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Biology

Purificación del ADN plásmido de las colonias de bacterias Utilizando el kit de Qiagen Miniprep

doi: 10.3791/247 Published: July 29, 2007

Summary

Abstract

Purificación de ADN plasmídico de E. coli es una técnica básica para la clonación molecular. Depuración a pequeña escala (minipreparación) de menos de 5 ml de cultivo bacteriano es una forma rápida para la verificación de clonar o el aislamiento de ADN, seguida de otras reacciones enzimáticas (reacción en cadena de la polimerasa y digestión por enzimas de restricción). En este sentido, grabados en video los procedimientos generales de minipreparación a través de la QIAprep QIAGEN 8 Kit Miniprep, con el objetivo de la introducción de esta técnica de gran eficacia para los principiantes en general de las técnicas de biología molecular. Todo el procedimiento se basa en la lisis alcalina de células de E. coli seguido por la adsorción del ADN a la sílice en presencia de sal. Se compone de tres pasos: 1) la preparación y la limpieza de un lisado bacteriano, 2) la adsorción de ADN sobre la membrana QIAprep, 3) el lavado y la elución del ADN del plásmido. Todos los pasos se llevan a cabo sin el uso de fenol cloroformo, CsCl, bromuro de etidio, y sin precipitación en alcohol. Por lo general, toma menos de 2 horas para terminar todo el procedimiento.

Purificación del ADN plásmido de las colonias de bacterias Utilizando el kit de Qiagen Miniprep
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Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).More

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

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