प्लास्मिड डीएनए के ई. कोलाई में परिवर्तन हीट शॉक विधि का प्रयोग

Abstract

ई. कोलाई में प्लास्मिड डीएनए गर्मी झटका विधि का उपयोग परिवर्तन आणविक जीव विज्ञान की एक बुनियादी तकनीक है. यह बैक्टीरिया में एक विदेशी प्लाज्मिड ligation या उत्पाद डालने के होते हैं. यह वीडियो प्रोटोकॉल Genlantis से व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रासायनिक सक्षम बैक्टीरिया का उपयोग परिवर्तन की पारंपरिक विधि का वर्णन करता है. बर्फ में एक कम ऊष्मायन के बाद, रासायनिक सक्षम बैक्टीरिया और डीएनए के मिश्रण 42 ° सी में 45 सेकंड के लिए रखा जाता है (गर्मी झटका) और फिर बर्फ में वापस रखा. समाज मीडिया और जोड़ी जाती है और 37 में बदल कोशिकाओं डिग्री सेल्सियस 30 मिनट के लिए आंदोलन के साथ incubated हैं. परिवर्तन दक्षता के बिना कालोनियों अलग की आश्वासन दिया जा सकता है, बदल बैक्टीरिया के दो मात्रा में चढ़ाया जाता है. इस पारंपरिक प्रोटोकॉल सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया जा सकता है सबसे व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सक्षम बैक्टीरिया को बदलने. Genlantis से turbocells भी एक उपन्यास परिवर्तन 3 मिनट प्रोटोकॉल, अनुदेश मैनुअल में वर्णित है में इस्तेमाल किया जा सकता है.