Summary
तीव्र myocardial infarction (AMI) के चूहे मॉडल हृदय pathophysiological और शारीरिक समारोह पर एक एमआई के परिणाम का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है.
Protocol
1. आपरेटिंग क्षेत्र तैयार
- ऑपरेटिंग सतह पहली बार 70% इथेनॉल के साथ क्षेत्र disinfecting के द्वारा तैयार की है.
- सभी शल्य चिकित्सा उपकरणों के लिए सर्जरी से पहले एक गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ (और व्यक्तिगत चूहे सर्जरी के बीच) के साथ निष्फल हो रहे हैं. इन उपकरणों में शामिल हैं: शल्य कैंची (2), (1) संदंश, घुमावदार संदंश (1), सुई धारक (2), और एक छाती rectractor.
- कपास धुंध और applicators के लिए उपलब्ध क्रम में खून बह रहा प्रबंधन कर रहे हैं.
- Homeothermic कंबल प्रणाली (हीटिंग पैड), 37 में जानवर के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए इस्तेमाल किया जा के तापमान को समायोजित ± 1 ° C क्रम में शरीर के तापमान में एक नाटकीय गिरावट को रोकने के लिए, एक रोधगलितांश के आकार पर निर्भर है अच्छी तरह से शरीर का तापमान (Tarnavski एट अल.) के रूप में रोड़ा की अवधि.
- सर्जरी से पहले दिन, संज्ञाहरण के पहले, प्रत्येक जानवर buprenorphine (0.1-2.5 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग) और carprofen मौखिक (1 गोली Rimadyl, Bioserv गोली) गोलियों की एक खुराक प्राप्त होगा. तत्काल सर्जरी करने के लिए पहले के समय में, प्रत्येक जानवर फिर buprenorphine (0.1-2.5 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग) की एक खुराक प्राप्त होगा.
- नोट: समय की अवधि से अधिक हृदय समारोह और हृदय remodeling का आकलन शामिल अध्ययन के लिए (7 - 28 दिन और परे), buprenorphine (0.1-2.5 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग) की एक खुराक प्रशासित किया जाएगा, हर 6 घंटे 24-48 घंटे के बाद सर्जरी और carprofen मौखिक गोलियों के लिए सर्जरी के बाद प्रदान किया जाएगा एक बार दैनिक ("पोस्ट - ऑपरेटिव रिकवरी" देखें).
2. तैयारी और चूहे की इंटुबैषेण
- पहले संज्ञाहरण के अधिष्ठापन के लिए, पशुओं के लिए किसी भी पूर्व मौजूदा स्थितियों है कि शल्य चिकित्सा के परिणाम जटिल हो सकता है की पहचान के लिए जांच हो जाएगा, शारीरिक परीक्षा दृश्य निरीक्षण और दिल की दर, श्वसन दर, और शरीर का तापमान और शरीर के वजन की माप शामिल होंगे.
- अगर पशुओं को स्वस्थ होने के लिए निर्धारित कर रहे हैं, 250-300 ग्राम नर चूहों (जैसे Sprague Dawley) और तौला जाएगा पहचान विशेषताओं दर्ज किया जाएगा.
- चूहे तो 80 मिलीग्राम / pentobarbital किलो के साथ anesthetized हैं, संज्ञाहरण के सही स्तर अंग वापसी प्रतिक्रिया के माध्यम से चूहे नाखून बिस्तर (पैर की अंगुली - चुटकी पलटा) के दबाव को लागू करने और प्रक्रिया के दौरान समय - समय पर द्वारा सत्यापित है.
- Buprenorphine (0.1-2.5 मिग्रा / किग्रा, वर्ग) सर्जरी के समय में प्रशासित किया जाएगा.
- एक इलेक्ट्रिक शेवर तो फर फार्म गर्दन और छाती क्षेत्रों दाढ़ी के लिए प्रयोग किया जाता है. नोट: समय की अवधि से अधिक हृदय समारोह और हृदय remodeling का आकलन शामिल अध्ययन के लिए (7 - 28 दिन और परे), फर पूरी तरह से शल्य चिकित्सा क्षेत्र से होना चाहिए दूर मुंडा बाँझपन बनाए रखने.
- मुंडा क्षेत्रों betadine 70% शराब के साथ क्षेत्र पोंछते द्वारा पीछा समाधान के साथ झाड़ी और कीटाणुरहित हो रहे हैं, इस betadine और शराब रगडें और कीटाणुशोधन प्रक्रिया तीन बार दोहराया जा रहा है.
- anesthetized जानवर तो एक homeothermic कंबल प्रणाली (हीटिंग पैड) पर एक लापरवाह स्थिति में रखा है क्रम में शरीर का तापमान बनाए रखने के.
- Endotracheal इंटुबैषेण तो पहली सावधानी ट्रेकिआ उजागर किया जाता है, इंटुबैषेण के दृश्य को बढ़ाने के लिए, 5 मिमी चीरा मध्य गर्दन और मांसपेशियों के ऊतकों का त्याग करके ट्रेकिआ बस के ऊपर है.
- जहां ट्यूबिंग किनारे पर गला के माध्यम से प्रवेश द्वार के आराम के लिए beveled है, यह अंतःश्वासनलीय ट्यूब की प्रविष्टि (90 पीई पॉलीथीन 90 आकार) के लिए बेहतर दृश्य की अनुमति देता है.
- अंतःश्वासनलीय ट्यूब ट्रेकिआ में डाला जाता है एक शल्य चिकित्सा स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग करके सहायता प्राप्त दृश्य के साथ, ध्यान से जीभ से छेड़छाड़ जबकि ट्रेकिआ और अंतःश्वासनलीय ट्यूब के द्वार को देखने के द्वारा.
- यांत्रिक वेंटीलेशन तो केंट वैज्ञानिक (Topo दोहरी मोड) प्रति मिनट 80 साँस और प्रति 100 ग्राम शरीर के वजन 1.2 मिलीलीटर की एक ज्वार की मात्रा पर साइकिल चालन वेंटीलेटर अंतःश्वासनलीय ट्यूब को जोड़ने के द्वारा प्राप्त किया है.
- एक बाँझ टांगना तो चूहे पर रखा गया है, छोड़ने के केवल शल्य चिकित्सा क्षेत्र उजागर, इस तरह के ऑपरेशन के दौरान कम से कम संभावित संदूषण.
- पशु सर्जन और सहायकों के लिए मुखौटा, गाउन, और दस्ताने पहन रहे हैं, दस्ताने के साथ व्यक्तिगत चूहे सर्जरी के बीच बदला जा रहा है.
3. क्षणिक वाम पूर्वकाल अवरोही (लाड) धमनी Ligation
- एक बार स्थिर साँस लेने में स्थापित है, सीने में बाईं चौथे पसलियों के बीच अंतरिक्ष में खोला है, hemostats या दौर अंत कैंची का उपयोग करने के लिए अंतरिक्ष खोलने के द्वारा, लेकिन ऊतक इतना है कि खून बहने का खतरा कम किया जा सकता काटने के बिना.
- छाती retractor तो पसलियों के बीच चौथे स्थान के भीतर तैनात है, क्रम में पसलियों का प्रसार करने के लिए इतना है कि बाएं वेंट्रिकल (LV) अवगत कराया है, अधिक से अधिक देखभाल लेने के फेफड़ों को नुकसान नहीं है.
- पेरीकार्डियम खोला है, तो है, लेकिन यदि संभव हो तो जगह में छोड़ दिया.
- समीपस्थ बाएँ पूर्वकाल अवरोही धमनी (लाड) की पहचान की जाएगी (चित्रा 1) के रूप में के उपयोग के साथ,urgical स्टीरियो माइक्रोस्कोप, और लाड तो transiently (या एक slipknot के साथ बांधा जा सकता है है) ligated 30 मिनट इस्कीमिक अवधि (चित्रा 1) के लिए एक 6-0 prolene सीवन का उपयोग कर, लेकिन दिल के exteriorization के बिना.
- हृदय reperfusion की अनुमति, microsurgical कैंची (या slipknot रिहा द्वारा) संयुक्ताक्षर, 6-0 prolene सीवन, लाड के ligation के बाद 30 मिनट के द्वारा बनाई गई में गाँठ में कटौती करने के लिए उपयोग किया जाता है.
- नकली नियंत्रण चूहों में, प्रक्रिया समान है, सिवाय लाड transiently ligated नहीं है.
- बहिर्वाह तो संक्षेप में (1-2 सेकंड) श्वासयंत्र पर pinched बंद फेफड़ों के फिर से मुद्रास्फीति की अनुमति है.
- सीने retractor तो निकाल दिया जाता है और पसलियों के साथ तैयार कर रहे हैं एक बाधित सीवन पैटर्न के साथ एक 2-0 prolene सीवन का उपयोग.
- एक बार पसलियों बंद हो जाती हैं, वेंटीलेटर का बहिर्वाह फिर (1-2 सेकंड) संक्षेप में बंद pinched है उचित श्वास को सुनिश्चित करने.
- त्वचा एक सतत सीवन पैटर्न के साथ 6-0 prolene सीवन का उपयोग करने के लिए बंद कर दिया है.
4. लाड धमनी के सफल Ligation की पुष्टि
- लाड की समुचित ligation myocardial ऊतक के blanching सिवनी के लिए बाहर का पूर्वकाल दीवार की शिथिलता के रूप में अच्छी तरह से देख द्वारा की पुष्टि की जाएगी, के रूप में क्षणिक लाड ligation के दौरान मनाया.
- Reperfusion myocardial ऊतकों और लाल रंग के पूर्वकाल दीवार गति का कुछ वसूली के प्रदर्शन के लिए वापसी से सत्यापित हो जाएगा, के रूप में क्षणिक लाड ligation के बाद तुरंत मनाया.
- नोट: समय की अवधि से अधिक हृदय समारोह और हृदय remodeling का आकलन शामिल अध्ययन के लिए (7 - 28 दिन और परे करने के लिए), एक इकोकार्डियोग्राम 24 घंटे के बाद लाड ligation प्रदर्शन किया जाएगा, क्रम में प्रेरित की सीमा निर्धारित करने के लिए रोधगलन. एक छोड़ दिया ventricular भिन्नात्मक (एल.वी. एफएस) छोटा <20%, के रूप में एक इकोकार्डियोग्राम से निर्धारित के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पूर्वकाल दीवार गति रोधगलितांश के साथ संगत में शिथिलता के साथ सभी जानवरों, और पहचान हो जाएगा हृदय समारोह और remodeling अध्ययन अनुवर्ती के लिए इस्तेमाल किया. शाम नियंत्रण चूहों 40-45% के बीच एक सामान्य एल.वी. एफएस (डेल मोंटे एट अल) की उम्मीद कर रहे हैं.
5. पोस्ट - ऑपरेटिव रिकवरी
- एक बार शल्य चिकित्सा पूरा हो गया है, पशु से अधिक बाँझ टांगना हटा दिया जाएगा. शरीर के तापमान (एक गुदा थर्मामीटर द्वारा), श्वसन दर (दृश्य निरीक्षण के द्वारा), हृदय की दर (घबराहट के द्वारा), और दर्द की असामान्य लक्षण नजर रखी जा रहे हैं जब तक चल जानवर हो जाता है.
- चूहे वेंटीलेटर से हटा दिया जाएगा और फिर एक जानवर पिंजरे में रखा और संज्ञाहरण से उबरने की अनुमति दी. इस पिंजरे में पिंजरे के एक छोर एक हीटिंग पैड द्वारा गरम हो जाएगा चूहे गर्मी की तलाश करने की अनुमति. इसके अलावा, पानी के इस प्रेक्षण अवधि के दौरान चूहे के लिए उपलब्ध हो जाएगा.
- यदि निर्जलीकरण के लक्षण सर्जरी के बाद मनाया जाता है, बाँझ खारा की 0.5 मिलीलीटर intraperitoneally (आईपी) अंतःक्षिप्त किया जाएगा.
- Buprenorphine (0.1-2.5 मिग्रा / किग्रा, वर्ग) तो तुरंत सर्जरी के बाद और पोस्ट ऑपरेटिव वसूली के दौरान प्रशासित किया जाएगा.
- नोट: समय की अवधि से अधिक हृदय समारोह और हृदय remodeling का आकलन शामिल अध्ययन के लिए (7 - 28 दिन और परे), buprenorphine (0.1-2.5 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग) की एक खुराक प्रशासित किया जाएगा, हर 6 घंटे 24-48 घंटे के बाद सर्जरी के लिए सर्जरी के बाद. Carprofen मौखिक गोलियां (Rimadyl, Bioserv गोली) को भी 48 घंटे कम से कम के बाद सर्जरी के लिए प्रदान की जाएगी (1 गोली दैनिक).
6. Ischemia reperfusion के histological मूल्यांकन
- 4 घंटे reperfusion की अवधि के पूरा होने के बाद, चूहों anesthetized 80 मिलीग्राम / किलो pentobarbital की और लाड एक बार फिर ligated है (या slipknot retied किया जा सकता है) के साथ फिर से हो रहे हैं (हुआंग एट अल और कैसर एट अल).
- 5% इवान ब्लू के 1 मिलीलीटर (फॉस्फेट buffered खारा में) तो सही निलय चेंबर में अंतःक्षिप्त है और 2 मिनट के लिए perfuse की अनुमति दी.
- 2 मिनट के बाद, संतृप्त पोटेशियम क्लोराइड समाधान के 1 मिलीलीटर तो सही निलय चेंबर में इंजेक्ट किया है क्रम में पिटाई से दिल रोक.
- दिल excised तो तेजी से है, 2% agarose खारा फॉस्फेट buffered में एम्बेडेड, और फिर 1-2 मिमी स्लाइस में sectioned.
- व्यवहार्य मायोकार्डियम तो 20 मिनट और प्रत्येक टुकड़ा की छवियों के लिए 2% triphenyl tetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) के साथ दाग है पर कब्जा कर लिया. चित्र तो क्रम में myocardial क्षेत्र की राशि की पहचान मात्रा निर्धारित कर रहे हैं: (1) कि (नीले वर्गों) पर जोखिम नहीं, (2) क्षेत्र में जोखिम है (एएआर, लाल और सफेद वर्गों), और (3 ) क्षेत्र है कि infarcted है (सफेद "अस्थिर" वर्गों) (चित्रा 2).
7. प्रतिनिधि परिणाम
आकलन के रोधगलितांश आकार और क्षेत्र में जोखिम (एएआर), इवान नीले डाई और triphenyl tetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) द्वारा reperfusion के 4 घंटे के बाद, शामिल अध्ययन के लिए, लाड की उचित ligation पुष्टि की जा सकतीके रूप में क्षणिक लाड ligation के दौरान मनाया, myocardial ऊतक के blanching सिवनी के लिए बाहर का पूर्वकाल दीवार की शिथिलता के रूप में अच्छी तरह से देख. Reperfusion myocardial ऊतकों और लाल रंग के पूर्वकाल दीवार गति का कुछ वसूली के प्रदर्शन पर लौटने के द्वारा सत्यापित किया जा सकता है है, क्षणिक लाड ligation के बाद तुरंत मनाया. (- 28 - 7 दिन और परे) समय की अवधि से अधिक हृदय समारोह और हृदय remodeling के आकलन से जुड़े अध्ययन के लिए, reperfusion द्वारा ischemia के बाद उचित ligation भी पूर्वकाल दीवार के ऊतकों में शिथिलता के blanching द्वारा पुष्टि किया जा सकता है और दीवार गति का कुछ वसूली के साथ लाल रंग की वापसी reperfusion निम्नलिखित. इसके अलावा, हृदय समारोह बिगड़ा जा रहा है 24 घंटे के बाद लाड ligation प्रदर्शन इकोकार्डियोग्राम द्वारा निर्धारित किया जा सकता है, क्रम में करने के लिए प्रेरित रोधगलन की सीमा निर्धारित है. एक छोड़ दिया ventricular भिन्नात्मक (एल.वी. एफएस) छोटा <20%, के रूप में एक इकोकार्डियोग्राम से निर्धारित के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पूर्वकाल दीवार गति रोधगलितांश के साथ संगत में शिथिलता के साथ सभी जानवरों, और पहचान हो जाएगा हृदय समारोह और remodeling अध्ययन अनुवर्ती के लिए इस्तेमाल किया. शाम नियंत्रण चूहों 40-45% के बीच एक सामान्य एल.वी. एफएस (डेल मोंटे) की उम्मीद कर रहे हैं.
चित्रा 1 एक myocardial infarction और लाड Ligation के योजनाबद्ध आरेख. (1) myocardial infarction और (2) बाएं निलय (लाड) सीवन, प्लेग गठन की वजह से दौरे रोधगलन नकल करने के लिए प्रयोग किया जाता का उपयोग धमनी अवरोही पूर्वकाल के ligation के योजनाबद्ध आरेख.
चित्रा 2 एक चूहा एमी के बाद हार्ट के प्रतिनिधि छवि. चूहे नीले (गैर occluded कोरोनरी छिड़काव क्षेत्र) क्षेत्र में दिखा रहा है दिल के प्रतिनिधि छवि, लाल (occluded कोरोनरी छिड़काव रोधगलन के लिए क्षेत्र पर जोखिम (आर) का संकेत क्षेत्र में क्षेत्र, और सफेद / पीले (infarcted क्षेत्र में क्षेत्र एएआर के भीतर).
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Discussion
चूहों में एक तीव्र myocardial (AMI) रोधगलन, भी ischemia-reperfusion (आईआर) के रूप में कहा जाता है, आमतौर पर मानव वेंट्रिकुलर remodeling के दिल की विफलता के लिए अग्रणी नकल के लिए प्रयोग किया जाता है. एल.वी. और पशु मॉडल (चूहों और चूहों) में दिल की विफलता में शिथिलता की प्रगति कि मनुष्य जो एक एमआई बनाए रखने, जीवित है और फिर बाद में दिल की विफलता (गोल्डमैन) विकसित में मनाया समान है. यह प्रक्रिया इस तकनीक का एक संस्करण और भी निहित अतिरिक्त methodological विविधताओं का वर्णन नोट में बताया. तीव्र myocardial infarction प्रक्रिया (AMI) के लिए अतिरिक्त ऐसे परिवर्तनों ischemia और reperfusion की अवधि की अवधि शामिल है. इसके अलावा, वहाँ शल्य चिकित्सा के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए और लाड ligate इस्तेमाल किया प्रक्रिया के बारे में बदलाव कर रहे हैं. Ischemic अवधि की अवधि के संबंध में, लाड ligation के समय उत्पन्न करने के लिए एक myocardial infarction तीव्रता से प्रतिबंधित किया जा सकता है (30 मिनट 60 मिनट के लिए, एमी), या वैकल्पिक रूप से, लंबे समय से प्रतिबंधित (स्थायी, एमआई). इस प्रारंभिक दौरे मूल्यांकन (यानी बाद reperfusion की अवधि) के लिए पहले इस्कीमिक अवधि के बाद reperfusion की अवधि के संबंध में, कम हो (4 घंटे 24 घंटे तक) क्रम में रोधगलितांश आकार और क्षेत्र (जोखिम एएआर का मूल्यांकन कर सकते हैं ) द्वारा इवान नीले डाई और triphenyl tetrazolium क्लोराइड (टीटीसी), या वैकल्पिक रूप से (7 दिन 28 दिन और परे करने के लिए) लंबे समय तक के क्रम में हृदय समारोह और remodeling का मूल्यांकन. यह रोग हृदय remodeling (apoptosis, परिगलन और एल.वी. शिथिलता) ischemia और reperfusion के चुने हुए अवधि पर निर्भर करता है अलग अलग होंगे. , उरोस्थि के माध्यम से एक चीरा: न्यूनतम दिल उजागर क्रम में चौथे पसलियों के बीच अंतरिक्ष के भीतर और दिल की exteriorization बिना लाड ligate (क्षणिक वाम पूर्वकाल अवरोही (लाड) धमनी Ligation भाग 3 देखें) की शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के लिए एक विकल्प के रूप में एक बड़ा उपयोग और दिल का दृश्य बनाते हैं, किया जा सकता है. संक्षेप में, एक चीरा उदर छाती मध्य छाती त्वचा जिसके बाद छाती मध्य उरोस्थि के लिए खोला जाता है के माध्यम से किया जाता है. यह आंशिक thoracotomy retractor के साथ sternal किनारों retracting द्वारा पीछा किया जाता है. प्रॉक्सिमल लाड धमनी तो एक शल्य माइक्रोस्कोप का उपयोग के साथ की पहचान की है, और या तो transiently (या एक slipknot के साथ बांधा जा सकता है है) ligated 30 मिनट इस्कीमिक अवधि (AMI) के लिए एक 6-0-prolene सीवन का उपयोग कर या स्थायी रूप से ligated एक 6-0-prolene सीवन (एमआई) का उपयोग. एमी प्रक्रियाओं के लिए, microsurgical कैंची 30 मिनट लाड ligation के बाद संयुक्ताक्षर में गाँठ में कटौती करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. बहिर्वाह तो संक्षेप में (1-2 सेकंड) श्वासयंत्र पर pinched बंद फेफड़ों के फिर से मुद्रास्फीति की अनुमति है. retractor निकाल दिया है और पसलियों के साथ तैयार कर रहे हैं और एक बाधित सीवन पैटर्न के साथ 2-0 prolene का उपयोग करने के लिए sutured. एक बार सीने में बंद कर दिया है, संक्षेप में pinched बहिर्वाह फिर से उचित श्वास सुनिश्चित करने और त्वचा एक सतत सीवन पैटर्न के साथ 6-0 prolene sutures का उपयोग करने के लिए बंद कर दिया है. कुल मिलाकर, तीव्र myocardial infarction (AMI) इस प्रोटोकॉल में वर्णित पशु मॉडल मानव ischemic हृदय रोग mimics और आणविक संकेतन हृदय remodeling और दिल की विफलता में शामिल तंत्र को स्पष्ट करने में मदद के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
BKM एक राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) / राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और रक्त संस्थान (NHLBI) अनुदान (R01-HL085487) द्वारा समर्थित है. महाराष्ट्र अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (अहा) राष्ट्रीय वैज्ञानिक विकास (SDG) अनुदान और वृद्धावस्था कार्डियोलोजी के सोसायटी द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ventilator | Kent Scientific | TOPO | TOPO Dual Mode |
| Thermostatic Circulator E103 | Harvard Apparatus | 732802 | |
| Homeothermic Blanket System | Harvard Apparatus | 55-7222F | |
| Stereo Microscope | Nikon Instruments | MMA36300 | SMZ-645 Zoom Stereo Microscope |
| Hot Bead Sterilizer | Harvard Apparatus | 610183 | |
| Electric Shaver | GE Healthcare | ||
| Blades and Handles | Welch Allyn | 690047-1 | Standard (Lamp) Laryngoscope Blades |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14014-17 | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14072-10 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11028-15 | |
| Curved Forceps | Fine Science Tools | 11001-12 | |
| Needle Holder | Fine Science Tools | 12004-18 | |
| Needle Holder | Fine Science Tools | 91201-13 | |
| Chest Retractor | Fine Science Tools | 17008-07 | |
| Masks | VWR international | 47730-640 | |
| Gauze Sponges | Dermacea | 441205 | |
| Sterile Gloves | Cardinal Health | 2D7203I | |
| PE 90 tubing | BD Biosciences | 427420 | |
| 20 ml Syringe | BD Biosciences | 301625 | |
| 6-0 Prolene Suture | Ethicon Inc. | 8706H | |
| 2-0 Silk Suture | Ethicon Inc. | K873H | |
| Pentobarbital Sodium Injection | OVATION Pharmaceuticals | NDC 67386-501-55 | |
| Povidone-Iodine | NOVAPLUS | V10-8204 | |
| Buprenorphine | Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-1 |
References
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