RNAi interferencia por inyección de dsRNA en Drosophila Los embriones
Summary
ARN de interferencia se ha demostrado muy eficaz para analizar la función del gen en<em> Drosophila</em> El desarrollo traqueal. Un protocolo detallado utilizado por Jiang laboratorio para inyectar dsRNA en embriones de la mosca de la expresión génica caída se ilustra. Esta técnica tiene el potencial de genes de detección necesarios para el desarrollo de órganos y tejidos en<em> Drosophila</em>.
Abstract
Una prueba genética es uno de los métodos más eficaces para obtener conocimientos en un proceso biológico complejo. Con los años muchas mejoras y herramientas para la manipulación genética se han convertido en disponibles en Drosophila 2. Poco después del descubrimiento inicial de Frie y Mello 3 ARN de doble cadena que puede ser utilizado para derribar la actividad de genes individuales en Caenorhabditis elegans, el ARN de interferencia (ARNi) ha demostrado proporcionar una poderosa aproximación genética inversa para analizar las funciones de genes en el desarrollo de Drosophila órgano 4, 5.
Muchos órganos, incluidos los de pulmón, riñón, hígado y sistema vascular, se componen de redes ramificadas tubular que transportan líquidos o gases vitales 6, 7. El análisis de la formación de Drosophila traqueal proporciona un excelente sistema modelo para estudiar la morfogénesis de otros órganos tubulares 8. El Berkeley Drosophila Genome Project ha revelado cientos de genes que se expresan en el sistema traqueal. Para estudiar el mecanismo molecular y celular de la formación del tubo, el reto es entender el papel de estos genes en el desarrollo de la tráquea. En este sentido, se describe un método detallado de dsRNA inyección en embriones de Drosophila para la expresión de genes individuales caída. Con éxito derribado dysfusion endógena (días) la expresión génica por inyección de dsRNA. Disfunción es una proteína bHLH-PAS expresa en las células de fusión traqueal, y se requiere para la rama traqueal fusión 9, 10. disfunción RNAi elimina completamente la expresión disfunción y dio lugar a defectos de fusión traqueal. Este método relativamente simple proporciona una herramienta para identificar los genes requried para tissure y desarrollo de los órganos de la Drosophila.
Protocol
Discussion
La inyección de dsRNA presente método permite aquí un análisis muy sensible y rápida de la función de genes en el desarrollo de Drosophila traqueal. Este método potencialmente puede ser aplicado para analizar la función de genes de otros tejidos y el desarrollo de órganos.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a la tripulación de Stephen dysfusion cDNA de anticuerpos, Dis y moscas w 1118.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
References
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
- Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell. 95, 1017-1026 (1998).
- Misquitta, L., Paterson, B. M. Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).
- Horowitz, A., Simons, M. Branching morphogenesis. Circ. Res. 103, 784-795 (2008).
- Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis. Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).
- Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).
- Jiang, L., Crews, S. T. Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion. Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).
- Jiang, L., Crews, S. T. The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein. Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).
