Summary
丝状的大脑中动脉闭塞，是一个研究小鼠缺血性中风的常见模型。
Abstract
中风是之间的死亡和残疾成人，尤其是在高度发达的国家，最常见的原因。然而，迄今为止的治疗方案是非常有限的的。为了满足新的治疗方法需要，中风的实验研究经常采用局灶性脑缺血啮齿动物模型。大多数研究人员使用的小鼠或大鼠大脑中动脉（MCA）的永久或暂时闭塞。
通过腔内缝合技术（所谓长丝或缝合模型）（MCA）的大脑中动脉近端闭塞可能是实验性中风的研究中最常用的模型。腔内MCAO模型提供了在一个相对非侵入性的方式重现短暂或永久MCA的领土缺血诱导的优势。腔内的方法中断的整个领土的这个动脉的血流量。因此，长丝闭塞逮捕流近端lenticulo纹动脉，供应基底节。长丝闭塞，在皮层和纹状体的重现性病变MCA的结果可以是永久或短暂。相比之下，MCA闭塞模型，诱导远端（lenticulo纹动脉分支）通常备用纹状体和主要涉及的大脑皮层。此外，这些模型需要去骨瓣。本文演示模型，硅涂层长丝引入左颈总动脉和先进的威利斯，它阻断大脑中动脉的起源圈沿颈内动脉。大脑中动脉闭塞的患者，是缺血性中风的最常见的原因。由于不同缺血时间间隔可自由选择在这个模型再灌注时间点上，可以产生不同程度的缺血性病变。再灌注去除咬合长丝至少部分模型自发或治疗（TPA）在人类的血栓栓塞血块溶解后恢复血液流动。
在这个视频中，我们将目前的基本技术以及主要缺陷和混杂因素，这可能会限制这个模型的预测值。
Protocol
为了保证高质量和可重复性，我们建议使用的标准操作程序（SOP）。在这个视频，发表在我们的实验室开发和使用的SOP应用1
1。大脑中动脉闭塞
- 小鼠与咨询兽医人员适当的麻醉制度麻醉。 （如诱导1.5 - 2％异氟醚和维护1.0 - 1.5％异氟醚2 / 3的N2O和1 / 3的氧气使用喷雾器）。
- 小鼠的体温保持在36.5 ° C ± 0.5 ° C在一个加热板手术。强烈建议，根据鼠标的直肠温度变暖的反馈控制的加热垫。
- 一个合适的代理（如70％酒精）消毒的皮肤和周围的皮毛和事后干燥。
- 中线颈部切口及软组织拉开。
- 左颈总动脉（LCCA）仔细解剖周围神经（不伤及迷走神经）和结扎是使用6.0/7.0字符串。也可用于5.0字符串。
- 然后分离左侧颈外动脉（莱萨）和第二个结。
- 接下来是孤立的，左侧颈内动脉（LICA）和6.0长丝准备了一个结。
- 左侧颈内动脉（LICA）和左侧翼腭动脉（LPA）获得良好的查看后，两动脉被裁剪，使用微血管剪辑。
- 之前，分叉的莱萨和LICA在LCCA切开一个小孔。然后引入一个单丝涂有硅固化剂混合物（见下文）的8.0尼龙LICA，直到它停在剪辑。要注意支付不进入枕动脉。 （图1）
- 剪切的动脉被打开，而灯丝插入到LICA闭塞Willis环的原产地的LMCA。
- 第三个结对LICA封闭，固定位置的灯丝。
- 小鼠接受生理盐水0.5毫升皮下注射量补货。缓解疼痛，利多卡因凝胶是在伤口局部应用。
- 如果再灌注的目的是，老鼠留30 - 90分钟在激烈的笼子闭塞，可以封闭伤口，用一个小的缝合片段。之后，进行第二次麻醉，结对ICA第三是瞬间打开灯丝撤回。
- 剩余的缝线缩短，适应与手术缝合皮肤。
- 所有的动物都收到如上所述，第二卷补货。
- 动物都放在了两个小时，体温控制在激烈的笼子。
- 动物必须每天检查，手术后不适的迹象。小鼠可能会表现出一定的手术减肥后。他们收到捣碎食物，在培养皿，培养皿放置在地板上，鼓励进食。七天每天食物取代。
2。假手术
- 深水作业的灯丝是插入到闭塞LMCA立即取消允许即时再灌注（1.8）。随后的操作是相同的，发生脑缺血（1.9 - 1.14）的动物，包括第二次麻醉。
3。灯丝的制备
- 应考虑灯丝不育。事后使用消毒设备，以及适当处理灯丝是无菌手术的先决条件。消毒的灯丝是困难的，因为许多常见的灭菌方法可能会恶化长丝的质量。然而，如辐射的方法，例如紫外线或γ射线，或化学灭菌，例如高活性气体，如环氧乙烷，都适用。
- 8.0锦纶长丝被切成长度为11毫米，在显微镜下
- 灯丝尖端必须超过8毫米的长度，完全并均匀地涂固化剂混合物的Xantopren中号黏膜和激活的NF Optosil
4。代表性的成果
血流量限制的期限，根据不同的电机和行为缺陷的结果。两个后30和脑缺血60分钟，在大多数情况下，动物抵抗力下降，横向推盘旋在运动障碍。温和的病变表现为一个在前面的李屈位置MBS。这些很容易观察到的迹象，可以用来作为手术成功的基本得分。
