Summary
प्रोटोकॉल दो भी स्थापित मोटर समन्वय कार्यों में तेजी rotarod और क्षैतिज पट्टी, हाल ही में ऑक्सफोर्ड में विकसित दो परीक्षण, स्थिर छड़ और समानांतर सलाखों के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं. इन परीक्षणों मोटर संभवतः अपने आप में ब्याज की क्षति, साथ ही व्यवहार के अन्य क्षेत्रों के परीक्षण में संभव चर जा रहा है पता लगा सकता है.
Abstract
चूहे तेजी काफी हद तक पसंद की बिहेवियरिस्ट के पशु के रूप में चूहों की जगह, व्यवहार तंत्रिका विज्ञान में इस्तेमाल किया जा रहा है. ऐसी भावावेश या अनुभूति के रूप में व्यवहार के पहलुओं का आकलन किया जा सकता से पहले, तथापि, यह जैसे एक उत्परिवर्ती या lesioned माउस की मोटर क्षमताओं इस प्रकार के मूल्यांकन की अनुमति देने के लिए तय है कि महत्वपूर्ण है. ऐसे मॉरिस पानी भूलभुलैया के रूप में एक भूलभुलैया काम की आवश्यकता होती है शक्ति और समन्वय, पर प्रदर्शन अच्छी तरह से नहीं बल्कि संज्ञानात्मक दुर्बलता से, मोटर द्वारा एक माउस में प्रभावित हो सकता है, तो यह चुनिंदा पूर्व से बाद के टुकड़े करने के लिए आवश्यक है. NMDA विरोधी पानी भूलभुलैया प्रदर्शन 2 क्षीण करने के लिए दिखाया गया है, उदाहरण के लिए ज्ञानेन्द्रिय क्षति के कारण होता है.
मोटर समन्वय परंपरागत पशु अपने लंबे अक्ष के बारे में घूमता है कि एक क्षैतिज रॉड पर रखा गया है, जिसमें rotarod परीक्षण से चूहों और चूहों में मूल्यांकन किया गया है, पशु ईमानदार रहना और गिर नहीं करने के लिए आगे चलना चाहिए.दोनों निर्धारित गति और rotarod की त्वरक संस्करण उपलब्ध हैं.
अन्य तीन परीक्षण स्थिर तंत्र पर इस लेख (क्षैतिज पट्टी, स्थिर छड़ और समानांतर सलाखों) सभी उपाय समन्वय में वर्णित है. क्षैतिज पट्टी को भी विशेष रूप से बस सामने पंजे के साथ माउस शुरू में पकड़ती बार के रूप में forelimbs के, पर्याप्त प्रदर्शन के लिए शक्ति की आवश्यकता है.
वयस्क चूहों में इस तरह स्थिर छड़ और समानांतर सलाखों (व्यक्तिगत टिप्पणियों) के रूप में परीक्षण पर अच्छा प्रदर्शन नहीं करते हैं, वे अच्छी तरह से कम चूहों की तुलना में समन्वित दिखाई देते हैं. मैं केवल तथापि, नर चूहों का परीक्षण किया है, और पुरुष चूहों आम तौर पर कम अच्छी तरह से समन्वित महिलाओं से लग रहे हैं. , लैटिन नाम, मुसलमानों मस्कुलस, पूरी तरह उपयुक्त लगता है चूहों की तुलना में वजन अनुपात: चूहे एक उच्च शक्ति लग गए हैं. rotarod, पैर गलती परीक्षण 12 या कैटवॉक (Noldus) 15 तंत्र के रूपांतरों आम तौर पर चूहों में मोटर समन्वय का आकलन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं.
Introduction
व्यवहार कार्रवाई से प्रकट किया, और कार्रवाई के शरीर का समन्वय सहित मोटर कौशल, की आवश्यकता है. पशुओं के व्यवहार के इतिहास में पहली प्रयोगों में से एक कॉलिन स्टीवर्ट, अमेरिका 11 में क्लार्क विश्वविद्यालय में एक डॉक्टरेट की छात्रा द्वारा प्रदर्शन किया गया था. वह एक ड्रम में डाल द्वारा चूहों की गतिविधि को मापा और यह बदल गया समय की संख्या की गिनती की. यह जल्दी तंत्र शायद rotarod में पशु के बाहर पर चलता है जबकि चूहे, ड्रम के अंदर चूहे द्वारा संचालित किया गया था, जिनमें से आंदोलन था स्टीवर्ट तंत्र में यद्यपि, पहियों और वर्तमान में इस्तेमाल किया rotarod परीक्षण चलाने का अग्रदूत था जो एक घूर्णन ड्रम या रॉड मोटर चालित है.
Dunham और मिया (1957) 7 द्वारा इस्तेमाल किया मूल रॉड एक निर्धारित गति से किया था, लेकिन आजकल त्वरक संस्करण (जोन्स और रॉबर्ट्स 1968) 9 उपलब्ध हैं. एक निर्धारित गति rotarod का नुकसान गरीब समन्वय के साथ कुछ पशुओं पर गिर जाएगा कि हैशुरुआत, पर रहते हो कि उन लोगों के लिए है, जबकि परीक्षण जल्द बल्कि प्रतिशत से समन्वय से धीरज को मापने के लिए शुरू कर देंगे. पैरामीट्रिक विश्लेषण बाधा के रूप में डेटा बिंदुओं के परिणामस्वरूप bimodal वितरण पर्याप्त असामान्य हो सकता है. एक त्वरक rotarod इस्तेमाल किया जाता है, यह इस तरह के 10 सेकंड के लिए पर रहने के रूप में एक सेट कसौटी, हासिल की है, केवल जब त्वरित है, खासकर यदि डेटा वितरण गाऊसी होने की संभावना है. कि मोटर थकान प्रदर्शन में एक महत्वपूर्ण भूमिका अदा नहीं करता है तो त्वरण की दर को समायोजित किया जा सकता है, एक माउस स्पष्ट रूप rotarod पर सिर्फ 2-3 मिनट के समय के बाद थका होने की संभावना नहीं है.
"स्ट्रिंग परीक्षण 1", "कोट हैंगर परीक्षण" या क्षैतिज पट्टी forelimb शक्ति और समन्वय के उपाय. उद्धृत दो विशेषण इसके विकास को देखें, मूल रूप से एक स्ट्रिंग इस्तेमाल किया गया था, लेकिन लेखकों कि प्रदर्शन अक्सर एक कोट हैंगर, इसलिए भविष्य के प्रयोगकर्ताओं के एक धातु पट्टी का इस्तेमाल किया, स्ट्रिंग था कैसे तना हुआ पर बहुत ज्यादा निर्भर विख्यात. हम बार पकड़ के लिए एक माउस की क्षमता इसके व्यास के विपरीत आनुपातिक है कि मिल गया है, और standardly एक 2 मिमी बार इस्तेमाल किया है. भार परीक्षण में ("चूहों की ताकत मापने" जौव प्रोटोकॉल देखें) एक केतली फर / पैमाने कलेक्टर के बहुत ठीक तार मजबूत जानवरों वे अपने स्वयं के शरीर के वजन से अधिक उठा सकता है कि इस तरह के एक अच्छी पकड़ सुरक्षित करने के लिए अनुमति देता है. परीक्षण की संवेदनशीलता में सुधार के रूप में हालांकि, बड़े व्यास क्षैतिज पट्टियों का उपयोग एक फायदा हो सकता है, केवल एक 2 मिमी बार साथ सबसे सामान्य C57BL 6 / चूहों छत प्रदर्शन तक पहुँचने. इसलिए हम हाल ही में एक तीन बार तंत्र को अपनाया है, वे आधार स्तंभ के सबसे ऊपर में कटौती notches में फिट के रूप में सलाखों आसानी से interchanged हो सकता है. वे केवल समर्थन करता है थोड़ा (चित्रा 3 देखें) (एक धनुष और अपने स्ट्रिंग की तरह) एक साथ तैयार कर रहे हैं जब डिग्री फिट ही सलाखों के तनाव (विशेष रूप से महत्वपूर्ण 2 मिमी बार कठोर बनाने के लिए) के तहत आयोजित की जाती हैं.
स्टेटिक छड़ या मुस्कराते हुए अक्सर इस्तेमाल किया गया हैसमन्वय मापने के लिए, लेकिन अतिरिक्त प्रेरणा हमेशा रॉड पार करने के लिए पशुओं को राजी करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. वे ऐसे घर पिंजरे, एक उज्ज्वल प्रकाश से शरण, या भोजन (वे भूखा बना दिया गया है तो) के रूप में एक वांछित लक्ष्य तक पहुँचने के लिए एक क्षैतिज बीम पर बातचीत की. हालांकि, परीक्षण के इस प्रकार की जांच के पाठ्यक्रम में, मैं चूहों अनायास एक ब्रैकट रॉड का "खुला" अंत पर रखा जब चारों ओर मोड़, और फिर वे समर्थित अंत से पहले यह तय होता है कि खोज की. इस तकनीक समर्थित अंत तक पहुँचने के लिए प्रयास करने के लिए है एक ऊंचा छड़ी के अंत के पास रखा जा रहा करने के लिए एक माउस की सहज प्रतिक्रिया के रूप में प्रशिक्षण (जैसा कि पहले उल्लेख परीक्षण वेरिएंट में आवश्यक) के लिए की आवश्यकता समाप्त. यह, ज़ाहिर है, प्रेरक परिवर्तन प्रदर्शन प्रभावित हो सकता है कि समस्या को खत्म नहीं करता, जो हमेशा प्रक्रिया के इस प्रकार के साथ एक संभावना है.
गत्ता सुरंगों वर्तमान ज्यादा घर पिंजरे पर्यावरण संवर्धन के लिए इस्तेमाल किया है, लेकिन उनके disadवर्तमान संदर्भ में सहूलियत जानवरों को अनिवार्य रूप से rotarod पर संतुलन के लिए आवश्यक कौशल की नकल उतार, उनके लंबे अक्ष के बारे में लड़खड़ा सकता है कि सिलेंडरों पर संतुलन में अभ्यास किया जाएगा. इस प्रकार घर पिंजरे संवर्धन संभवतः एक व्यवहार फेनोटाइप मुखौटा सकता है, एक उदाहरण के संवर्धन के 14 से एक है Huntington रोग phenotype के सुधार है. इसके अलावा पशुओं को अक्सर एक ऊंचा स्थिर बीम के साथ चलने के रूप में जब इन सुरंगों की लंबी अक्ष के साथ चलते हैं. इसलिए मैं ऊंचा समानांतर सलाखों की एक जोड़ी का निर्माण किया है, और एक बार और दूसरे पर hindpaws, वे पहले का सामना करना पड़ा है कभी नहीं होगा जो एक स्थिति पर forepaws के साथ बीच में चूहों रखा. चूहे की परीक्षा उत्तीर्ण करने के लिए ईमानदार, जबकि शेष समानांतर सलाखों के अंत का समर्थन करता है पहुँचना था. एक कुछ इसी तरह की डिवाइस scrapie प्रेरित मोटर रोग 13 के विकास का आकलन करने के लिए एक माउस पिंजरे में रखा समानांतर सलाखों की एक श्रृंखला थी.
हम अब कई सौ का परीक्षण कियाऑक्सफोर्ड में मोटर कामकाज के लिए चूहों. इन औषधीय एजेंटों, या मनुष्य से ऊतक के निष्क्रिय हस्तांतरण (प्लाज्मा) सहित विभिन्न उपचार प्राप्त है, लेकिन ज्यादातर आनुवांशिक रूप से पशुओं को संशोधित किया था. कुछ जानवरों अधिक समन्वय कार्य, दूसरों इसके विपरीत से बल पर भ्रष्ट थे. कुछ चूहों को अधिक ऐसे स्थिर छड़ और समानांतर सलाखों, दूसरों ठीक इसके विपरीत के रूप में स्थिर substrates पर से rotarod पर बिगड़ा थे. विभिन्न उपचार और म्यूटेशन विभिन्न चूहों में मोटर समारोह को प्रभावित कर सकते हैं जिस तरह से चिह्नित करने के लिए कैसे का वर्णन वर्तमान लेख और "चूहों में ताकत मापने" साथ जौव प्रोटोकॉल) तो. इसके अलावा rotarod से यहाँ वर्णित तंत्र, सरल सस्ता और मोटर कौशल के परीक्षण के लिए विशेष नहीं प्रयोगशालाओं के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है. ठीक पैमाने चाल विश्लेषण के लिए, कैटवॉक प्रणाली एक ऐसी स्याही स्नान के माध्यम से और फिर एक कागज का टुकड़ा नीचे चलने के लिए एक माउस राजी ही पुराने तरीकों की तुलना में काफी अधिक परिष्कृत प्रणाली है, लेकिन यह एक expensiv हैतंत्र की ई टुकड़ा.
इन परीक्षणों के सभी मांसपेशियों टोन का स्पष्ट रूप से एक न्यूनतम डिग्री माउस अपने अंगों का उपयोग करने के लिए बस के लिए आवश्यक है, हालांकि, बल्कि ताकत से समन्वय को मापने के लिए तैयार कर रहे हैं. ताकत के आकलन के लिए, उल्टे स्क्रीन प्रक्रिया 10 एक अधिक वर्गीकृत माप आवश्यक है, तो वजन परीक्षण या अपने स्वचालित (जौव प्रोटोकॉल "चूहों में मापने शक्ति" में वर्णित है) समकक्ष बार खींच, अधिक उपयुक्त है, या. अपवाद के सफल प्रदर्शन के लिए शक्ति और समन्वय दोनों की आवश्यकता है जो क्षैतिज पट्टी परीक्षण, है.
Protocol
1. उपकरण
सभी परीक्षणों के लिए एक नरम गद्देदार सतह से गिर जाते हैं कि किसी भी चूहों तकिया तंत्र के आधार पर रखा गया है. एनबी इस उपकरण के किसी भी हिस्से अस्पष्ट करने के लिए नहीं है, क्रम में आंकड़ों में नहीं दिखाया गया है. चूहों के सैकड़ों के परीक्षण के दौरान, सामान्य और उत्परिवर्ती दोनों, हम आम तौर पर 30-50 सेमी अधिक है जो इस तरह के तंत्र, से गिरने की वजह से किसी भी चोट कभी नहीं देखा है. इसके अलावा, परीक्षण प्रत्येक माउस के बीच उपकरण स्वच्छ और बाँझ बनाना सुनिश्चित करें.
1.1 rotarod
वहाँ के बाजार पर इस उपकरण के कई वाणिज्यिक संस्करणों रहे हैं, लेकिन कुछ ऐसे मोटर असमन्वय (बजाय धीरज से अधिक) का पता लगाने के लिए एक पर्याप्त गति में तेजी लाने में नाकाम रहने के रूप में नुकसान है. एक अन्य आम गलती रॉड ड्रॉप या बंद कूद करने के लिए प्रवृत्त चूहों में जिसके परिणामस्वरूप आधार ऊपर पर्याप्त नहीं है कि है.
चित्र 1 में दिखाया rotarod डिजाइन करने के लिए बनाया गया थाऑक्सफोर्ड के औषध विज्ञान, विश्वविद्यालय के विभाग के इंजीनियरिंग वर्गों द्वारा लेखक के. छड़ी 30 सेमी तंत्र का आधार ऊपर समर्थित व्यास में 3 सेमी, है. सतह चूहों (चित्रा 2) को प्रभावी ढंग से इसे पकड़ के लिए सक्षम करने, अनुदैर्ध्य अक्ष के साथ समानांतर लकीरें की एक श्रृंखला में knurled है. नायब लकीरें की गहराई एक महत्वपूर्ण विस्तार है, माउस एक अच्छी पकड़ नहीं मिल सकता है अगर परीक्षण बहुत ज्यादा कठिन हो जाएगा, दूसरे हाथ पर, पकड़ भी अच्छा है अगर माउस निष्क्रिय धारण करके छड़ी के चारों ओर "गाड़ी का पहिया" होगा यह करने के लिए पर. "शौकिया rotarod निर्माताओं" के लिए यह चूहों के लिए एक उपयुक्त आकार के knurled लकड़ी dowelling व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है कि पता करने के लिए उपयोगी हो सकता है, यह निश्चित रूप से उपयोग करने से पहले एक अच्छा पनरोक वार्निश के साथ इलाज किया जा करने की आवश्यकता होगी. शुरू गति 4 आरपीएम, 20 आरपीएम / मिनट के लिए त्वरण दर को निकाला जाता है. अधिकतम गति 40 आरपीएम है.
दो रॉड छोड़ने से माउस को रोकने flanges. वे व्यास में 30 सेमी (यह कर रहे हैंशायद) 20 सेमी तक कम किया जा सकता है. उनकी जुदाई 6 सेमी (अधिकतम) पर सेट किया जाता है, लेकिन वे छड़ी पर चारों ओर मोड़ करने के लिए करते हैं तो उप वयस्क चूहों के लिए छोटे समायोजित करने की आवश्यकता हो सकती है.
1.2 ट्रिपल क्षैतिज पट्टियों (चित्रा 3)
सलाखों के पीतल के बने होते हैं, 38 सेमी लंबा, प्रत्येक के अंत में एक लकड़ी के समर्थन स्तंभ से बेंच की सतह से ऊपर 49 सेमी का आयोजन किया. कॉलम एक भारी लकड़ी के आधार के लिए सुरक्षित कर रहे हैं. तीन बार व्यास उपलब्ध हैं: 2, 4 और 6 मिमी. 2 मिमी बार हम उपयोग एक मानक है, लेकिन कई चूहों इस पर अधिकतम स्कोर तक पहुँचने. इसलिए बड़े व्यास सलाखों चूहों ये इतनी अच्छी तरह से पकड़ नहीं सकता है, के रूप में परीक्षण को परिष्कृत करने की कोशिश में शामिल किया गया है.
1.3 स्टेटिक छड़
अलग मोटाई (35 (रॉड 1), 28, 22, 15 और 9 (रॉड) 5 मिमी व्यास) के पांच लकड़ी dowels या छड़ प्रत्येक 60 सेमी लंबी छड़ क्षैतिज फैलाना है कि इस तरह के एक प्रयोगशाला शेल्फ के लिए एक जी दबाना द्वारा तय कर रहे हैं में अंतरिक्ष (चित्रा 4). अंतबेंच के पास रॉड का एक निशान खत्म कर लाइन को निरूपित करने के अंत से 10 सेमी है. मंजिल से ऊपर की छड़ की ऊंचाई 60 सेमी है.
एक छोटी और कम विस्तृत परीक्षण की आवश्यकता है, केवल सबसे बड़ा, सबसे छोटी और मध्यम छड़ का उपयोग करें. वान Dellen एट अल. 14 चूहों में है Huntington रोग की प्रगति का आकलन करने के लिए केवल एक ही छड़ी का इस्तेमाल किया.
1.4 समानांतर सलाखों
व्यास में दो समानांतर इस्पात सलाखों लंबाई में 1 मीटर और 4 मिमी उनके सिरों (चित्रा 5) में लकड़ी के आधार स्तंभ से अलग 30 मिमी (अपने केन्द्रों पर) तय कर रहे हैं. सलाखों मंजिल से ऊपर 60 सेमी हैं.
2. प्रक्रिया
सभी परीक्षणों के लिए, वे पूरी तरह से जाग रहे हैं सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण से पहले प्रायोगिक कक्ष 5-20 मिनट के लिए चूहों को ले आओ. एक सामान्य नियम के रूप में, मांसपेशियों की शक्ति और उत्तेजना का स्तर सामान्य करने के लिए एक वापसी की वसूली की अनुमति देने के लिए, प्रत्येक मोटर परीक्षण के बाद घर पिंजरे की वापसी से चूहों आराम. </ P>
2.1 rotarod
4 आरपीएम, त्वरण दर 20 आरपीएम / मिनट की एक शुरुआत की गति के साथ rotarod सेट करें. पूंछ से माउस होल्डिंग, और घूर्णन छड़ी पर जगह है, यह ईमानदार रहने के लिए आगे चलना है तो रोटेशन की दिशा से दूर का सामना करना पड़. यह माउस नीचे क्षैतिज 45 डिग्री के कोण पर छड़ी की दिशा में लाया जाता है तो ऐसा करने के लिए सबसे आसान है, ऊपर से माउस को कम करने के प्रयास में यह अपने पिछले पैरों के प्रसार और flanges के किनारों लोभी में परिणाम होगा. यह लगभग रॉड को छू जाता है तो जल्दी से इसे आसानी से रॉड पकड़ के लिए सक्षम करने के लिए, बस के आगे शीर्ष मृत केंद्र की और छड़ ऊपर, माउस छोड़ें. एक (शायद आसान और अधिक विश्वसनीय तकनीक) एक पतली (10-15 मिमी) dowel के उपयोग के लिए है. एक हाथ में माउस होल्डिंग, लंबे अक्ष के समानांतर, dowel के लिए उस पर कम. dowel यह इसे जारी किया है एक बार rotarod पकड़ करने के लिए अधिक समय देने के लिए 30 डिग्री के बारे में माउस का सिर नीचे की ओर से angled है. वें के बीच माउस और dowel लोअरई rotarod की flanges, और एक बार घूर्णन छड़ी से अधिक रॉड समझ और आगे चलना होगा, जो दूर माउस से dowel के नीचे की ओर खींच.
10 से कम सेकंड छड़ी पर माउस रखने के बाद, (माउस आगे का सामना करना पड़ रहा है के रूप में लंबे समय के रूप में: अगर नहीं, यह त्वरण के शुरू करने से पहले आगे का सामना करना पड़ता तक इंतजार) त्वरण शुरू, और माउस से गिर जाता है जिस गति से ध्यान दें. यह 10 सेकंड से पहले बंद हो जाता है, तो गिरावट के समय ध्यान दें और 10 सेकंड बिंदु के बाद पहली बार गिरावट पर गति रिकॉर्डिंग, कुल में तीन बार करने के लिए, पुन: प्रयास करें. हालांकि, दर्ज नहीं किया जाना चाहिए प्रयोगकर्ता द्वारा गरीब रखने के कारण हैं जो 5 सेकंड से पहले हो जाता है. गिरावट पर मतलब गति गृहीत है, बल्कि अधिकतम गति का उपयोग कर से, यह माउस यह प्रदर्शन सहायता करेगा माना जाता है कि जो असफल रन के दौरान प्राप्त अतिरिक्त अभ्यास के लिए सही. इस प्रकार 10 सेकंड पहले गिर जाता है कि एक माउस एक बार फिर 12 आरपीएम तक दूसरी बार स्कोर (4 12) / 2 = 8 आरपीएम पर रहता है. दो बार तो गिरने एक माउस10 आरपीएम स्कोर (4 4 10) / 3 = 6 आरपीएम के लिए पर रह. एक माउस 10 में पकड़ में विफल रहता है, तो सेकंड में तीन बार यह 4 आरपीएम के स्कोर आवंटित.
एक समस्या यह चूहों वे निष्क्रिय कलाबाजी दौर, सबसे अंत में गिर हालांकि, ताकि कभी कभी आगे चलने बंद करो और मजबूती के बजाय छड़ी पकड़ है. इसलिए यह इस तरह की पहली उलटा होता है जब भी गति नोट करने के लिए उपयोगी हो सकता है. एक संभव समाधान के लिए एक बड़ा व्यास या कम स्पष्ट लकीरें साथ एक छड़ी का उपयोग करने के लिए हो सकता है.
2.2 क्षैतिज सलाखों
चूहों संकीर्ण 2 मिमी बार काबू करने के लिए यह सबसे आसान पाते हैं, यह इस पर एक पहले उन्हें परीक्षण करने के लिए सलाह दी जाती है. पूंछ से माउस होल्डिंग, तंत्र के सामने बेंच पर जगह है, 20 सेमी (यह पट्टी को सीधा संरेखित करता है) के बारे में जल्दी से इसे पीछे की ओर स्लाइड, यह तेजी से बढ़ा है और इसके साथ केंद्रीय बिंदु पर क्षैतिज पट्टी समझ चलो इसके forepaws ही, और एक साथ stopclock शुरू, पूंछ जारी. इस गएक कुशलता हासिल करना मुश्किल हो सकता है, पूंछ अचानक जारी की है तो कुछ चूहों को पकड़ बेहतर, वे अभी भी समर्थन कर रहे हैं अगर उन्हें लगता है कि वे पकड़ के लिए विफल हो सकता है. एक forepaw एक स्तंभ से छू तक माउस पट्टी के अंत स्तंभों में से एक, या समय तक पहुँचने से पहले कसौटी बिंदु या तो बार से एक गिरावट है. अधिकतम परीक्षण समय (कट ऑफ समय) 30 सेकंड है.
माउस ठीक से पहली बार बार समझ में विफल रहता है और यह प्रयोगकर्ता की तकनीक के कारण प्रतीत होता है, बल्कि माउस से, फिर से कोशिश (एक और एक या दो चूहों का परीक्षण कर रहे हैं, जबकि एक संक्षिप्त आराम के बाद) और इस गिरावट रिकॉर्ड नहीं है. माउस 5 सेकंड पहले गिर जाता है और जाहिरा तौर पर इस प्रयोगकर्ता द्वारा गरीब रखने के कारण नहीं है, तो एक> 5 सेकंड स्कोर प्राप्त करने के प्रयास में तीन गुना तक दोहराएँ. > 5 सेकंड दूसरा प्रयास पर एक तीसरा परीक्षण नहीं करते हैं. दत्त के रूप में बेहतरीन स्कोर लो. बार बार केवल 1> 5 सेकंड के स्कोर के लिए खुद को समर्थन करने के लिए विफल रहता है कि एक माउस.
ट्रिपल बार संस्करण इस्तेमाल किया जा रहा है, तो यह पहले 2 मिमी पट्टी पर माउस स्कोर 5 अगर एक और एक या दो चूहों का परीक्षण कर रहे हैं, यह तो एक संक्षिप्त बाकी अवधि के बाद, मोटा सलाखों पर परीक्षण किया जा सकता है. 4 और 6 मिमी सलाखों के लिए स्कोरिंग प्रणाली 2 मिमी बार के रूप में एक ही है, और अंतिम स्कोर cumulated कुल है. इस प्रकार एक माउस है कि 2 मिमी पट्टी पर स्कोर 5 लेकिन 5 +3 = 8 13 सेकंड के स्कोर के बाद 4 मिमी बार से गिर जाता है.
2.2.1
क्षैतिज सलाखों स्कोरिंग: पहले दो अंतराल चूहों शुरू में वे गिर करने के लिए कम संभावना है काम में महारत हासिल है एक बार के रूप में पिछले दो से भी कम कर रहे हैं:
1-5 सेकंड = 1 के बीच गिरने
6-10 सेकंड के बीच गिरने = 2
11-20 सेकंड के बीच गिरने = 3
21-30 सेकंड के बीच गिरने = 4
30 के बाद गिरने सेकंड = 5
= 5 गिरने के बिना एक बार समर्थन पर एक forepaw रखकर
4 और 6 मिमी सलाखों के वैकल्पिक उपयोग के रूप में नायब हम अभी तक व्यापक नहीं है हमारे प्रोटोकॉल के लिए एक नया इसके अतिरिक्त हैउनके साथ अनुभव.
2.3 स्टेटिक छड़
व्यापक रॉड (अंत से नाक टिप एक सिर की लंबाई आदर्श है) के दूर के अंत में माउस रखें. अभिविन्यास समय (शेल्फ की ओर शुरू की स्थिति से 180 ° मालूम करने के लिए लिया गया समय) और पारगमन समय (शेल्फ अंत (छड़ी के शेल्फ अंत से 10 सेमी निशान के पार नाक) की यात्रा करने के लिए लिया गया समय: दो उपाय.
अभिविन्यास ईमानदार रहने माउस पर निर्भर है, यह उल्टा पड़ जाता है और रॉड नीचे पकड़ लेता है, मनमाने ढंग से (सांख्यिकीय प्रयोजनों के लिए) 120 सेकंड की अधिकतम अभिविन्यास स्कोर आवंटित. यह छोटे छड़ पर परीक्षण नहीं है, यह भी पारगमन समय स्पष्ट रूप से बेहतर उल्टा पर फांसी जबकि संक्रमण है जो एक से समन्वित है ईमानदार संक्रमण है कि एक माउस के रूप में अधिकतम मूल्य हो जाता है.
, Orienting के बाद, माउस गिर जाता है या यह है पर यह परीक्षण नहीं करते अधिकतम परीक्षण समय (मनमाने ढंग से 120 सेकंड में सेट) तक पहुँच जाता हैmaller छड़. सांख्यिकीय प्रयोजनों के लिए, गिरने आवंटित चूहों यह है कि वे फिर से एक संकरा रॉड से गिर जाएगा माना जाता है, जैसा कि विशेष छड़ी के लिए और बाद में लोगों के लिए 120 आवंटित कर रहे हैं. माउस उल्टा पड़ जाता है, तो भी इस घटना ध्यान दें, सफल पारगमन के साथ ही उन्मुखीकरण के लिए यह छड़ी पर ईमानदार रहना चाहिए. अन्यथा यह अधिकतम स्कोर आवंटित. यह छड़ी या गिर के अंत तक पहुँच के बाद माउस निकालें.
एक छड़ी पर परीक्षण करने के बाद आप एक और माउस का परीक्षण करते समय आराम करने के लिए घर पिंजरे में माउस वापसी. फिर अगले छोटे आकार रॉड पर डाल दिया और फिर उसी तरह से यह परीक्षण. माउस से अधिक 5 सेकंड के लिए उस पर रहने के बाद एक लोहे की छड़ से गिर जाता है तो परीक्षण बंद करो. यह सेकंड इसे बदलने और तीन परीक्षणों की एक अधिकतम के लिए एक और प्रयास (5 सेकंड के भीतर गिरने प्रयोगकर्ता द्वारा दोषपूर्ण रखने के कारण हो सकता है के रूप में) की अनुमति है, और सबसे अच्छा परिणाम का उपयोग कम से कम 5 में से गिर गया है.
2.4 समानांतर सलाखों
टी में माउस रखेंसलाखों की है कि अपनी अनुदैर्ध्य अक्ष सीधा के साथ दो बार की वह केंद्र, दोनों सामने पंजे एक बार पर होना चाहिए, अन्य पट्टी पर दोनों हिंद पंजे. स्कोरिंग स्थिर छड़ के लिए समान है. यह बाद में अंत का समर्थन करता है पर पहुंचता है जब तक माउस 90 शुरू करने की स्थिति में रहेंगे, और समय orients तक लगने वाले समय: दो उपाय. माउस उल्टा पड़ जाता है, तो भी इस घटना ध्यान दें. परीक्षण, अभिविन्यास और पारगमन यह उल्टा मोड़ के बिना हासिल किया जाना चाहिए स्थिर छड़ के रूप में, अन्यथा अधिकतम समय आवंटित किया जाता है. यथोचित स्वस्थ चूहों कम से कम 5 सेकंड में गिर करने के लिए दुर्लभ है, यह होता है तो यह शायद गरीब रखने की वजह से है. इसलिए परिणाम त्यागें और माउस जांचना.
Representative Results
अपेक्षित परिणाम
एक स्थिर रॉड मूल रूप से या अपने घर पिंजरों 14 में पर्यावरण संवर्धन के बिना, उत्परिवर्ती चूहों में है Huntington रोग की प्रगति की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया गया था. संवर्धन कार्यक्रम को नाटकीय रूप से, स्नायविक हानि का एक सामान्य हस्ताक्षर clasping हिंद पंजा के शुरू होने में देरी से paralleled था जो छड़ी पर मोटर रोग की शुरुआत में देरी.
Scrapie संक्रमित चूहों में कम से कम सप्ताह 19 8 (पहले इसका परीक्षण किया नहीं गया था) से एक सप्ताह में 18 से rotarod परीक्षण में 16 सप्ताह के बाद इंजेक्शन से क्षैतिज पट्टी प्रदर्शन में कमी, और स्थिर छड़ से पता चला है. KATP चैनल सबयूनिट Kir6.2 को चूहों स्थिर छड़ और क्षैतिज पट्टी पर बिगड़ा, लेकिन नहीं rotarod 4 पर थे. हिप्पोकैम्पस के घावों मोटर क्षमता 5 के किसी भी उपाय पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा, लेकिन 129S2/Sv चूहों C57BL / rotarod और स्थिर छड़ 3 पर 6 तनाव के सापेक्ष भ्रष्ट थे. C57BL/10 चूहे भी C57BL 6 / चूहों 6 से भी बदतर मोटर प्रदर्शन किया था, हालांकि नहीं 129S2/Sv चूहों के रूप में उसी हद तक.
चित्रा 1. rotarod.
चित्रा 2. Rotarod की knurled रॉड का विस्तार.
चित्रा 3. ट्रिपल क्षैतिज सलाखों डिग्री में आयोजित बार बुनियादी 2 मिमी से एक है,. 4 और 6 मिमी सलाखों के हैं (केवल प्रदर्शन प्रयोजनों के लिए) इसे नीचे हमला बोला. अभ्यास में, एक समय में केवल एक बार नोकदार समर्थन में रखा जाता है.
चित्रा 5. समानांतर सलाखों पर एक माउस. पैडिंग प्रदर्शन उद्देश्यों के लिए ही हटा दिया गया है.
Disclosures
लेखक का खुलासा करने के लिए ब्याज की कोई संघर्ष है.
Acknowledgments
ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय के लिए ओपन एक्सेस धन उपलब्ध कराने के लिए वेलकम ट्रस्ट. रॉबर्ट Deacon वेलकम ट्रस्ट अनुदान WT084655MA द्वारा वित्त पोषित ऑक्सफोर्ड OXION समूह का एक सदस्य है.
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