Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Purificação de DNA plasmidial colônias bacterianas Usando o Kit Qiagen Miniprep

doi: 10.3791/247 Published: July 29, 2007

Summary

Abstract

Purificação de DNA plasmidial de E. coli é uma técnica de núcleo para clonagem molecular. Purificação de pequena escala (miniprep) de menos de 5 ml de cultura bacteriana é uma maneira rápida para verificação clone ou o isolamento do DNA, seguida por outras reações enzimáticas (reação em cadeia da polimerase e digestão enzima de restrição). Aqui, vídeo-gravados os procedimentos gerais de miniprep através QIAprep a QIAGEN Kit Miniprep 8, com o objetivo de introduzir esta técnica altamente eficiente para os novatos em geral para técnicas de biologia molecular. Todo o procedimento é baseado em lise alcalina de células de E. coli seguido por adsorção de DNA em sílica na presença de sal. Ele consiste de três etapas: 1) preparação e limpeza de um lisado bacteriano, 2) adsorção de DNA para a membrana QIAprep, 3) lavagem e eluição do DNA plasmidial. Todas as etapas são realizadas sem o uso de fenol, clorofórmio, CsCl, brometo de etídio, e sem precipitação álcool. Ele normalmente leva menos de 2 horas para terminar todo o procedimento.

Purificação de DNA plasmidial colônias bacterianas Usando o Kit Qiagen Miniprep
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).More

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter