Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

कोरोनरी धमनी Ligation और रोधगलन की एक murine मॉडल में Intramyocardial इंजेक्शन

Published: June 7, 2011 doi: 10.3791/2581

Summary

कई आनुवंशिक जोड़तोड़ और / या जीन, प्रोटीन, कोशिकाओं, और / या biomaterials के intramyocardial इंजेक्शन गंभीर चोट / ischemia reperfusion और चूहों में पुरानी remodeling के अध्ययन में समय के आयाम पर आरोपित कर रहे हैं. यह वीडियो microsurgical प्रक्रियाओं ischemia / reperfusion के लिए, स्थायी कोरोनरी धमनी की ligation, और intramyocardial इंजेक्शन अध्ययन दिखाता है.

Protocol

  1. बाँझ शल्य चिकित्सा उपकरणों (तालिका 1) और 3 "कपास इत्तला दे दी applicators एक बाँझ Underpad पर रखा जाता है मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ (500 Germinator) चालू है.
  2. चूहे (उम्र:> 6 सप्ताह; wt: 18G>) / 20μl छ tribromoethanol BW (अवधि लगभग 40 मिनट 250mg/kg) के एक आईपी इंजेक्शन के साथ anesthetized हैं.
  3. जब चूहों पैर के अंगूठे चुटकी, एक बाँझ स्नेहक (आँसू नवीन) के लिए अनुत्तरदायी रहे हैं आंखों को लागू किया जाता है desiccation और सीने के बाईं ओर से उन्हें बचाने के लोमनाशक (जैसे नायर) के साथ लेपित है त्वचा से फर हटायें.
  4. लोमनाशक दूर गर्म पानी चल रहा है और / betadine swabbing के लिए शल्य चिकित्सा क्षेत्र कीटाणुरहित करने के लिए प्रयोग किया जाता है शराब के साथ धोया जाता है.
  5. माउस एक गर्म deltaphase इज़ोटेर्माल पैड जो एक Plexiglass तालिका करने के लिए तय हो गई है पर रखा गया है. प्रत्येक अंग टेप का उपयोग स्थिर है और एक मोटी धागा क्षैतिज शीर्ष दांत के तहत रखा गया है जगह में ऊपरी जबड़े पकड़ है.
  6. तालिका खड़ी तैनात है और एक fiberoptic प्रकाश सीधे गर्दन क्षेत्र पर transesophageal रोशनी के लिए shone है. इस सटीक ऐसे प्लेसमेंट कि गले के उद्घाटन के एक अच्छी तरह से जलाया छिद्र के रूप में देखा जाता है की आवश्यकता है, इस प्रकार ट्रेकिआ पीई टयूबिंग की प्रविष्टि को सुविधाजनक बनाने के लिए कल्पना हो सक्षम करने से.
  7. टयूबिंग तो वेंटीलेटर पर (95% 2 हे / 5% सीओ 2 से जुड़े) से जुड़ा है निरंतर सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन (Topo वेंटीलेटर प्रशासन, दर साँस 125 / मिनट; चोटी inspiratory दबाव 10-12 CMH 2 हे, * कृपया ध्यान दें सेटिंग्स तनाव और 1-3 लिंग से भिन्न). एक बार वेंटिलेशन तुल्यकालिक सीने आंदोलनों के द्वारा पुष्टि की है, कनेक्शन टेप के साथ पैड करने के लिए तय करने के लिए सर्जरी के दौरान extubation से बचने के.
  8. दांतेदार संदंश का प्रयोग त्वचा को खींच और छाती से दूर, # 10 बाँझ स्केलपेल ब्लेड एक # 3 स्केलपेल संभाल करने के लिए संलग्न करने के लिए त्वचा उरोस्थि के लिए समानांतर में एक 1.5cm चीरा बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है.
  9. घुमावदार Vanna microscissors pectoralis की मांसपेशियों में कटौती और पसलियों के बीच की मांसपेशी में एक छोटा सा छेद कर किया जाता है.
  10. सीधे, कुंद microscissors 3 पसलियों के माध्यम से कटौती करने के लिए उपयोग किया जाता है.
  11. एक 9mm बाल चिकित्सा नेत्र वीक्षक रिब पिंजरे वापस लेना करने के लिए प्रयोग किया जाता है.
  12. घुमावदार संदंश का प्रयोग, pericardium दिल से दूर खींचने के लिए और दांतेदार संदंश का उपयोग करने के लिए धीरे आंसू इसे खुला.
  13. Castroviejo सुई धारक, एक 6mm पतला बिंदु 3 / 8 सुई धागे का प्रयोग छोड़ दिया कोरोनरी धमनी (दिल की लंबी अक्ष के साथ) अवरोही पूर्वकाल के नीचे 8-0 पॉलीथीन सीवन को सीधा.
    1. एक अस्थायी संयुक्ताक्षर है कि समय पर reperfusion के लिए हटाया जा सकता है है, PE90 की एक बाँझ टुकड़ा 0.5 1cm दिल पर कोरोनरी धमनी के समानांतर में रखा गया है. सीवन, जो पहले कोरोनरी धमनी के तहत looped किया गया है तो टयूबिंग से बंधा है. समय यह करने के लिए जारी किया जाता है, संयुक्ताक्षर ढीला है. वांछित के रूप में और रोड़ा / reocclusion के समय 4 संशोधित किया जा सकता है दोहराया जा सकता है. प्रोटोकॉल और प्रयोग किया जाता संज्ञाहरण के प्रकार की लंबाई पर निर्भर करता है, पूरकता आवश्यक हो सकता है.
    2. एक स्थायी रोड़ा के लिए, कोरोनरी धमनी के तहत सजी संयुक्ताक्षर बस से बंधा हुआ है. Blanching और dyskinesia स्पष्ट कर रहे हैं और सिवनी के लंबे अंत 5-10 काट रहा है.
    3. Intramyocardial (ओं) इंजेक्शन, एक 30 गेज बाँझ beveled सुई के साथ एक बाँझ सिरिंज हैमिल्टन संयुक्ताक्षर के सही पक्ष पर चोट के क्षेत्र के ऊपर दिल के आधार में शुरू की है. सुई तो चोट के क्षेत्र में उन्नत है और थोड़ा इतना है कि बेवल सीमा क्षेत्र में लगभग देखा जा सकता है है वापस ले लिया. सिरिंज (2 3μl) में समाधान के कुछ दिल में अंतःक्षिप्त है और सुई जगह में आयोजित किया जाता है. सिरिंज एक और 1-3mm वापस ले लिया है और समाधान के बाकी इंजेक्शन है. सिरिंज जगह में आयोजित किया जाता है जब तक छाला है कि समाधान द्वारा गठित है dissipates. सुई निकाल दिया जाता है तो. अगर वहाँ किसी भी खून बह रहा है, एक कपास इत्तला दे दी applicator धीरे सुई प्रविष्टि साइट पर दबाया है जब तक खून बह रहा 5-7 बंद हो जाता है .
  14. एक बार दौरे जोड़तोड़ पूरा कर रहे हैं, रिब retractors हटा रहे हैं और वक्ष गुहा 2-3 6-0 surgipro सीवन का उपयोग गद्दे sutures के साथ बंद कर दिया है.
  15. दो - तीन गद्दे sutures तो pectoralis की मांसपेशियों बंद, 0.25% बाँझ खारा में marcaine 01:10 (0.1ml/25g माउस) की 1-3 बूँदें बना रहे हैं मांसपेशियों के लिए लागू किया जाता है और फिर 2-3 गद्दे sutures के लिए बना रहे हैं त्वचा बंद.
  16. माउस वेंटीलेटर से हटा दिया जाता है. एक बार लयबद्ध है, तेजी से, उथले श्वास सत्यापित है, माउस extubated जा सकता है.
  17. 0.5ml गर्म बाँझ खारा पृष्ठीय उपचर्म अंतरिक्ष में अंतःक्षिप्त है और माउस एक पिंजरे में एक वार्मिंग पैड पर रखा गया है जब तक यह गतिशीलता (1 घंटे के न्यूनतम) आएगा.
  18. अस्तित्व प्रयोगों के लिए, चूहों वापस अपने पिंजरों में रखा जाता है और बलिदान के समय तक मछली पालने का बाड़ा को लौट. पहले दो दिनों के दौरान सिक्त, खाना हैपिंजरे फर्श पर रखा खिलाने को सुविधाजनक बनाने के लिए (ताकि वे तक पहुँचने के लिए जो दर्द का कारण हो सकता है नहीं है) और buprenorphine हर 6 12hr प्रशासित किया जाना चाहिए. पोस्ट ऑपरेटिव परवाह भी पहले हफ्ते के लिए दैनिक निगरानी शामिल करने के लिए पर्याप्त गतिशीलता, सौंदर्य, और खाने की आदतों को सत्यापित.
  19. शल्य चिकित्सा उपकरणों इथेनॉल के साथ साफ कर रहे हैं और अगले सर्जरी से पहले मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ में डाला.
  20. बलिदान के समय, चूहों pentobarbital सोडियम (55-65 मिलीग्राम / किग्रा 65mg/ml) के साथ anesthetized हैं. जब संज्ञाहरण के एक पर्याप्त विमान हासिल की है, वक्ष गुहा खोला है.
  21. जबकि दिल अभी भी धड़क रहा है, एक 23 गेज ठंड पोटेशियम क्लोराइड युक्त सुई (KCl, 30mm) या 2,3-butanedione के साथ एक सिरिंज monoxime (BDM, 10mm) वेंट्रिकल के पीछे बेसल क्षेत्र पंचर और समाधान के लिए इस्तेमाल किया है धीरे से चेंबर में इंजेक्ट किया है जब तक दिल पाद लंबा में गिरफ्तार कर लिया है.
  22. एक बार दिल निकाल दिया जाता है, एक सिरिंज पीबीएस युक्त retrogradely perfuse दिल के लिए किसी भी रक्त रहता है कि हटाने कुल्ला करने के लिए प्रयोग किया जाता है. तीव्र पढ़ाई के लिए reperfusion की अवधि के अंत में, लाड रोड़ा के मूल बिंदु पर फिर ligated. % 1 इवान नीले युक्त समाधान महाधमनी में अंतःक्षिप्त है. एक बार दिल निकाला जाता है, यह transversely समान मोटाई के 3 वर्गों में कट जाता है, 1 2,3,5-triphenyltetrazolium क्लोराइड% में incubated, और morphometric 11 विश्लेषण के लिए imaged . पुरानी पढ़ाई के लिए, दिल तो लगानेवाला में डूब जाता है, तो संसाधित और नियमित प्रक्रिया के अनुसार एम्बेडेड. स्लाइड्स तो दाग histologically जा सकता है और morphometric विश्लेषण 9,10,12 (वंशज, एनआईएच छवि जम्मू, या छवि प्रो प्लस का उपयोग करके) के लिए imaged .

प्रतिनिधि परिणाम:

जब सही ढंग से किया, चूहों में जीवित रहने की दर (पुरुष: उम्र 8-10 सप्ताह, 22-28g, महिला उम्र 10-12 सप्ताह, 20-26g): 90 से अधिक% तीव्र ischemia / reperfusion और इस्कीमिक शर्त प्रयोगों से अधिक स्थायी धमनी ligation के अध्ययन में 85%, और intramyocardial इंजेक्शन के लिए लगभग 80%. चूंकि जल्दी चोट चयापचय परिवर्तन के बजाय संरचनात्मक, ischemia / reperfusion में रोधगलितांश आकार दृढ़ संकल्प और ischemic शर्त प्रयोगों महाधमनी है जो दिल है कि लाड द्वारा आपूर्ति नहीं है perfuse में 1% इवान नीले डाई infusing द्वारा निष्पादित द्वारा आसानी से दिखाई है ( चित्रा 1A). एक बार दिल से हटा दिया है और transversely आधे में कटौती, ऊतक 2,3,5-triphenyltetrazolium रोधगलितांश आकार (फिगर 1B) को मापने के क्लोराइड का 1% समाधान में incubated है. क्षेत्रों वंशज या एनआईएच इमेजिंग सॉफ्टवेयर है जो एक ही बढ़ाई imaged सुक्ष्ममापी का उपयोग कर calibrated किया जा सकता का उपयोग करके मापा जाता है. इन नंबरों के लिए जोखिम / बाएं वेंट्रिकल और रोधगलितांश / 11 जोखिम में आकार और क्षेत्र पर क्षेत्र की गणना करने के लिए उपयोग किया जाता है. तनाव मतभेद देखभाल करने के लिए दिल का वजन, शरीर के वजन, या तुलनात्मक उद्देश्यों के लिए टिबिया लंबाई इन उपायों को सामान्य करने के लिए लिया जाना चाहिए और इसलिए शरीर के वजन और दिल के आकार में रूपांतरों में परिणाम कर सकते हैं.

परिगलन जैसे सकल संरचनात्मक परिवर्तन में स्थायी धमनी ligation के परिणाम, दीवार thinning, और कक्ष फैलाव. उपचार और / या रोधगलितांश आकार और बाएं वेंट्रिकल, चैम्बर क्षेत्र, septal दीवार स्थायी रोड़ा मॉडल में (चित्रा 2A) और छोड़ दिया ventricular मुक्त दीवार मोटाई के सापेक्ष परिगलन पर समय के प्रभाव की तुलना में भी वंशज या एनआईएच इमेजिंग का उपयोग करके मापा जा सकता है सॉफ्टवेयर. Picrosirius / लाल तेजी से हरे (चित्रा 2B) के साथ कोलेजन धुंधला insterstitial तंतुमयता जो दीवार stiffening 8-10 के कार्यात्मक सूचकांक संबद्ध मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है . चित्रा 3 में छवि स्थायी धमनी ligation के बाद दिल के सीमा क्षेत्र में इंजेक्शन 6ul (इवान नीले) समाधान के वितरण का प्रतिनिधित्व करता है. सूचना है कि यह चोट की दिशा में के रूप में के रूप में बेस की ओर अच्छी तरह से और भी transmurally आय है.

चित्रा 1
चित्रा 1. ए इवान ब्लू 'छांटना से पहले महाधमनी में अंतःक्षिप्त यह छवि (दाग) दिल और occluded क्षेत्र (बेदाग) के perfused क्षेत्रों से पता चलता है. बी इवान' ब्लू और गंभीर चोट / ischemia reperfusion के बाद टीटीसी धुंधला. यह एक प्रतिनिधि (20x) छवि नीले डाई वितरण है जो unoccluded के रूप में के रूप में अच्छी तरह से metabolically व्यवहार्य ऊतक के टीटीसी (लाल) धुंधला क्षेत्रों दाग दिखा है. परिगलित क्षेत्रों दाग और नहीं तो वे पीला रहना (रेखांकित).

चित्रा 2
चित्रा 2. ए Hematoxylin और eosin दाग यह एक माउस transversely रोधगलितांश क्षेत्र के माध्यम से 4 दिनों में पोस्ट एमआई (20x) में कटौती दिल की एच एंड ई धुंधला का एक प्रतिनिधि छवि (20x) है. * ऊतक परिगलन अर्थ, तीर दानेदार ऊतक को इंगित करते हैं, आर.वी. = सही वेंट्रिकल और एल.वी. = बाएं वेंट्रिकल बी. Picrosirius लाल और तेजी से हरी दाग. यह है एकpicrosirius लाल / 4 के बाद एमआई सप्ताह पर माउस दिल के पार अनुभाग के तेजी से हरे रंग धुंधला हो जाना के प्रतिनिधि छवि (20x). cytoplasm दाग हरे और कोलेजन फाइबर लाल कर रहे हैं.

चित्रा 3
चित्रा 3. इवान ब्लू डाई 6ul intramyocardial इंजेक्शन निम्नलिखित दाग वितरण. यह एक प्रतिनिधि 6ul सीमा क्षेत्र में intramyocardial तुरंत कोरोनरी धमनी की ligation (12x) के बाद इंजेक्शन के बाद दिल भर इवान ब्लू डाई के वैश्विक और transmural वितरण दिखा छवि है.

Discussion

कोरोनरी हृदय रोग के लिए एक epidemiologically और fiscally महत्वपूर्ण सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या होना जारी है. काफी बुनियादी अनुसंधान अभी भी तंत्र है जिसके द्वारा चोट और remodeling आगे बढ़ना है और कैसे संभावित चिकित्सा इन प्रक्रियाओं मिलाना अगर वे नैदानिक ​​इस्तेमाल के लिए विकसित किया जा सकता को समझने की जरूरत है. कृन्तकों सबसे अधिक उपयोग किया जाता है और आनुवंशिक रूप से संशोधित उपलब्ध चूहों की विस्तृत श्रृंखला इस प्रजाति के एक अधिक आकर्षक मॉडल बनाता है.

यद्यपि वहाँ चूहों और अन्य प्रजातियों के बीच मतभेद हैं, वहाँ एक murine मॉडल के लिए कई फायदे हैं. एक साधारण विदारक गुंजाइश या आवर्धक कांच का प्रयोग करें और अच्छी तरह से जलाया परिस्थितियों vasculature को आसानी से देखा हो सकता है (vasculature की विस्तृत सकल शरीर रचना विज्ञान के लिए, Salto - Tellez एट अल देखें., 2004 13) सक्षम. पोस्ट ऑपरेटिव मृत्यु दर के जोखिम को कम करने के लिए, यह बहुत महत्वपूर्ण है के लिए बड़े जहाजों विच्छेद से बचने के बाद से एक 25g माउस के कुल रक्त की मात्रा कम से कम 14 2ml है. घटना में है कि अत्यधिक रक्तस्राव होता है, दबाव या तुच्छ दाग़ना की कोमल आवेदन रक्तस्राव को रोकने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

यह प्रक्रिया भी तरीकों की एक किस्म में संशोधित किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, चूहों anesthetized isoflurane ketamine / xylazine, या सोडियम pentobarbital और उचित चयन की अवधि 15-18 प्रोटोकॉल के द्वारा निर्धारित किया जाता है का उपयोग कर सकते हैं . पैर की अंगुली - चुटकी पलटा संज्ञाहरण की गहराई के सूचकांक सबसे अधिक इस्तेमाल किया है. इसके अलावा, लंबे समय तक जीवित रहने के लिए संभावना में सुधार, कुछ जांचकर्ताओं lidocaine जैसे antiarrhythmic दवाओं का उपयोग घातक arrhythmias 19,20 तथापि, यह खाते में लिया जाना चाहिए कि यह हाल ही में एक तीव्र antiapoptotic गुण है दिखाया गया है की घटनाओं को कम करने 21 मॉडल. इसके अलावा, पोस्ट ऑपरेटिव दर्द को कम करने के लिए, buprenorphine जैसे दर्दनाशक दवाओं 3,16,17,22,23 सर्जरी के बाद पहले 48 घंटे के लिए प्रशासित किया जा सकता है. सर्जरी के दौरान शरीर का तापमान (विशेष रूप से अब प्रोटोकॉल के लिए) को बनाए रखने के लिए, एक हीटिंग पैड के साथ श्रृंखला में एक गुदा जांच अक्सर इज़ोटेर्माल पैड की जगह में इस्तेमाल किया जाता है. स्थायी रोड़ा के लिए, रोधगलितांश के आकार संयुक्ताक्षर के स्थान का समायोजन करके संशोधित किया जा सकता है; रोड़ा (ओं) और reperfusion (ओं) की अवधि को बदला जा सकता है: ischemia / reperfusion की और / या इस्कीमिक पूर्व या postconditioning और intramyocardial इंजेक्शन (eg. कोशिकाओं, प्रोटीन) के लिए, वहाँ 1-3 इंजेक्शन स्थानों और इंजेक्शन प्रति मात्रा को 15 μl 24 किया जा सकता है सकते हैं. यदि कोशिकाओं को इंजेक्शन जा रहे हैं, सुई के गेज (26-30 आमतौर पर) का उपयोग किया 5,25,26 कोशिकाओं के आकार के आधार पर चुना जाना चाहिए ताकि सुई की आंतरिक व्यास काफी बड़े sheering से बचने है. सर्जरी द्वारा ट्रिगर भड़काऊ प्रक्रियाओं के कारण घालमेल से बचने के के लिए, कुछ जांचकर्ताओं का एक जाल है कि पूर्व के लिए रोक देना और 27-29 सर्जरी के बाद किसी भी बिंदु पर एक बंद सीने माउस में दिल reperfuse vivo चालाकी है का उपयोग करने के लिए सूचित किया है. हाल ही में, गाओ एट अल 30 से पता चला है कि अस्थायी और स्थायी रोड़ा वेंटीलेशन के लिए आवश्यकता के बिना प्रदर्शन किया जा सकता है और कुछ प्रयोगशालाओं के लिए अल्ट्रासाउंड का उपयोग करने के लिए बंद छाती intramyocardial इंजेक्शन 25,31 प्रदर्शन शुरू कर दिया है.

कई दूसरों के बाद से पहली बार चूहों में कोरोनरी धमनी ligating की व्यवहार्यता का प्रदर्शन अध्ययन जॉन्स और Olson द्वारा 32 1954 में प्रकाशित किया गया था, इस मॉडल को अपनाया है और इसे संशोधित myocardial चोट और 3,33-45 remodeling के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन. आकार, प्रजनन क्षमता, और खरीद और रखरखाव के लिए अपेक्षाकृत कम खर्च के मामले में चूहों की प्रकृति इस प्रजाति शारीरिक और pathophysiologic अध्ययन का एक व्यापक रेंज के लिए एक अपील उपकरण बनाते हैं. के रूप में 46-49 अग्रिम vivo में इमेजिंग के लिए प्रौद्योगिकी के miniaturization, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बड़े पैमाने पर जीनोमिक्स और प्रोटिओमिक्स, दवा स्क्रीनिंग, सेल आधारित और / या प्रोटीन चिकित्सा की प्रभावकारिता के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 50-64 biomaterials, संयुक्त प्रदर्शन और विश्लेषण का मतलब सर्वव्यापी या ऊतक विशिष्ट ट्रांसजेनिक या उत्परिवर्ती / पीटा चूहों द्वारा afforded आनुवंशिक जोड़तोड़ की तेजी से विस्तृत श्रृंखला के साथ, myocardial infarction के murine मॉडल निस्संदेह तीव्र हृदय चोट और दीर्घकालिक remodeling के मूल्यांकन में एक अमूल्य उपकरण होना जारी रहेगा. इसलिए, वहाँ के इन प्रयोगों प्रदर्शन मज़बूती और reproducibly करने में सक्षम किया जा रहा में निर्विवाद मूल्य है.

Disclosures

इस जानवर प्रोटोकॉल द्वारा अनुमोदित किया गया था और संस्थागत पशु देखभाल और पूर्व केरोलिना विश्वविद्यालय में उपयोग समिति द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों और नियमों के अनुसार है.

Acknowledgments

मैं करने के लिए धन उपलब्ध कराने के लिए अपनी सतर्कता और सहायता के लिए मेरे और तुलनात्मक चिकित्सा विभाग और अनुसंधान का समर्थन करने के लिए अनुसंधान और स्नातक अध्ययन के विभाग को स्वीकार करना होगा. मैं भी उनकी मदद के लिए उनके समर्थन और मार्गदर्शन के लिए फिजियोलॉजी विभाग के रूप में अच्छी तरह के रूप में अपनी प्रयोगशाला में छात्रों और तकनीशियनों को पहचान करना चाहते हैं. अन्त में, मैं जो समय के दौरान मैं माउस microsurgery सीखा प्रशिक्षण अवसर के लिए मेरे गुरु के बाद डॉक्टरेट, डॉ. चार्ल्स ई. Murry, शुक्रिया अदा करना चाहूँगा.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Long Vanna Scissors George Tiemann & Co. 160-159
Micro Dissecting Scissors George Tiemann & Co. 160-161
Forceps – straight, 1x2 teeth George Tiemann & Co. 105-205
Scalpel handle #3 George Tiemann & Co. 105-64 #10 sterile blade
Forceps – half curved serrated George Tiemann & Co. 160-19
Tissue Scissors George Tiemann & Co. 105-410
Castroviejo Needle Holder Miltex Inc. 18-1828
Cook Eye Speculum Miltex Inc. 18-63
Surgipro II 8-0 Suture Express VP-900-X
Prolene 6-0 Suture Express 8776
Germinator 500 Bead Sterilizer Cellpoint Scientific 65369-1
Deltaphase isothermal pad Braintree Scientific, Inc. 39DP
Hamilton syringe - 25μl Hamilton Co 80430
30 gauge beveled needle Hamilton Co 7803-07
Ventilator Kent Scientific TOPO

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Reinhard, C. Inbred strain variation in lung function. Mamm Genome. 13, 429-437 (2002).
  2. Schulz, H. Respiratory mechanics in mice: strain and sex specific differences. Acta Physiol Scand. 174, 367-375 (2002).
  3. Tarnavski, O. Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies. Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).
  4. Klocke, R., Tian, W., Kuhlmann, M. T., Nikol, S. Surgical animal models of heart failure related to coronary heart disease. Cardiovasc Res. 74, 29-38 (2007).
  5. Murry, C. E. Haematopoietic stem cells do not transdifferentiate into cardiac myocytes in myocardial infarcts. Nature. 428, 664-668 (2004).
  6. Nussbaum, J. Transplantation of undifferentiated murine embryonic stem cells in the heart: teratoma formation and immune response. Faseb J. 21, 1345-1357 (2007).
  7. Reinecke, H., Minami, E., Virag, J. I., Murry, C. E. Gene transfer of connexin43 into skeletal muscle. Hum Gene Ther. 15, 627-636 (2004).
  8. Virag, J. A. Attenuation of Myocardial Injury in Mice with Functional Deletion of the Circadian Rhythm Gene mPer2. Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2008).
  9. Virag, J. A. Fibroblast growth factor-2 regulates myocardial infarct repair: effects on cell proliferation, scar contraction, and ventricular function. Am J Pathol. 171, 1431-1440 (2007).
  10. Virag, J. I., Murry, C. E. Myofibroblast and endothelial cell proliferation during murine myocardial infarct repair. Am J Pathol. 163, 2433-2440 (2003).
  11. Cozzi, E. Ultrafine particulate matter exposure augments ischemia-reperfusion injury in mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291, 894-903 (2006).
  12. Virag, J. A. Attenuation of myocardial injury in mice with functional deletion of the circadian rhythm gene mPer2. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, 1088-1095 (2010).
  13. Salto-Tellez, M. Myocardial infarction in the C57BL/6J mouse: a quantifiable and highly reproducible experimental model. Cardiovasc Pathol. 13, 91-97 (2004).
  14. Diehl, K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21, 15-23 (2001).
  15. Lichtenberger, M., Ko, J. Anesthesia and analgesia for small mammals and birds. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 10, 293-315 (2007).
  16. Davis, J. A. Mouse and rat anesthesia and analgesia. Curr Protoc Neurosci. Appendix 4, Appendix 4B-Appendix 4B (2008).
  17. Flecknell, P. A. Anaesthesia of animals for biomedical research. Br J Anaesth. 71, 885-894 (1993).
  18. Kolk, M. V. LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction. J Vis Exp. , (2009).
  19. Kinoshita, H. T-type Ca2+ channel blockade prevents sudden death in mice with heart failure. Circulation. 120, 743-752 (2009).
  20. Mulder, P. Increased survival after long-term treatment with mibefradil, a selective T-channel calcium antagonist, in heart failure. J Am Coll Cardiol. 29, 416-421 (1997).
  21. Kaczmarek, D. J. Lidocaine protects from myocardial damage due to ischemia and reperfusion in mice by its antiapoptotic effects. Anesthesiology. 110, 1041-1049 (2009).
  22. Blaha, M. D., Leon, L. R. Effects of indomethacin and buprenorphine analgesia on the postoperative recovery of mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47, 8-19 (2008).
  23. Flecknell, P. A. Analgesia of small mammals. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 4, 47-56 (2001).
  24. Dries, J. L., Kent, S. D., Virag, J. A. Intramyocardial administration of chimeric ephrinA1-Fc promotes tissue salvage following myocardial infarction in mice. J Physiol. 589, 1725-1740 (2011).
  25. Springer, M. L. Closed-chest cell injections into mouse myocardium guided by high-resolution echocardiography. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 289, 1307-1314 (2005).
  26. Wang, C. C. Direct intramyocardial injection of mesenchymal stem cell sheet fragments improves cardiac functions after infarction. Cardiovasc Res. 77, 515-524 (2008).
  27. Nossuli, T. O. A chronic mouse model of myocardial ischemia-reperfusion: essential in cytokine studies. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 278, 1049-1055 (2000).
  28. Kim, S. C. Toll-like receptor 4 deficiency: smaller infarcts, but no gain in function. BMC Physiol. 7, 1472-6793 (2007).
  29. Fazel, S. S. Activation of c-kit is necessary for mobilization of reparative bone marrow progenitor cells in response to cardiac injury. Faseb J. 22, 930-940 (2008).
  30. Gao, E. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ Res. 107, 1445-1453 (2010).
  31. Fujii, H. Ultrasound-targeted gene delivery induces angiogenesis after a myocardial infarction in mice. JACC Cardiovasc Imaging. 2, 869-879 (2009).
  32. Johns, T. N., Olson, B. J. Experimental myocardial infarction. I. A method of coronary occlusion in small animals. Ann Surg. 140, 675-682 (1954).
  33. Frangogiannis, N. G. The immune system and cardiac repair. Pharmacol Res. 58, 88-111 (2008).
  34. Dobaczewski, M., Frangogiannis, N. G. Chemokines and cardiac fibrosis. Front Biosci (Schol Ed). 1, 391-405 (2009).
  35. Willis, M. S., Townley-Tilson, W. H., Kang, E. Y., Homeister, J. W., Patterson, C. Sent to destroy: the ubiquitin proteasome system regulates cell signaling and protein quality control in cardiovascular development and disease. Circ Res. 106, 463-478 (2010).
  36. Nithipatikom, K., Gross, G. J. Review article: epoxyeicosatrienoic acids: novel mediators of cardioprotection. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 15, 112-119 (2010).
  37. Palaniyandi, S. S., Sun, L., Ferreira, J. C., Mochly-Rosen, D. Protein kinase C in heart failure: a therapeutic target. Cardiovasc Res. 82, 229-239 (2009).
  38. Michael, L. H. Myocardial ischemia and reperfusion: a murine model. Am J Physiol. 269, 2147-2154 (1995).
  39. Patten, R. D. Ventricular remodeling in a mouse model of myocardial infarction. Am J Physiol. 274, 1812-1820 (1998).
  40. Paigen, K. A miracle enough: the power of mice. Nat Med. 1, 215-220 (1995).
  41. Kogan, M. E., Belov, L. N., Leont'eva, T. A., Zolotareva, A. G. Modeling of myocardial pathology in mice with the surgical methods. Kardiologiia. 17, 125-128 (1977).
  42. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods Mol Biol. 573, 115-137 (2009).
  43. Wong, R., Aponte, A. M., Steenbergen, C., Murphy, E. Cardioprotection leads to novel changes in the mitochondrial proteome. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, 75-91 (2010).
  44. Dobaczewski, M., Gonzalez-Quesada, C., Frangogiannis, N. G. The extracellular matrix as a modulator of the inflammatory and reparative response following myocardial infarction. J Mol Cell Cardiol. 48, 504-511 (2010).
  45. Zhao, Z. Q. Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion: comparison with ischemic preconditioning. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285, 579-588 (2003).
  46. Thibault, H. Acute myocardial infarction in mice: assessment of transmurality by strain rate imaging. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 293, 496-502 (2007).
  47. Scherrer-Crosbie, M. Three-dimensional echocardiographic assessment of left ventricular wall motion abnormalities in mouse myocardial infarction. J Am Soc Echocardiogr. 12, 834-840 (1999).
  48. Stypmann, J. Echocardiographic assessment of global left ventricular function in mice. Lab Anim. 43, 127-137 (2009).
  49. Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. Murine echocardiography and ultrasound imaging. J Vis Exp. , (2010).
  50. Zimmermann, W. H. Heart muscle engineering: an update on cardiac muscle replacement therapy. Cardiovasc Res. 71, 419-429 (2006).
  51. Mangi, A. A. Mesenchymal stem cells modified with Akt prevent remodeling and restore performance of infarcted hearts. Nat Med. 9, 1195-1201 (2003).
  52. Chavakis, E., Koyanagi, M., Dimmeler, S. Enhancing the outcome of cell therapy for cardiac repair: progress from bench to bedside and back. Circulation. 121, 325-335 (2010).
  53. Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpeper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart. J Mol Cell Cardiol. , (2010).
  54. Fromstein, J. D. Seeding bioreactor-produced embryonic stem cell-derived cardiomyocytes on different porous, degradable, polyurethane scaffolds reveals the effect of scaffold architecture on cell morphology. Tissue Eng Part A. 14, 369-378 (1089).
  55. Lee, R. J. Stem cells for myocardial repair and regeneration: where are we today. Methods Mol Biol. 660, 1-6 (2010).
  56. Segers, V. F., Lee, R. T. Protein Therapeutics for Cardiac Regeneration after Myocardial Infarction. J Cardiovasc Transl Res. , (2010).
  57. Webber, M. J. Capturing the stem cell paracrine effect using heparin-presenting nanofibres to treat cardiovascular diseases. J Tissue Eng Regen Med. 10, (2010).
  58. Kofidis, T. Novel injectable bioartificial tissue facilitates targeted, less invasive, large-scale tissue restoration on the beating heart after myocardial injury. Circulation. 112, I173-1177 (2005).
  59. Vunjak-Novakovic, G. Challenges in cardiac tissue engineering. Tissue Eng Part B Rev. 16, 169-187 (2010).
  60. Guyette, J. P., Cohen, I. S., Gaudette, G. R. Strategies for regeneration of heart muscle. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 20, 35-50 (2010).
  61. Menasche, P. Cardiac cell therapy: Lessons from clinical trials. J Mol Cell Cardiol. , (2010).
  62. Ott, H. C., McCue, J., Taylor, D. A. Cell-based cardiovascular repair--the hurdles and the opportunities. Basic Res Cardiol. 100, 504-517 (2005).
  63. Terrovitis, J. V., Smith, R. R., Marban, E. Assessment and optimization of cell engraftment after transplantation into the heart. Circ Res. 106, 479-494 (2010).
  64. Nelson, T. J. Repair of acute myocardial infarction by human stemness factors induced pluripotent stem cells. Circulation. 120, 408-416 (2009).

Tags

चिकित्सा अंक 52 रोधगलितांश ischemia / reperfusion की चूहों intramyocardial इंजेक्शन कोरोनरी धमनी दिल कलम बांधने का काम
कोरोनरी धमनी Ligation और रोधगलन की एक murine मॉडल में Intramyocardial इंजेक्शन
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Virag, J. A., Lust, R. M. CoronaryMore

Virag, J. A., Lust, R. M. Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction. J. Vis. Exp. (52), e2581, doi:10.3791/2581 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter