Summary
Dit artikel beschrijft de selectie van geschikte probes voor single-cell FISH, het verspreiden van technieken voor blastomeer kernen, en in situ hybridisatie en signaal scoren, toegepast op de pre-implantatie genetische diagnose (PGD) in een klinische setting.
Abstract
Pre-implantatie genetische diagnostiek (PGD) is een gevestigde alternatief voor prenatale diagnose, en het gaat om het selecteren van pre-implantatie embryo's van een cohort gegenereerd door geassisteerde reproductie technologie (ART). Deze selectie kan nodig zijn omdat de familiale monogene ziekte (bijvoorbeeld cystic fibrosis), of omdat een partner draagt een chromosoom herschikking (bijvoorbeeld een twee-weg wederzijdse translocatie). PGD is beschikbaar voor koppels die hebben gehad vorige getroffen kinderen, en / of in het geval van chromosoom herschikkingen, terugkerende miskramen of onvruchtbaarheid. Eicellen geaspireerd na ovariële stimulatie worden bevrucht door in vitro onderdompeling in sperma (IVF) of intracytoplasmatische injectie van door een individuele zaadcel (ICSI). Pre-implantatie decollete-stadium embryo's worden gebiopteerd, meestal door het verwijderen van een enkele cel op dag 3 na de bevruchting, en de biopsie cel is getest op de genetische status van het embryo vast te stellen. Fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) op het vaste kernen van biopsie cellen met target-specifieke DNA-probes is de techniek bij uitstek om chromosoom onbalans geassocieerd met chromosoom herschikkingen te sporen, en aan vrouwelijke embryo's in gezinnen te selecteren met de X-gebonden aandoening waarvoor geen mutatie-specifieke test. FISH is ook gebruikt om te screenen van embryo's voor spontane chromosoom aneuploïdie (ook bekend als PGS of PGD-AS) om te proberen en het verbeteren van de efficiëntie van de geassisteerde voortplanting, maar de voorspellende waarde van deze test met de verspreiding en FISH techniek hier beschreven waarschijnlijk onaanvaardbaar laag zijn in de meeste mensen de handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik. We beschrijven de selectie van geschikte probes voor single-cell FISH, het verspreiden van technieken voor blastomeer kernen, en in situ hybridisatie en signaal scoren, toegepast op PGD in een klinische setting.
Protocol
1. Lyseren en verspreiden van een kern van een biopsie blastomeer
- Cellysis buffer voor de verspreiding van cellen (0,2% Tween20 in 0,01 M HCl, pH 2,0) moeten worden voorbereid 24 uur van tevoren en opgeslagen bij -20 ° C. Bereiding van 100 ml en filter 20 ml in een 30 ml steriele universele container met behulp van een steriele 20 ml spuit en spuit filter. Verdeel 1 ml monsters in 10 tot 15 1,7 ml steriele microcentrifuge buizen, sluiten en het etiket de buizen voor het invriezen. Het wordt aanbevolen om twee verschillende partijen is het gebruik, de nieuwe partij en de vorige partij, die is getest en kan worden gebruikt als de nieuwe partij is onbevredigend zijn.
- Ontdooi de lysis buffer op kamertemperatuur 30 minuten voor de biopsie procedure. Voor praktische doeleinden de werktemperatuur zal worden tussen kamertemperatuur en de hand temperatuur.
- Scoren een kleine cirkel (ca. 5 mm diameter) aan de onderzijde van een amine-gecoate slide (bijv. Genetix) met behulp van een diamant pen en pre-label van de dia met het zaaknummer, unieke dianummer, en biopsie datum. Gebruik een aparte glijbaan voor elke blastomeer in numerieke volgorde, en label met de embryo-nummer. Dia's moeten worden geëtiketteerd met een hard potlood, zoals 4H, en "uitgedelgd" met een latex handschoen aan een grafiet stof te verwijderen.
- Plaats een klein volume van lysis buffer binnen de cirkel.
- Breng de biopsie blastomeer in de lysis buffer. Indien nodig lysis buffer toe te voegen in de cirkel totdat de cel begint te lyseren om, moet in de cel volledig lyseren en het cytoplasma verspreiden voordat de buffer droogt.
- Let op de kern te zorgen dat het blijft binnen de cirkel en is niet verloren, als de cel niet beschikt over een kern of meerdere kernen, biopsie een andere cel.
- Laat de schuif aan de lucht drogen bij kamertemperatuur.
2. In Situ Hybridisatie van een Single blastomeer Nucleus
- Bereid een ethanol-serie (70, 90 en 100%) uit in steriel gedistilleerd water.
- Schakel en zet de hete blok (bv. Hybaid Omnislide of Vysis Hybrite) tot 75 ° C.
- Ontdooi probes, vortex, en centrifuge. De reagentia moeten worden gezien en gecontroleerd om juist te zijn voordat de sonde mengsel. Pipette volumes zoals gespecificeerd door de fabrikant om de sonde mengsel in een 0,65 ml steriel microcentrifugebuis en vortex en centrifugeer voor gebruik. Het totale volume van de sonde mengsel moet voldoende zijn om 2 pl per kern worden getest en afgerond op de dichtstbijzijnde 10 pi tot een veiligheidsmarge mogelijk te maken.
- Voorwas de dia's in Coplin potten met behulp van fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,0: 0,14 M NaCl, 3 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4) gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
- Twee keer Spoel de dia's in steriel gedistilleerd water.
- Uitdrogen van de dia's met de ethanol-serie (70, 90, en 100%) voor 2 min elk op kamertemperatuur en lucht drogen. Zorg ervoor dat dia's worden volledig ondergedompeld en eventuele grafiet stof drijft naar de oppervlakte, opzuigen met een schone tissue.
- Noteer de positie van de kern binnen de cirkel door te visualiseren met een fase contrast microscoop.
- Uitdrogen met 100% ethanol gedurende 2 minuten op kamertemperatuur en lucht drogen.
- Breng 2 pi van de probe mengsel en dek af met een 9 x 9 mm dekglaasje (een kwart van een 18 x 18 mm dekglaasje no.1).
- Sluit de randen van het dekglaasje met rubber cement (bijv. Cow Gum, Koe Proofing).
- Codenature de dia's op een hete blok bij 75 ° C gedurende 5 min, en vervolgens hybridiseren de dia's 's nachts (16-20 uur) in een vochtige kamer bij 37 ° C. Sonde mixen die volledig bestaan uit centromeer sondes (dwz voor sex-linked gevallen) geven een bevredigend resultaat na 60 minuten van hybridisatie.
- Bereid een waterbad met voldoende Coplin potten en warmte tot 71 ° C.
- Bereid een 0.4x standaard zoutoplossing citraat (SSC) stringente wassen oplossing (pH 7,0 bij 71 ° C, 0,06 M NaCl, 6 mM C 6 H 5 O 7 Na 3 .2 H 2 O) en warmte in het waterbad.
- Doseer 50 ml stringente wassen per Coplin pot nodig is en controleer of de temperatuur is 71 ° C onmiddellijk voorafgaand aan het gebruik met een schone thermometer.
- Verwijder voorzichtig het rubber cement van elke dia-en afspoelen van de dekglaasje met 4x SSC/0.05% Tween20 (pH 7,0) bij kamertemperatuur.
- Was de dia's in de 0.4x SSC stringente wassen op 71 ° C gedurende 5 minuten. Was niet meer dan 6 dia's per Coplin pot.
- Was de dia's in 4x SSC/0.05% Tween20 bij kamertemperatuur gedurende 2 minuten.
- Als de probe mix bevat indirect gelabelde probe (s), afvoer van de dia's van overtollige vloeistof en toe te passen 20 pi van fluorescent geconjugeerd antilichaam onder een 20 x 20 mm vierkant van Parafilm.
- Incubeer in een vochtige kamer bij 37 ° C gedurende 15 minuten.
- Verwijder de Parafilm en was een keer in 4x SSC/0.05% Tween20 bij kamertemperatuur gedurende 2 minuten.
- Was twee keer gedurende 2 minuten in PBS eent kamertemperatuur en afvoer van de dia's.
- Van toepassing zijn 6 pl van DAPI / Vectashield (160 ng van 4 ',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride in 1 ml Vectashield montage medium, Vector Laboratories) om een 22 x 22 mm geen. 0 dekglaasje en keer de glijbaan op het dekglaasje.
- Blot en afdichting van de randen van het dekglaasje met duidelijke nagellak.
3. Analyse met behulp van een fluorescentiemicroscoop Geschikt uitgerust met geschikte filters voor de gebruikte Probes.
- Score signalen door directe visualisatie met behulp van een fluorescentie microscoop en een band-pass filters voor elke fluorochroom in de test. Elke kern moet worden gescoord door twee analisten. Een algemene richtlijn moet leiden tot scoren van een enkel signaal waar twee dicht bij elkaar gelegen signalen zijn minder dan een domein (signaal-breedte) uit elkaar, maar, oordeel gebaseerd op de ervaring moet worden uitgeoefend om signalen van variërende grootte, intensiteit, en scheiding interpreteren.
- Gebruik imaging software (bijv. Isis, MetaSystems, Altlussheim, Duitsland; CytoVision, Genetix) om een beeld van de kern voor de bevestiging van de visuele diagnose vast te leggen, en voor het imago van archivering als onderdeel van een laboratorium kwaliteitsborging plan.
4. Representatieve resultaten:
Metafase en interfase kernen van gekweekte lymfocyten van perifeer bloed moet worden onderzocht om te bevestigen dat de geselecteerde probes specifiek zijn voor de translocatie chromosomen, informatief voor de breekpunten (de subtelomere sondes alleen hybridiseren met de translocatie segmenten en het centromeer probe (s) om de centraal segment (s)) en de signalen in interfase kernen moeten helder en discreet. Scoren is het aantal signalen voor elke probe in 100 interfase kernen van elke partner wordt aanbevolen om de efficiëntie van de test te beoordelen. In dit geval 2 signalen werden gescoord in 95% -99% van de kernen voor elke probe. Figuur 1 toont een metafase en interfase kern van een voorbereiding voor een wederzijdse translocatie tussen de korte armen van chromosomen 5 en 9.
Signalen in de interfase kernen van embryo blastomeren moeten helder en discreet en scoorde met behulp van aparte band pass filters voor de gebruikte kleuren. Figuur 2 toont een blastomeer kern met een normaal signaal patroon (2 exemplaren voor alle geteste loci) in overeenstemming is met een normale of gebalanceerde chromosoom aanvulling op chromosoom 5 en 9, en een kern met een afwijkend signaal patroon in overeenstemming met een onevenwichtige product van de translocatie dat is monosomie (een exemplaar) voor de translocatie segment van chromosoom 5 en trisomie (3 exemplaren) voor de translocatie segment van chromosoom 9.
Figuur 1 Een metafase te spreiden en een interfase kern bereid uit gekweekte perifere bloed lymfocyten uit een drager van een reciproke translocatie tussen de korte armen van chromosomen 5 en 9 met breakpoints op 5p14.3 en 9p24.1:. 46, XY, t (5 ; 9) (p14.3;. p24.1) ish t (5, 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). FISH probes werden geselecteerd voor zowel de translocatie segmenten (5p14.3 → 5pter, rode Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, groene Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) en het centraal deel van chromosoom 9 (9p24.1 → 9qter, blauwe Abbott CEP 9 alpha satelliet SpectrumAqua).
Figuur 2. Signalen in interfase blastomeer kernen van dag 3 embryo's vastgelegd met een andere filter voor elke fluorochroom en samengevoegd tot een samengesteld beeld te vormen. (A) Twee signalen voor elke probe geeft twee kopieën van elk locus, die in overeenstemming is met een normale of uitgebalanceerde aanvulling op de translocatie chromosomen. (B) Een rood sein, drie groene signalen en twee blauwe signalen van een exemplaar van de translocatie segment van chromosoom 5, drie exemplaren van de translocatie segment van chromosoom 9 en twee exemplaren van de centrische segment van chromosoom 9, die consistent is met de aangrenzende -1 segregatie van de translocatie wat resulteert in een onevenwichtige product met monosomie voor 5p14.3 → 5pter en trisomie voor 9p24.1 → 9pter.
Discussion
De toepassing van fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) tot een enkele embryo cel (blastomeer) presenteert speciale uitdagingen, zowel in praktische en in de vertolking van het signaal patroon. De gebiopteerd cel dienen te worden gemaakt binnen een vooraf bepaald gebied op de dia om zijn lokalisatie volgende vissen te vergemakkelijken; uiterste zorg moet worden genomen om ervoor te zorgen dat de cel is gelyseerd, dat het cytoplasma is verspreid, en dat de kern is zichtbaar en intact, en, als de diagnose is afhankelijk van de resultaten van deze enkele cel, strenge scoring en interpretatie richtlijnen moeten worden toegepast. Echter, in ervaren handen, FISH is een robuuste techniek voor pre-implantatie genetische diagnose (PGD) in de klinische praktijk. Het principe van PGD door FISH is die zich richten op specifieke DNA-probes gelabeld met verschillende fluorochromen of haptenen kan worden gebruikt om het aantal kopieën van specifieke loci detecteren, en daarmee op te sporen chromosoom onbalans in verband met de meiose scheiding van chromosoom herschikkingen (1), inclusief Robertsoniaanse translocaties, wederzijdse translocaties, inversies, en complexe herschikkingen (2). FISH kan ook worden gebruikt om de vrouwelijke embryo's in gezinnen te selecteren met de X-gebonden aandoening, waarvoor er geen mutatie-specifieke test (3, 4). Meer controversieel is FISH ook gebruikt om te screenen op sporadische chromosoom aneuploidie om te proberen en het verbeteren van de efficiëntie van geassisteerde reproductie (5, 6), maar de voorspellende waarde van deze test gebruik van FSIH waarschijnlijk onaanvaardbaar laag in de meeste mensen handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik (7). Dit artikel concentreert zich op de technische aspecten en de beperkingen van de FISH toegepast op klinische eencellige diagnose.
Methoden van verspreiding en de vaststelling single blastomeren omvatten methanol / azijnzuur (5, 8), Tween / HCl (9), en een combinatie van Tween / HCl en methanol / azijnzuur (10). Variaties zijn hypotone behandeling van cellen voorafgaand aan de verspreiding en / of pepsine en paraformaldehyde behandeling na fixatie. De methode moet op passende wijze worden gevalideerd voor het laboratorium (14). De Tween / HCl methode wordt in detail beschreven in dit artikel. De Tween / HCl methode is technisch eenvoudig en zeer reproduceerbaar in verschillende laboratoria. Deze methode kan gebruikt worden om enkele kernen voor te bereiden op de FISH diagnose van geslachtsbepaling en chromosoom herschikkingen met aanvaardbare diagnostische nauwkeurigheid (7).
Probe mixen kunt combineren direct gelabeld en indirect gelabelde probes, en probes van verschillende fabrikanten. Probes voor bekende polymorfe chromosoom regio's (11, 12), of die waarvan bekend is dat cross-hybridiseren met andere chromosomen (13) moet worden vermeden, maar kan worden gebruikt als aangetoond dat specifieke en geschikt te zijn voor PGD vooraf testen op zowel de reproductieve partners . Beschikbaar fluorochromen / haptenen en strategieën voor de veeleisende probes omvatten het volgende: Texas Red (TR), fluoresceïne isothiocyanaat (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, gebiotinyleerd sondes gedetecteerd met TR-avidine, FITC-avidine, of Cy-5 streptavidine (gevisualiseerd met behulp van een FarRed filter), een mix van rood en groen sondes naar een geel signaal, een tweede ronde van hybridisatie en een derde kleur gemaakt door opeenvolgende vastleggen van SpectrumOrange met behulp van een TexasRed en een SpectrumGold filter) te produceren.
Een sonde set met drie probes, specifiek voor de centromeer regio's van de X-en Y-chromosomen en een autosoom, wordt aanbevolen voor geslachtsbepaling (14); de autosomaal sonde wordt gebruikt voor het ploïdie en daarmee vast te stellen onderscheid te maken tussen trisomie X (2n, 47 , XXX) en triploïdie (3n, 69, XXX), en tussen tetrasomy X (48, XXXX) en tetraploidy (4n, 92, XXXX). Een typische probe set toegepast bij deze instelling is de Abbott AneuVysion mix die alfa-satelliet X, Y, en 18, dit probe set is aangetoond een zeer laag tarief polymorfisme hebben, en dus voorbehandeling work-up van de reproductieve partners is niet vereist (14).
De probe mix voor een specifieke omlegging moet: het ideale geval bevatten probes ten minste voldoende zijn om alle verwachte producten van de omlegging met chromosoom onbalans op te sporen. Indien dit niet mogelijk is, sonde mixen waar het onopgemerkt onevenwichtige producten zijn beoordeeld aan niet-levensvatbaar zijn in een herkenbare zwangerschap en hebben waarschijnlijk een zeer lage prevalentie aanvaardbaar kan zijn (14). Worden getest op gekweekte lymfocyten metafasen van beide reproductieve partners. Minstens tien metafase verspreidt moet worden onderzocht voor de sonde specificiteit, polymorfismen en cross-hybridisatie, en, voor de omlegging chromosoom drager, om ervoor te zorgen dat de sondes zoals verwacht op de verschillende segmenten van de herschikking hybridiseren. Daarnaast moet ten minste 100 interfase kernen van deze voorbereidingen worden gescoord om aan te geven specificiteit, de helderheid en discretie (14) te beoordelen.
Commercial PGS probe sets zijn beschikbaar (bijv. Abbott MultiVysion PB of PGT), gericht op de chromosomen meest voorkomende te zijn aneuploïde in producten van de bevruchting, bestaande uit een sonde per chromosoom gericht. Typisch de kern kan een tweede hybridisatie met probes voor extra chromosomen die een test voor chromosomen 13, 15, 16, 18, 21, 22 en XY (14). De voorspellende waarde van deze test met de verspreiding en FISH techniek hier beschreven is het waarschijnlijk onaanvaardbaar laag zijn in de meeste mensen de handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik (7, 15).
Technieken zoals vergelijkende genomische hybridisatie (CGH) toegepast op enkele cellen zijn in staat om te testen voor het aantal kopieën van elk chromosoom (Wilton et al.. 2001), en het gebruik van single nucleotide polymorfismen (SNP) arrays en kwantitatieve analyse (Wells et al. . 2008) of "karyomapping" genotypering (Handyside et al.. 2009) zijn veelbelovende alternatieve technieken op chromosoom aneuploidie te detecteren. Echter, de resolutie te beperken en nauwkeurigheid voor het segment onbalans blijft onzeker en het is waarschijnlijk dat FISH zal blijven om de techniek van de keuze voor chromosoom herschikkingen met kleine segmenten.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hydrochloric Acid, 2.5L | VWR international | 101254H | |
| Sodium Chloride, 5Kg | VWR international | 443827W | |
| Potassium Chloride, 250g | VWR international | 26764.232 | |
| di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g | VWR international | 102494C | |
| Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g | VWR international | 10203 4B | |
| Sodium Hydroxide Pellets, 500g | VWR international | 28245.265 | |
| Tween20, 500mL | VWR international | 663684B | |
| Ethanol, 2.5L | VWR international | 8.18760.2500 | Duty Paid |
| Tri-Sodium Citrate, 5Kg | VWR international | 27833.363 | |
| Cow Gum, 250mL | Cow Proofings Ltd. | No longer available | Old stocks can still be found in art shops |
| DAPI/Antifade ES, 0.125μg/mL, 500ul | Cytocell Ltd. | DES500L | 150μl vial rec’d with each Cytocell TEL Probe |
| Nail Varnish, 12mL | Boots | 10088316001 | |
| Amine-coated Slides, 25 | Genetix | K2615 | |
| DAPI, 0.1mL | Sigma-Aldrich | D-9542 | |
| Vectashield, 10mL | Vector Laboratories | H1000 | |
| Texas-Red-avidin, 0.001mL | Vector Laboratories | A-2016 | |
| FITC-avidin, 0.001mL | Vector Laboratories | A-2011 | |
| Cy-5 Streptavidin, 0.001mL | GE Healthcare | PA45001 | |
| Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500 | Thistle Scientific | AX-MCT-175-C | |
| Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000 | Thistle Scientific | AX-MCT-060-C-CS | |
| 30ml Universal Containers, box of 400 | Sterilin | 128B | Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053 |
| Hot Block | |||
| Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick | VWR international | 451-0107 451-3112 451-3111 | |
| Plugged Glass Pipettes | Fisher Scientific | PMK-300-052R | |
| Dissecting Microscope | Wild Heerbrugg | ||
| Tissues, 100boxes | NHS SUPPLY CHAIN | MJT058 | |
| Metal Culture Trays | |||
| Plastic Melamine Trays | VWR international | 682-009 | |
| Oven | |||
| Mouth Pipette Mouthpiece | Scientific Laboratory Supplies LTD | HAE3700 | |
| Tubing | |||
| Syringe Filter, 0.2μm pore size, 25mm diameter | Fisher Scientific | FDM-340-010U | |
| Diamond Pen | VWR international | 818-0021 | |
| Hot Block for Slides | Thermo Fisher Scientific, Inc. | HBOSBB | |
| Hybridization Chamber | |||
| Tissue Roll | NHS SUPPLY CHAIN | MJT004 | |
| Schieferdecker Jar | VWR international | 631-9313 | |
| Coplin Jar | VWR international | 631-9331 | |
| Forceps, Fine | VWR international | 232-2123 | |
| Forceps, Blunt | VWR international | 232-2113 | |
| 1000mL Beaker | VWR international | 213-1642 | |
| Phase Contrast Microscope | Nikon Instruments | E200 | |
| Fibre-free Blotting Cards, box of 100 | Fisher Scientific | SDE1 | |
| Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100 | Scientific Laboratory Supplies LTD | MIC3022 | |
| Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200 | Scientific Laboratory Supplies LTD | MIC3110 | |
| Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200 | Scientific Laboratory Supplies LTD | MIC3104 | |
| Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100 | Scientific Laboratory Supplies LTD | MIC3206 | |
| 1mL Syringe, box of 100 | NHS Supply Chain | FWC045 | |
| 1mL Pipette Tip, 10racks of 1000 | Thistle Scientific | AX-T-1000-C-L-R | |
| Incubator | LEEC | ||
| Waterbath | Grant Equipment | W22 | |
| Alcohol Thermometer | Various sources available | ||
| pH Meter | Jenway | 3305 | |
| pH Electrode | VWR international | 662-1759 | BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305 |
| Heated Stirrer | Bibby | HC502 | |
| 1mL Pasteur Pipettes, box of 500 | Scientific Laboratory Supplies LTD | PIP4202 | |
| Parafilm, 50mm x 75m | VWR international | 291-1214 |
References
- Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis. Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements. Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 194-201 (2009).
- Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes. Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons. Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 230-235 (2009).
- Munné, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos. Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening). Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 203-229 (2009).
- Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod. Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).
- Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization. Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).
- Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis. Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).
- Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study. Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).
- Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. FISH variants with D15Z1. J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).
- Knight, S. J., Flint, J. Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis. J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).
- Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'. Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).
- Munné, S., Wells, D., Cohen, J. Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes. Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).
- Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization. N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).
- Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH. Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).
- Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes. J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).
