska nervceller innervating extensor muskeln i går benet av en kräftor. Tydliga skillnader finns i fysiologi och morfologi phasic och tonic nervändslut. Den tonic Axon innehåller många fler mitokondrier, som gör det möjligt att ta en viktig fläck mer intensivt än phasic axonet. Den tonic terminaler har varicosities och phasic terminalen är filiform. Den tonic Terminalerna är låga i synaptisk effekt men visar dramatiska underlättas svar. Däremot phasic terminalerna är höga i quantal effekt men visar synaptisk depression med hög frekvens stimulering. Den quantal effekt mäts med en samlingspunkt macropatch elektrod placeras direkt över visualiseras nervändslut. Både phasic och tonic terminaler innerverar samma muskelfibrer, vilket tyder på att inneboende skillnader i nervceller, snarare än differentiell bakåtsträvande feedback från muskel, står för den morfologiska och fysiologiska differentiering.

Protocol

1) Inledning

Motoriska nervceller kommunicerar med en muskel fiber med synapser som gemensamt kallas en neuromuskulära förbindelsen (NMJ). NMJs kan nås lätt i de flesta förberedelserna kräftor muskler. Många av de kräftor NMJs demonstrera icke-tillsatta excitatoriska postsynaptiska potentialer (EPSP) liknande den sorterade elektriska signaler som genereras i postsynaptiska dendriter i däggdjurs CNS eller svar subthreshold noteras i ryggradsdjur NMJs (Wiersma & Van Harreveld, 1938, Katz & Kuffler, 1946) . Kräftorna NMJs kan tjäna som grundläggande synaptiska modeller för att ge allmänna insikter i synaptisk transmission och synaptisk differentiering.

Generellt Motorenheterna reglera de aspekter av djurens beteende genom den typ av synaptiska kommunikation på NMJs och egenskaper muskler. Sedan den första observationen av "snabba" och "långsam" muskelsammandragningar i krabba och kräftor närmare muskler (Lucas, 1907, 1917), har liknande muskulös kontraktila differentiering har beskrivits i andra typer kräftor muskler t.ex. i buken flexors (Kennedy & Takeda, 1965a , b) och extensorer lem (Van Harreveld & Wiersma, 1936). "Fast" värkarna initiera snabba svar. Till exempel är det kräftstjärtar vända ett snabbt agerande. "Slow" värkarna hålla långsamma rörelser och bidra till att upprätthålla hållningen (Bradacs et al., 1997). Motsvarar "snabbt" och "långsam" muskelsammandragningar, "phasic / hög effekt" och "tonic / låg effekt" är i stort sett används för att beskriva motoriska nervceller. Skillnaden i hastighet och tidpunkten för muskelkontraktion är delvis relaterade till presynaptiska skillnader i synaptiska struktur och synaptiska styrkan (King et al., 1996). Myofibrillar protein isoform uttryck är också viktig i kontraktila skillnader, men i beredningar likt benet extensor muskler, där en given fiber innerveras av båda typerna av motoriska nervceller, ligger fokus på synaptiska skillnader i terminalerna, eftersom terminalerna aktien samma målcellen (Mykles et al., 2002). En tidigare studie undersökte två excitatoriska motoriska axoner av benet extensor och beskrev phasic och tonic fenotyper (Bradacs et al., 1997). I denna rapport visar vi hur du utför dissekering och få inspelningar så att andra kan fortsätta undersöka egenskaperna hos det synaptiska skillnader i dessa nervändslut.

Sett med transmissionselektronmikroskopi, olika antal sektioner som erhållits från tonic och phasic terminaler på kräftor benet extensor muskler visade att tonic terminaler innehåller mer RRP blåsor än phasic anslutningar, mitokondrierna är vanligare i tonic nervceller och synapser på phasic terminaler är mer komplexa än de på låg-output synapser, eftersom de innehåller flera aktiva zoner med varierande avstånd (Miller et al, 2002; Johnstone et al, 2008;. King et al, 1996;.. Bradacs et al, 1997). Det låg-utgång tonic terminaler är också mer mottagliga för att öka synaptisk transmission med neuromodulator serotonin (5-HT) än är phasic terminaler (Cooper et al., 2003).

Det faktum att tonic och phasic NMJ finns på samma muskelfiber gör det lättare att bedöma presynaptiska skillnader på en viss muskel fiber och ta itu med frågor av muskeltrötthet, synaptisk depression och synaptic överhörningen. Olika frågor återstår att lösa i denna beredning, till exempel om det finns skillnader i den postsynaptiska receptorn densitet och glutamat subtyper receptorn i postsynaptiska mål för tonic och phasic terminaler, men en bättre förståelse av de grundläggande skillnaderna i anatomi och fysiologi av dessa två motoriska enheter kommer stöd till uppbyggnad av en djupare kunskapsbas. Förhoppningen är att de grundläggande principerna lärt sig i denna synaptiska preparatet kommer att tillämpas på andra synapser i olika preparat och kommer att förbättra framtida utredningar i denna synaptiska modellen av kräftor.

2) Metoder

  1. Alla experiment utförs på den första eller andra promenader ben av medelstora kräftor (Procambarus clarkii). Djuren är individuella boxar i plast behållare med oxygenized vatten. Temperaturen på djuret rummet är i intervallet 13 ° C-16 ° C. Djuren utfodras med torr fisk mat och vatten byts på en vecka.

    Figur 1
    Figur 1: Schematisk bild av en kräfta promenader benet och sex distala segment.
  2. Distala delen av promenader benet i ett kräftor är anatomiskt uppdelad i sex segment (Figur 1). Benet extensor ligger i meropodite och nerv bunt som ska isoleras är nära till meropodite ischiopodite gemensamt. Den toniska eller phasic axon kan selektivt stimuleras som needed för fysiologiska ändamål efter de utsätts för.
  3. Cooper och Cooper (2009) beskrivs några aspekter av den inledande dissektion, inklusive metoder för att avslöja Excitor i öppnaren motor neuron i meropodite regionen, men deras beskrivning inte ger den vård som krävs för att skydda extensor muskler från skador, eftersom det var inte behövs för att ta itu med förberedelserna öppnaren muskeln. För att skydda extensor, är den första eller andra promenader benet bort från kräftor, som mäter 60-10 cm i kroppslängd (Atchafalaya Biological Supply Co, Raceland, LA), genom att förmå djuren att automatisera lem med kraftfulla nyper distalt om frakturen planet i ischiopodite segmentet. Benet är placerad på dissekering plattan med den laterala (yttre sida) vänd mot betraktaren. Benet vrids runt tills betraktaren kan vara säker på utsidan (laterala sidan) är vänd uppåt på dissekering plattan, oftast med välvda uppåt (Figur 2). Placering av benet på en bit papper gör det lättare att vända beredningen samtidigt som dessa nedskärningar.

    Figur 2
    Figur 2: Den laterala sidan av meropodite, vanligtvis den sida som är välvd och är vänd uppåt på dissekering plattan.
  4. Med en skalpell blad brytare och hållare, har en vass rakblad används för att etsa nagelbanden tills bara skära igenom i det mönster som visas i figur 3 för meropodite segmentet. Man ser till att inte skära för långt distalt på rygg för att ventrala skära av meropodite-carpopodite gemensamt.

    Figur 3
    Figur 3: meropodite segment med linjer som föreslagits mönster för etsning ut genom fönstret på nagelbanden.


    Beredningen är placerad i koksaltlösning. Den dissektion maträtt bör ha en Sylgard (Dow Corning) beläggning på undersidan (1 cm tjock). Den Sylgard används så att insekten stift kan fastna i den för att hålla beredningen fortfarande. Vid denna punkt, är ett stift har fastnat i mitten av carpopodite segmentet och i dorsala delen av ischiopodite segment (Figur 4). Dissekerade förberedelser badar i vanliga kräftor saltlösning, modifierad från Van Harreveld s lösning (1936), som är gjord med 205 NaCl, 5.3KCl, 13,5 CaCl 2, 2H 2 O, 2,45 MgCl 2, 6H 2 O, 5 HEPES och anpassas till pH 7,4 (i mm).


    Figur 4
    Figur 4: meropodite segment med skära fönster lyfts bort. Observera platsen för dissekering stift.
  5. Nagelbanden är försiktigt lyfts i distala region och muskelfibrer skärs bort från nagelbanden genom att göra slag mot basen av benet. Nagelbanden kan lyftas av.
  6. Den apodeme (senan) skärs i meropodite-carpopodite gemensamt. En nål placeras på insidan av flexor senan för att visa var snittet ska göras (Figur 5). Senan är då kläms där det skars med pincett och flexor musklerna dras av genom att lyfta den i en caudal riktning (Figur 6), utsätta de viktigaste benet nerv och extensor muskler.

    Figur 5
    Figur 5: apodeme av flexor muskel är markerad genom att tränga undan den från flexor med en nål.


    Figur 6
    Figur 6: apodeme av flexor musklerna bryts och tas bort med omsorg för att inte skada de viktigaste benet nerv.
  7. Den viktigaste benet nerven skärs i meropodite-carpopodite gemensamt och försiktigt dras tillbaka över extensor muskler. Den mediala ytan av muskeln används i hela denna studie. Separationen av nerven till extensor muskler från den huvudsakliga benet nerv kan förbättras genom att försiktigt dra den distala stumpen av de viktigaste benet nerven vid sidan av preparatet. När peeling de viktigaste benet nerven tillbaka över extensor muskeln kan små grenar av Axon behöva sänkas. Dessa grenar från den inhibitoriska motor neuron till extensor muskler. De större bunt förgreningar från de största benet nerven nära den proximala änden av meropodite är den lilla nerv bunt av intresse.

    Figur 7
    Figur 7: Den viktigaste benet nerv skärs och drog tillbaka i en proximal riktning.


    Denna nerv bunt kan ses med metylenblått färgning (Figur 8) eller med 4-Di-2-ASP fluorescerande färgning (Figur 9).


    Figur 8
    Figur 8: De extensor muskler som färgats med metylenblått. Notera axonet förgrening och de två väl synliga axoner i synnerven. Röda pilarna Demark nerven spåret.


    Figur 9
    Figur 9: axoner av motorn nerv färgats med 4-Di-2-ASP. Den tonic Axon är mer ljust synlig grund av den ökade mitokondriella innehåll.


    Figur 10A Figur 10A: Individuella terminaler phasic och tonic nervceller färgats med 4-Di-2-ASP. Notera varicosities på tonic terminaler och tunna natur phasic terminaler.


    Figur 10B
    Figur 10B-Tonic noteras


    Figur 10C
    Figur 10C-Phasic noteras

3) Fysiologiska Profiler

  1. För att observera den excitatoriska postsynaptiska potentialer (epsps) av tonic eller phasic nervceller, är en av de isolerade axoner i nervknippen stimuleras av ett sug elektrod (Figur 11) är ansluten till en Grass stimulator samtidigt intracellulär potential i muskeln kontrolleras (Johnstone et al., 2008). Stimulering vid 70 Hz appliceras på tonic axonet i syfte att främja ett förenklat svar för låg produktion NMJs, eller en enstaka puls (1 Hz) tillämpas på phasic axonet för att få stora epsps av den höga produktionen NMJs som visas i figur 12. Den EPSPS registreras till en dator via en PowerLab/4s gränssnitt.

    Figur 11
    Figur 11: Stimulera elektrod placerad över en enda axon inom nerv bunt. Notera den gröna linjen beskriver två huvudsakliga axoner.


    Figur 12
    Figur 12: postsynaptiska potentialer (epsps) av tonic eller phasic nervceller som erhålls genom intracellulära inspelningar.
  2. Utredning i naturen av synaptiska underlättande och synaptisk depression kan bli kontaktade av olika experimentella paradigm med låg och hög effekt NMJs. Underlättande av låg produktion NMJs beror på frekvensen, som visas för de 20, 40 och 60 Hz pulser på cirka 20 stimuli (Figur 13).

    Figur 13
    Figur 13: EPSPS som svar på ett tåg av stimulering pulser ges vid tre olika frekvenser 20, 40 och 60 Hz i normal kräftor saltlösning.
  3. Graden av synaptisk depression frekvens av stimulering är också relaterad till hög effekt NMJs. Figur 14 visar en kontinuerlig 5 Hz av stimulering trycka på NMJ över 30 min. Med högre stimulans frekvens, kommer preparatet hämmar snabbare (Bradacs et al., 1997).

    Figur 14
    Figur 14: EPSP amplitud phasic svar under 5 Hz stimulering för att framkalla depression.

4) Quantal Responses

  1. Ett förfarande liknande det som beskrivs för öppnaren muskeln i kräftor (Cooper och Cooper, 2009) används i denna beredning. Den quantal EPSPS direkt över identifierbara delar av nervändsluten registreras genom att placera lumen i ett makro-patch inspelning elektrod på synaptisk varicosities visualiseras med den vitala färgämnet 4-Di-2-Asp (5 mikroM, 5-min behandling, Cooper et al, 1995;. Magrassi et al, 1987).. Den spontana såväl som framkallat quantal svar kan registreras längs nervändslut. Den framkallade och spontant synaptiska potentialer är inspelade med makro-patch elektrod (Dudel, 1981; Wojtowicz et al, 1991;. Mallart, 1993). Kimax glas (ytterdiameter: 1,5 mm) drogs och brand-polerade för att producera patch tips med innerdiametrar från 10 till 20 m (Figur 15).

    Figur 15
    Figur 15: lumen i ett makro-patch inspelning elektrod.


    Lumen i elektroden är fylld med bad-mediet. Förstärkaren är den samma som används för den intracellulära inspelningar som nämns ovan. Elektrod och tätning motstånd kan bestämmas genom att testa strömpulser genom elektroden. I våra experiment varierade sigill motstånd från 0,3 till 1,0 MOhm och elektroden motståndet varierade från 0,5 till 1,0 Mohm. Seal motstånd kan övervakas under hela inspelningen.
  2. Direkt räkning av quantal händelser som är möjligt med låga stimulering frekvenser. För varje framkallat svar kan antalet quantal händelser lätt bestämmas för den låga utgångar (Figur 16). Dessa direkta räknas kan uppskatta den genomsnittliga quantal innehållet (Del Castillo & Katz, 1954;. Cooper et al, 1995). Sedan väckte hög effekt NMJs producera flera quantal framkallade händelser, den genomsnittliga amplituden eller område där nedböjningar, tillsammans med den genomsnittliga maximala amplitud eller område där spontana händelser kan användas för att lämpligaximate medelvärdet quantal innehållet (Cooper et al., 1995).

    Figur 16
    Figur 16 Fokal spår som spelats in från en phasic och en tonic NMJ.

    Figur 17
    Figur 17

Discussion

Vi har visat i denna rapport hur man dissekera, spela in och mäta synaptiska svar i en unik kräftor neuromuskulär förberedelse där både hög och låg-utgångsplintar innerverar samma muskelfiber. Den neuromuskulära förberedelser i kräftor erbjuder många fördelar jämfört med ryggradsdjur neuromuskulära korsningar, eftersom endast ett fåtal excitatoriska motoriska nervceller behövs för att innerverar en muskel, och eftersom nervceller kan identifieras från förberedelse till förberedelse (Atwood, 1976). Dessutom är den excitatoriska neurotransmittorn glutamat, och den excitatoriska postsynaptiska potentialer (EPSP) är graderade, alltså, de biofysiska egenskaper graderade händelser är analogt med dendriter av nervceller i CNS hos ryggradsdjur. Den quantal strömmar, kan dock följas direkt på postsynaptiska webbplatser (Cooper et al., 1995).

Repetitiva 5 Hz stimulering av phasic nerv ger upphov till stora EPSPS som i hög grad blir deprimerade efter flera minuter. Denna typ av depression är vanligt i leddjur phasic neuromuskulära korsningar (Atwood och Cooper, 1996). Förekomst av tonic terminaler längs phasic terminalerna gör att man kan bedöma om den postsynaptiska mål är kraftigt modifierad under och efter depressionen under phasic motoriska neuron. Dessutom låg utgångar ger en fin förberedelse för att undersöka mekanismerna som ligger bakom synaptiska underlättande (Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah och Cooper, 2009)

Den höga utgångarna ger en lekplats för att undersöka modulering i graden av synaptiska depression och återhämtningsprocessen. Tillgängliga och livskraftiga preparat bör hjälpa till att dechiffrera mekanismerna bakom synaptisk depression. I detta kräftor benböjning beredning, är exogen tillämpning av serotonin annat verktyg för att undersöka återvinning av synaptiska depression och eventuellt ett sätt att främja utredningen av mobiliseringen av synaptiska vesikler pooler. Detta preparat innehåller flera experimentella fördelar, eftersom enskilda muskelfibrer innerveras av både phasic och tonic motoriska nervceller.

Eftersom serotonin ökar antalet blåsor som släpps med framkallade stimulans, och eftersom det främjar återhämtning under depression, är det uppenbart att det finns en viss modulering av vesikler pooler för att öka sannolikheten för fusion med serotonin närvarande (Johnstone et al. 2008 ; Logsdon et al, 2006;. Sparks et al, 2004).. Modeller som skulle förklara dynamiken i vesikler pooler inom presynaptiska nervändsluten under lågfrekvent stimulering, i motsats till en deprimerad tillstånd, måste också anses vara bland de olika experimentella protokoll som är möjliga med denna beredning.

Det har konstaterats i andra system att ca 30% av vesikler poolen genomgår en snabb återvinning, medan resten av återvunna blåsor gå igenom en traditionell långsam återvinning väg genom endoplasmatiska retiklet (Harata et al, 2001;. Tsien et al. , 2001). Sådana dubbla vägar kan också finnas i detta system. Om ATP saknas i den deprimerade tillståndet i presynaptiska terminalen, då lastning och lossning kanske inte kan ske, och därför skulle många fler lossas blåsor kvar på synaptiska ytan. Eftersom fler blåsor snabbt frigörs när terminalerna är utsatta för 5 HT, är det möjligt att mer ryms inom de lätt öppningsbara poolen (RRV). Men i sitt deprimerade tillstånd med minskad ATP kan lastning och lossning blockeras även i närvaro av 5 HT, som återigen lämnar lossas blåsor vid synaptisk ytan. Eftersom de preliminära uppgifterna tyder på att fler blåsor släpps över tiden med förlängd 5 HT exponering och stimulans, fördelningen av vesikler poolen från den snabba och långsamma återvinning vägar kan vara sned att ha kompetenta vesikler för ny-release (från Johnstone et al. 2008; se recensioner-Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah och Cooper, 2009)

Med de metoder för centrala macropatch inspelningar av postsynaptiska strömmar och åtgärder av enskilda kvanta från definierade områden av motorn nervändsluten kan man ställa frågor för att avgöra om synaptisk depression sker som en följd av färre blåsor släpps eller på grund av förändringar i funktionen av postsynaptiska receptorer. Det har visat att blåsor är mer känsliga för fusion vid phasic NMJ av denna förberedelse för en lika kalcium exponering (Miller et al. 2005), som sannolikt står för den högre genomsnittligt quantal innehåll phasic terminaler (Msghina et al. , 1998, 1999). Dessutom kan skillnader i kalcium bindande protein frequenin (Jeromin et al., 1999) och ultrastruktur (King et al., 1996) bidrar till den differentiella synaptiska effekten (Cooperet al., 2003).

Vissa tidigare studier har utforskat muskler fenotyp av extensor muskelfibrer (Bradacs et al, 1997;. Cooper et al, 2003.). Jämföra regleringen av muskeln differentiering för rent tonic och phasic fibertyper i kräftor till blandade fibertyper, som till benet extensor som slött är innerveras kan ge ledtrådar till muskler fenotyp uttryck och reglering (Laframboise et al, 2000;. Sohn et al, 2000;. Griffis et al, 2001;. Mykles et al, 2002)..

Många grundläggande frågor återstår att behandlas i neurobiologi, och denna förberedelse kan stödet i kampen mot några av dem. Några frågor av intresse inom området idag som skulle kunna närma sig med benet extensor är: 1) Fastställande av cellulära mekanismer som ligger bakom synaptisk depression inom hög-utgångar (Är depression på grund av en minskning av Ca2 + inträde, avsaknaden av en behörig lätt öppningsbara vesikler (RRV) pool, och / eller ändras postsynaptiska mottaglighet?) 2) Fastställande av mekanistiska rollen av 5-HT när den tillämpas efter induktion av synaptiska depression för att främja en snabbare återhämtning, och 3) Fastställande av huruvida formen på quantal strömmar som uppstår stimulerande phasic terminaler är att ändras under induktion av depression att ta itu med pre-och postsynaptiska komponenter i synaptisk depression.

Detta NMJ är viktigt för pågående forskning och framtida utredare eftersom det ger oss möjlighet att få relevant information som behandlar underhuggare mekanismer synaptiska prestanda som mäts direkt vid släpp platser. Aktuell forskning på detta område är att informera om modulering av synaptisk depression genom att 5-HT och dynamiken i vesikler pooler. Sådana ämnen avser de grundläggande grunderna i synaptisk transmission relevanta för alla neurala system.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Vi tackar Mr Craig D. Slaven (Engelska institutionen, University of Kentucky) för redaktionell hjälp. Med stöd av University of Kentucky, Institutionen för biologi, Office studierektor och College of Arts & Sciences.

Materials

  1. Crayfish (Procambarus clarkii). Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA., USA.
  2. Standard crayfish saline:
    • Modified from Van Harreveld's solution (1936). (in mM) 205 NaCl; 5.3 KCl; 13.5 CaCl22H2O; 2.45 MgCl26H2O; 5 HEPES and adjusted to pH 7.4
  3. Dissection tools: Fine #5 tweezers, fine scissors, knife blade holder, #26002-20 insect pins (all obtained from Fine Science Tools (USA), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139)
  4. Sylgard coated dissection dish, a recording dish either constructed with suction electrode or use a suction electrode and anther manipulator to hold a suction electrode.
  5. Dissecting microscope with zoom function for intracellular recordings. For focal recording on visualized terminals a compound microscope with upright objectives (4 x and 20X) is used. One needs a Hg light source.
  6. Standard intracellular amplifier and A/D board for on line recording to a computer. Electrical signals are recorded on line to a PowerLab/4s interface (ADInstruments, Australia). We use standard software from ADInstruments named Chart or Scope.
  7. Chemicals:
    • We use a vital fluorescent dye, 4 [4 (diethylamino) styryl] N methylpyridinium iodide (4 Di 2 Asp; Molecular Probes, Eugene, OR), to visualize the varicosities (Marigassi et al., 1987; Cooper et al., 1995a). All saline chemicals were obtained from Sigma chemical company (St. Louis, MO).
  8. For intracellular recordings we use glass capillary tubing (catalogue # 30-31-0 from FHC, Brunswick, ME, 04011, USA) and for focal macropatch electrodes we use Kimax-51, Kimble Products Art. No. 34502, ID 0.8-1.1mm, length 100mm. The intracellular electrode should have a resistance of 20 to 30 mOhm. The macropatch electrode is constructed by breaking off the tip of the glass after a fine tip was made from an electrode puller. The broken off tip needs to be a clean perpendicular break about 20μM in diameter. The tip is then heat polished to about 10μM inner diameter. The shaft of the electrode is then run over a heating element to cause it to bend about 45 degrees with a gradual bend. This produces a flat or perpendicular electrode lumen over the nerve terminal as the angle with the micro-manipulator will produce about another 45 degrees to the preparation.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. , Forthcoming.

Tags

Neurovetenskap synaps kräftor neuromuskulära förbindelsen ryggradslösa motorneuron muskel-
Fysiologiska Inspelningar av hög och låg utgång NMJs på Kräftor benböjning Muscle
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wu, W. H., Cooper, R. L.More

Wu, W. H., Cooper, R. L. Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle. J. Vis. Exp. (45), e2319, doi:10.3791/2319 (2010).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter