Summary
وقد ثبت الماوس زرع قلب منتبذ النموذج من قبل محققين كثير أن يكون وسيلة هامة لدراسة آليات الرفض والاستجابة المناعية. ومع ذلك ، فإن التقنيات المستخدمة لا تزال صعبة. عن طريق تعديل معيار تقنيات لقد حققنا نجاحا مع أكثر من 1000 عملية زرع.
Abstract
وقد استخدمت في عمليات زرع القلب منتبذ الماوس على نطاق واسع منذ أن تم عرضه من قبل الدكاترة. كوري و راسل في عام 1973. هو قيمة خاصة لدراسة ورفض الاستجابة المناعية الآن أن أجدد المعدلة وراثيا والفئران بالضربة القاضية جين المتاحة ، ولقد تم وضع عدد كبير من الكواشف المناعية. نموذج زرع القلب هو أقل صرامة من النماذج زرع الجلد ، وعلى الرغم من أن أكثر تحديا من الناحية التقنية. قمنا بتطوير تقنية تعديل وأكملت أكثر من 1000 حالة ناجحة لزرع قلب منتبذ في الفئران. عند اتخاذ مفاغرة من الأبهر الصاعد والأبهر البطني ، يتم وضع الغرز بقاء اثنين في المؤسسات الرئيسية القريبة والبعيدة من الشريان الأورطي البطني المتلقي مع الجهة المانحة ليالي الأبهر الصاعد ، ثم باستخدام 11-0 خياطة لمفاغرة على جانبي الأبهر مع استمرار الغرز. الغرز البقاء جعل مفاغرة أسهل و11-0 هو حجم خياطة المثالي لتجنب النزيف والتجلط.
عند اتخاذ مفاغرة من الشريان الرئوي والوريد الأجوف السفلي ، يتم إجراء الغرز اثنين في البقاء على قمة الدانية والقاصية من الوريد قمة المتلقي ليالي الأجوف السفلي مع الشريان الرئوي المانحة ق. إغلاق الجدار الأيسر من الوريد الأجوف السفلي والشريان الرئوي مع الجهات المانحة ليالي الخيوط المستمرة في داخل الوريد الأجوف السفلي بعد ، واحد مع بقاء عقدة قمة القريبة خياطة الجدار الأيمن من الوريد الأجوف السفلي والشريان الرئوي الجهة المانحة ليالي هي مغلقة مع استمرار الغرز خارج الكهف الوريد السفلي مع 10-0 الغرز. هذا الأسلوب الأسهل لتنفيذ لأن يتم مفاغرة فقط على جانب واحد من الوريد الأجوف السفلي والغرز 10-0 هو الحجم المناسب لتجنب النزيف والتجلط. في هذه المقالة ، ونحن نقدم تفاصيل هذه التقنية لاستكمال الفيديو.
Protocol
إعداد المانحة والحصاد القلب :
- الفأر هو تخدير مع حقن داخل الصفاق من مستلق بنتوباربيتال ووضعها على ارض الملعب من المنطوق.
- يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. وتراجع محتويات البطن بشاش إلى اليسار ، من أجل كشف الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي.
- يتم حقن 1 مل من الهيبارين (10u/ml) في الوريد الأجوف السفلي للheparinization.
- يتم إجراء بضع الصدر : يتم تقسيم الضلوع على جانبي العمود الفقري والصدر الجدار الأمامي هو levered تصل إلى فضح القلب.
- و تربط الوريد الأجوف السفلي ، والوريد الأجوف العلوي والوريد مع المفردة 6-0 الحرير وتنقسم متفوقة على الحروف المركبة.
- يتم فصل الشريان الأورطي والشريان الرئوي تصاعدي ومقسمة على النحو بشكل أقصى قدر ممكن.
- و تربط الأوردة الرئوية القاصي ومقسمة إلى العلاقات بين البلدين.
- هو perfused القلب مع 4 درجة مئوية حل المالحة.
- يتم تخزين الجليد في القلب في حل المالحة الباردة.
إعداد المتلقي وزرع
- الفأر هو تخدير مع حقن داخل الصفاق من مستلق بنتوباربيتال ووضعها على ارض الملعب من المنطوق.
- يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. وتراجع محتويات البطن خارج البطن بشاش لفضح الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي.
- يتعرض لها فروع الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي وligated مع 10-0 الغرز.
- توضع الأربطة الداني والقاصي حول الأبهر والوريد الأجوف السفلي على التوالي.
- يتم إجراء فصد في الوريد الأجوف السفلي من المتلقي مع إبرة قياس 30. ثم تم تمديده لافتتاح بطول يساوي الأبهر والرئوي مع المانحين الدقيقة المقص.
- يتم إجراء بضع الأبهر في الشريان الأورطي البطني للمتلقي مع إبرة قياس 30.
- والمروية الأورطى فتح البطن والوريد الأجوف السفلي بمحلول ملحي.
- يوضع القلب المتبرع على الجانب الأيمن من البطن المستلم وتتناول بشاش.
- يتم وضع الغرز البقاء في المؤسسات الرئيسية القريبة والبعيدة من الشريان الأورطي البطني المتلقي مع الجهة المانحة الأبهر الصاعد.
- الانتهاء من مفاغرة من الجانب الأيسر من الشريان الأورطي البطني المتلقي والمتبرع الأبهر الصاعد مع استمرار الغرز.
- تصنع الخيوط البقاء الأولين في ذروة الدانية والقاصية من الوريد قمة المستلم الأجوف السفلي مع الشريان الرئوي الجهة المانحة للمفاغرة من الشريان الرئوي المتبرع والمتلقي في الوريد الأجوف السفلي.
- إغلاق الجدار الأيسر من الوريد الأجوف السفلي والشريان الرئوي مع المانحين الغرز المستمرة في داخل الوريد الأجوف السفلي.
- بعد واحد عقدة مع خياطة قمة البقاء الداني ، يتم إغلاق الجدار الأيمن من الوريد الأجوف السفلي والشريان الرئوي الجهة المانحة مع استمرار الغرز خارج الكهف الوريد السفلي.
- يتم تشغيل القلب المتبرع عبر إلى الجانب الأيمن من البطن المستلم. غلقت جدار الشريان الأورطي حق المتلقي في البطن والجهة المانحة مفاغرة الأبهر الصاعد مع استمرار الغرز.
- بعد إجراء مفاغرة ، تتم إزالة ربطة قاصية للتحقق من نزيف من مفاغرة.
- إذا كان هناك القليل لعدم وجود نزيف من مفاغرة ، تتم إزالة ربطة القريبة. قلب يملأ المتبرع بالدم فورا ، ولون القلب تصبح حمراء وتبدأ مرة أخرى للفوز.
- يتم إرجاع الأمعاء إلى البطن ، والتي هي مغلقة مع الغرز 6-0 المستمر.
- يتم وضع الماوس المتلقي على منطقة دافئة. بعد ساعة واحدة المتلقي للشفاء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
النتائج
لقد أجرينا بنجاح أكثر من 1000 حالة لزرع القلب في الفئران منتبذ وحقق أكثر من 90 ٪ نسبة النجاح في سلالات مختلفة من الفئران ، بما في ذلك نوع البرية ، الفئران المعدلة وراثيا والجينات خروج المغلوب.
مناقشة
منذ الدكاترة. وقدم كوري راسيل منتبذ زرع القلب في الفئران في عام 1973 ، أثبت هذا النموذج لتكون ذات قيمة خاصة لدراسة استجابة مناعية الرفض ووضع استراتيجيات للمناعة الرواية. ويمكن استخدام هذا النموذج على نطاق أوسع الآن بسبب ظهور العديد من الفئران المعدلة وراثيا بالضربة القاضية جين قدمت طرقا جديدة لدراسة آليات الرفض / التسامح. قد زرع قلب أوعية دموية تكون نموذجا أكثر ملاءمة لعمليات زرع الأعضاء الصلبة السريرية. على الرغم من أن عمليات زرع الجلد أو تحت الجلد لزرع قلوب الأطفال حديثي الولادة هي أبسط من الناحية التقنية ، واتساع الأوعية الدموية ما هو مطلوب للبقاء الكسب غير المشروع في هذه زرع حساسة بشكل خاص لردود خيفي. وهكذا ، والجلد وتحت الجلد سماع زرع يمكن أن تكون مفيدة لاختبار صارم للتسامح ، ولكن ليس من أجل تطوير أو تحسين بروتوكولات إحداث مناعة أو التسامح.
تعديل نحن زرع القلب الوعائية التقنية في عدة طرق لتحسين الكفاءة ومعدلات النجاح :
- وينبغي أن تروى القلب المتبرع بمحلول ملحي من الأبهر الصاعد حتى يصبح لون القلب الخفيفة بعد الحصاد.
- وينبغي ligated فروع الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي من المتلقي مع 10-0 خياطة الجروح ، ومنع النزيف أثناء عملية التجلط وبعد العملية.
- وينبغي أن تروى تجويف الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي من المتلقي مع المحلول الملحي حتى لا يترك الدم. هذا يمكن منع تجلط الدم بعد العملية.
- وينبغي تجنب فقاعات الهواء داخل الأوعية عند اتخاذ anastomoses.
- ينبغي أن anastomoses الشريان 11-0 استخدام الغرز ، للمساعدة في منع النزف من anastomoses.
- يجب على شق من الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي للمتلقي يكون مساويا لفتح الشريان الرئوي والشريان الأبهر الصاعد من القلب المتبرع.
- فمن المهم أن يكون هناك مجال تشغيل واضحة وتوسعية ، وبالتالي استخدام 6-0 خياطة بدلا من المشابك لانسداد الشريان الأورطي مؤقتا والوريد الأجوف السفلي.
استنتاج
على الرغم من أن تقنية زرع القلب في الفئران منتبذ يمثل تحديا تقنيا ، وهو أسلوب مهم لدراسة alloresponses. وقد أدت الممارسات والتقنية تعديلات في معدل نجاح اكثر من 90 ٪ في المختبر لدينا. ونحن نعتقد أن الفيديو والمخطوطة المرفقة سوف تساعد على تقليل منحنى التعلم بالنسبة للمختبرات التي ترغب في استخدام هذه التقنية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
References
- Corry, R. obert J., Winn, H. enry J., Russell, P. aul S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