形态病变可使用或者组织学或磁共振成像（MRI）进行评估。六十分钟大脑中动脉闭塞，生产面积包括纹状体和大脑皮层组织pannecrosis，而30分钟，缺血引起主要限于纹状体的神经细胞死亡。梗死体积3（图2） ，我们预期标准偏差低于30％的一组操作。死亡率取决于阻断时间约5％后，30分钟缺血和10 - 60分钟后的20％。
另一种微创的可能性是使用激光多普勒血流计（LDF）的操作过程中，允许其成功的直接控制。在一个单个的动物，减少到10 - 20％preocclusion值明确表示局灶性脑缺血的成功归纳4然而，自卫队可以不被作为个体间的比较的方法使用，因为自卫队可以只测量定量的变化血（百分比）。流内的一个小而有限的组织样本量。它不给的血流量减少的空间范围的信息。
有几种测试，以评估中风后的行为方面，包括步态分析6,7，Rotarod 8，极测试9,10，不干胶去除测试11,12，13,14楼梯测试，梯级测试15,16和Morris水迷宫17。在所有这些测试中，受到缺血的小鼠比对照组动物执行较为成功。
图1。船只提供在小鼠大脑的架构（背景描绘）的计划。不同菌株可能会出现变化，例如的枕动脉，有时叶片颈内动脉。
图2。近端MCAO模型再灌注后不同时间点的典型病变大小的示意图。在中间，功能活动和脑血流量MCAO后的典型当然是描绘。 （MCAO：大脑中动脉闭塞，LDF激光多普勒血流测量）
Discussion
短暂的，18,19近端MCA闭塞模型，介绍了这里的模拟缺血性中风患者最常见的类型之一 。20变量灌注时间的基础上，该模型提供了不同档次的损害，从短暂性脑缺血发作（ TIA）到大不等包括主要部件的缺血半球梗死。这使研究人员研究中风后不同的病理生理机制。 20,21
手术可以在很短的时间内，生产高度重复性病变。不过，这需要彻底控制了混杂因素。22在操作技术的细微差别可能占不同的效果梗死。23,24此外，由于脑血管解剖的差异，不同的小鼠品系表现出不同的结果 。 25,26机构温度影响，低温导致较小的病灶27和热疗，更严重的赤字的神经损伤 ，28因此，温度控制和维护在这个模型是高度相关的 。29此外，血压和血气结果的重要混杂因素和需要30,31快速，微创方法的使用（非侵入性血压测量，适合和容易访问的采血网站）进行监测。建议。麻醉剂的选择也是非常重要的，因为有些人可能有保护作用，和/或血管扩张剂，例如异氟醚 32因此，接触麻醉应尽可能和规范化。我们排除经历了手术时间超过15分钟的动物。
剃须手术部位产生microabrasions和炎症，并释放头发片段。这可能会进一步加重炎症和促进当地的感染，这可能会影响中风的病理生理。住房条件，特别是使用浓缩，可能会影响中风的结果，并应标准化，并在研究报告中描述的。6,33,34使用环境的丰富和重复性其效果是一个讨论的问题。35另一个重要混杂因素是中风引起的感染的风险，特别是经过较长时间的缺血36的，这会导致额外的发病率和死亡率增加。37,38感染症状在3至5天左右，这已长期在这种模型的后续行动的重要后果。
产生结果，为发展新的治疗中风，标准化和质量控制策略有关，是非常重要的翻译中风在临床前研究39“良好实验室规范 ”40,41任务。
- 使用动物的适当和详细的描述;
- 样本量的计算和报告预期的效果大小;
- 纳入和排除标准，之前设置的研究;
- 随机的分配到组;
- 分配隐蔽性调查;
- 报告从分析中排除的动物;
- 盲法评估的结果;
- 报告潜在的利益冲突和研究经费。
Disclosures
动物实验Landesamt附耳Gesundheit，柏林，德国和Soziales规定的准则和法规的规定执行。
Acknowledgments
这项工作是由欧洲共同体的第七框架计划（FP7/2007-2013）根据赠款协议N ° 201024和N ° 202213（欧洲中风网络）。 Bundesministerium献给教化和Forschung（柏林中风研究中心）和德意志研究联合会（Exzellenzcluster NEUROCURE）的额外资金。
作者想感谢Mareike Thielke（Dep.实验神经病学，柏林Charité）在操作过程中和埃尔克路德维希（Charité视频服务）制作动画的支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical scissors (skin cut) | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| 2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | Fine Science Tools | 11253-20 | |
| Spring scissors (according to Vannas) | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| Applying forceps for micro clamps | Fine Science Tools | 00072-14 | |
| Micro vascular clamp (e.g. S&G B1-V) | Fine Science Tools | 00396-01 | Also Serrefine possible |
| 2 Hemostats according to Hartmann | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Needle holder (according Olsen-Hegar or other) | Fine Science Tools | 12002-14 | |
| Standard anatomical forceps (for wound closure) | Fine Science Tools | 11000-12 | |
| 5/0 sutures | Suprama | for vascular ligatures | |
| 6/0 sutures | Suprama | for skin suture, 5/0 also possible | |
| Lidocaine (e.g. Xylocain Gel 2%) | AstraZeneca | or other local pain relief | |
| Dissecting microscope (stereo microscope), magnification 6x to max. 40x | Leica Zeiss | MZ6 Stemi2000C | |
| Cold light source | Leica Microsystems | KL1500 | |
| Temperature feedback controlled heating pad system | Fine Science Tools | 21052-00 | With mouse pad and small probe |
| Anaethesia system for isoflurane | |||
| Isoflurane | Abott | ||
| Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 | Heated cage |
| 8.0 nylon filament | Suprama | TEL181005 | for coating |
| Scalpel | For cutting filament in pieces | ||
| Ruler | To cut correct length of filament | ||
| Xantopren M Mucosa | Heraeus Instruments | ||
| Activator Universal Plus | Heraeus Instruments | Optosil - Xantopren | |
| 2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | Fine Science Tools | 11253-20 | |
| A soft underlay for storing and grasping the uncoated filaments | e.g. swabs, foam, … | ||
| Receptacle for new build filaments | e.g. petri dish, flexible foam,… |
References
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