Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Hyponeophagia : قياس القلق في الماوس

Published: May 17, 2011 doi: 10.3791/2613

Summary

الفئران والجرذان ، وذلك بسبب الحذر بهم الفطرية ، في البداية بطيئا في استهلاك الغذاء الرواية ، ولا سيما في مكان الرواية. ويمكن بسهولة أن تقاس هذه hyponeophagia في المختبر ، على الرغم من الحيوانات المختبرية هي اقل بكثير من القلق من نظرائهم البرية

Abstract

قبل هذا اليوم ، عندما القوارض سريع المفعول وقوية مثل ألفا كلورالوز لم يستخدم حتى الآن ، كثيرا ما عرقل عمل الآفات التي تحكم وهي ظاهرة تعرف باسم "الخجل الطعم". يمكن أن الفئران والجرذان لم القيء ، ونظرا لضيق القلب العضلة العاصرة للمعدة ، وذلك للتغلب على مشكلة التسمم الغذائي المحتملة التي تطورت استراتيجية first تناول كميات صغيرة جدا من المواد الرواية. بلعها المبالغ ثم تزداد تدريجيا حتى الحيوان قد قرر ما إذا كانت المادة غير سليمة ومغذية. لذا فإن الصيادين القديم الجرذان طرحت لأول مرة مادة مستساغة مثل الشوفان ، والذي كان ليكون وسيلة لالسم ، في المنطقة الموبوءة. وفقط عندما يجري استهلاكه كميات كبيرة بسهولة ثم يضيفون السم في المبالغ المحسوبة لا تؤثر على طعم السيارة. فإن الطعم المسموم ، والتي كانت هذه الحيوانات الآن في تناول كميات كبيرة بسهولة ، ثم نفذ بسرعة وظيفتها.

يستخدم الآن الخجل الطعم في المختبر السلوكية كوسيلة لقياس القلق. يتم تقديم مادة مستساغة للغاية ولكن الرواية ، مثل الذرة الحلوة والمكسرات والحليب المكثف المحلى ، للفئران (أو الفئران) في حالة الرواية ، مثل قفص جديد. ثم يتم قياس زمن الوصول إلى تستهلك كمية محددة من الطعام الجديد.

يمكن أن يكون روبرت ديكون MJ تصل في robert.deacon @ psy.ox.ac.uk

Protocol

1. مقدمة :

والفئران والجرذان في البداية تستهلك كميات صغيرة فقط من الطعام الرواية. ويعتقد أن هذا لأنهم قد يتعرضون للتسمم بسبب عدم قدرتهم على التقيؤ.

الاستثناء الوحيد لهذا هو إذا ما واجهت من قبل حيوان آخر والتي قد أكل هذا الطعام ، وإذا كانت رائحة لها على الهواء الزفير من أقرانهم ، فإنها تصنف على أنها آمنة 13. هذا لأنه يتم إقران رائحة الطعام مع ثاني كبريتيد الكربون في 12 نفسا في الفئران الأخرى. في الواقع ، ثاني كبريتيد الكربون في حد ذاته يزيد من استهلاك المواد الغذائية في كل من الفئران والجرذان 17. وتسمى هذه الظاهرة "انتقال الاجتماعية للتفضيلات الغذاء" ، ويمكن استخدامها كنموذج بسيط التعلم الشمية 22. وقد أبلغ ذلك إلى أن تكون حساسة لآفات الحصين 3 ، ولكن دراسات أخرى 5 فشل في تكرار هذه النتيجة. وقد اقترح أن نظام القشرة المخية الحديثة كوليني ، ولا سيما العنصر الأمامية المدارية 19 يجوز أن يكون أكثر أهمية من النظام الكوليني الحصين للانتقال الاجتماعية. وقد تم نقل الاجتماعية حتى يظهر لتعقب ضعف الذاكرة لدى الفئران الذين تتراوح أعمارهم ، ربما عن طريق توسط CREB انخفض (CAMP استجابة عنصر ملزم البروتين) نقل في قرن آمون الذين تتراوح أعمارهم بين 7.

السهولة التي القوارض الحصول على الغذاء من خلال تفضيل انتقال الاجتماعي له آثار قوية لاختبار hyponeophagia. عندما كان مقدم البلاغ إجراء اختبار hyponeophagia مع الفئران lesioned الحصين والرقابة ، وقال انه وضعت بطريق الخطأ فأر اختبار الحصين (الذي كان قد أكل الذرة الحلوة) في قفص من الفئران التحكم المقبل نظرا لاختبار 8. أكلت في غضون 14 ثانية ، لسيطرة فقط وليس لديها استتار من 300 ثانية. ولذلك ينبغي توخي الحرص الشديد لمنع انتقال الروائح الاجتماعية مثل الغذاء أثناء اختبار hyponeophagia.

إذا كان اختبار hyponeophagia الأول لا يؤدي إلى نتيجة واضحة لا لبس فيها ، يمكن إجراء مزيد من الفحوص المتعددة. الأرقام 1-4 أمثلة لتوضيح أجهزة مختلفة. يقتصر فقط على عدد من حالات الاختبار التي يمكن أن تضعها في مخيلة المجرب. ويتم تحليل النتائج وفقا لاتجاهين ANOVA التدابير المتكررة. منذ hyponophagia البيانات عموما متغيرة جدا ، وليس وفقا لتوزيع جاوس وانحراف كثير من الأحيان ، مع إعطاء بعض الحيوانات الإختفاء طويلة جدا ، ينبغي أولا أن تحول ؛ والجذر التربيعي أو التحول سجل مفيد بشكل خاص للمقطوعة في الإختفاء يعد المدقع.

2. الجهاز :

وتعرض الأرقام 1-4 كأمثلة على اختبار hyponeophagia مجموعة عمليات. تركيبات معينة من المواد الغذائية والبيئة الرواية ليست حرجة ، على الرغم من أن الغذاء هو موضح في الشكل 1 جيدا ومن الواضح الأنسب لتحتوي على سوائل ، وإن كان يمكن أيضا niblet من الذرة الحلوة وضعها فيه.

عموما ، انها فكرة جيدة ان يكون معظم الكلمة للجهاز مغطاة الطعام. ليس فقط الحيوانات تظهر للعثور على هذا السطح غير عادية مكره ، كما يلغي هذا الأسلوب يفند بسبب التنقيب قبل العثور على الغذاء. وبالتالي قد دواء مهدئ تظهر anxiogenic لأنه زاد من الكمون لإيجاد وتناول الطعام لأنها تنقل من الاكتئاب ، وليس لأنه كان anxiogenic. على سبيل المثال ، نصح منشور واحد يضع الطعام في مركز ل2 حقل مفتوح. ليس فقط هذه النتيجة في استتار التغذية التي يجري مرتبك استكشافية الوقت ، كما انه يقدم وجها إضافيا ، والقلق والنفور من أي حقل منطقة مركزية فتح ، وهو مقياس تقليدي للقلق حقل بوساطة المفتوحة ، التي كانت ذات الصلة لتفادي خطر الافتراس في الموائل الطبيعية 14. ومع ذلك ، في بعض الحالات قد تكون هذه فعلا ميزة المرجوة من التجربة. وثمة عيب آخر من التجربة المذكورة في (2) أن الطعم كان معيار المختبر تشاو في وسط الميدان مفتوحا. هذا يحتوي على عيوب مزدوجة أنه ليس رواية ، وأيضا ليست مستساغة للغاية ، على عكس المواد الغذائية مثل الذرة الحلوة أو الحليب المكثف المحلى. وقد وجدنا دائما أن استخدام الطعوم من استساغة المدقع ليس فقط يزيد من الصراع حول ما اذا كان تناول الطعام أو تجنب الرواية ، ولكن أيضا من الحيوانات لا تحتاج إلى أن تكون المواد الغذائية بشكل مفرط المحرومين قبل الاختبار ، والحرمان من الضروري فقط خفيفة ، لذلك هذا الجانب من البروتوكولات المعروضة هنا يعبر عن "تنقيح" جانب من جوانب 3Rs من راسيل وبورتش 20.

2.1 الداخلي :

التموينية والغذائية من الفئران بين عشية وضحاها. إزالة جميع المواد الغذائية من النطاط قفص المساء قبل إجراء الاختبار ثم إعطاء 1 غرام / الماوس من النظام الغذائي العادي ، وهو ما يقرب من ثلث ما كانوا يأكلون بشكل طبيعي. إذا كانت جماعة مقرها تأكد من أن قطعة صغيرة بحيث أن كل الفئران يمكن أن تأكل بحصص متساوية. اختبار لهمفي صباح اليوم التالي واستبدالها طعامهم حالما يتم الانتهاء من الاختبار.

إعداد اختبار hyponeophagia اختيار الجهاز ، وأيضا صف من الأقفاص الصغيرة التي توضع الفئران من المجموعة قفص المنزل بشكل فردي قبل وأثناء الاختبار. (هذا تتجنب زيادة القلق لدى الفئران المتبقية تركت في قفص المجموعة ، الذي يمكن أن يحدث إذا قمت بإزالة تدريجيا من مجموعة الفئران ، وأيضا انتقال الاجتماعية الأفضليات الغذائية ، كما تساعد أيضا في اختبار التوحيد (بين الجماعة وإيواء الحيوانات منفردة) ويضمن أن الحيوانات هي التنبيه على النحو الأمثل.

وضع الماوس في جهاز الاختبار. قياس الكمون لتناول الطعام. ويعرف هذا النحو الأكل / الشرب بشكل مستمر لمدة 2-3 ثانية. في كثير من الأحيان فإن الفئران شم أو لعق الطعام لفترة وجيزة في البداية ، ولكن في وقت لاحق فقط بداية لتناول الطعام بشكل مستمر دون كبت.

ويمكن أيضا تدابير أخرى يمكن اتخاذها. أنفق وقت تناول الطعام خلال فترة محددة ، على سبيل المثال 2 دقيقة بعد الرضاعة يبدأ أولا ، وربما أيضا على كمية من المواد الغذائية المستهلكة خلال هذه الفترة ، كما يمكن قياسها. آفات الدماغ تؤثر هذه التدابير في بعض الأحيان تفاضليا 4.

2.2 التفاصيل المحددة لتشغيل اختبار hyponeophagia مع الجهاز هو مبين في الشكل 1 :

إبريق من البلاستيك الشفاف (تقريبا حجم 1.5 لتر ، و 15 سم قطر مع جاحظ صنبور أخرى 2 سم) هو جهاز الاختبار. المحلاة استخدام الحليب المجفف كامل الدسم (ماركة نستلة قرنفل ممتاز) 50:50 المخفف بالماء (لتسهيل التعامل مع الامر) ، والمواد الغذائية الرواية. لاحتواء الماوس على القاعدة وتسهيل التحقيق في الحليب ، ووضع إبريق رأسا على عقب مع تشكيل صنبور a الكوة الصغيرة على الطعام جيدا. هذا وتركز انتباه الماوس إلى البئر والحليب ، والتقليل بذلك من آثار العلاجات التي قد تؤثر على الإدراك ، أو التوجه إلى ومصدر الغذاء.

يتم وضع الماوس التي تواجه بعيدا عن البئر ، وخفضت بلطف إبريق في الموقف ، مع الحرص على عدم اعتراض ذيل الفأر. يؤخذ من الكمون وضعها في الجهاز لبدء بشكل صحيح الشرب. الشمة في الحليب لا تعول ، على الأقل من ثانيتين الشرب يجب أن تحدث. حساب أي بولي البراز وملاحظة أي التبول (ولكن نلاحظ أن ستتأثر هذه التدابير في الوقت في الجهاز). الوقت هو قطع 2 دقيقة. إذا لم ماوس ثملا في ذلك الوقت ، إزالته من جهاز آخر واختبار الفئران واحد أو اثنين ، ثم إعادة اختبار واحد التي فشلت في شرب حوالي 3 دقائق في وقت لاحق. هذا الوقت هو الأمثل لربما لتقليل مستويات القلق مع المحافظة على حالة من التعود على الجهاز. لا يمكن أن تستمر هذه الدورة للتجارب بقية - إعادة اختبار للراحة ، إعادة اختبار حتى الفأر يأكل أو تم تنفيذ عدد مجموعة من المحاكمات. وينبغي أن يكون الحد الأقصى من 3 نتيجة محاكمات في معظم الفئران الشرب دون إجراء تجربة طويلة جدا. المعلمة الاختبار هو الكمون (التراكمي) للشرب.

كما في غيرها من التجارب حيث الرائحة يمكن أن تلعب دورا هاما ، يجب وضع غير التجريبية الفئران في الجهاز قبل بدء الاختبار. اتباع بروتوكول تنظيف موحدة بين جميع الفئران. إزالة البول / البراز ، للقضاء على الطعام جيدا وقاعدة من البلاستيك مع الجافة رطبة تليها القماش / الأنسجة. الملء الطعام جيدا مع الحليب (حوالي 0.2 لتر ، على حافة البئر).

الشكل 1
الشكل 1. إبريق من البلاستيك للاستخدام المنزلي تحويل كوحدة اختبار hyponeophagia. يمكن وضع الحليب المكثف المحلى في الطعام جيدا صغيرة تقع داخل صنبور ، الذي يوجه اهتمام ملائم للفأرة على التوالي له. الوزن تؤدي لصقها على قاعدة مقلوبة من إبريق يساعد على استقرار ضد أي حركة للفأرة على الجدران.

الشكل 2
الشكل 2. المراقبة وغرفة تحتوي على اثنين الأبيض (المثيرة للقلق) إدراج بيضاء لاختبار hyponeophagia. ويمكن استخدام الذرة الحلوة والغذاء الرواية.

الشكل 3
الشكل 3. hyponeophagia اختبار وحدة أخرى. الطعام الرواية مزيج قرد علاج.

الشكل 4
الشكل 4. اختبار وحدة أخرى hyponeophagia. المواد الغذائية المقدمة من المكسرات المفرومة مختلطة.

3. تشغيل عدة تجارب hyponophagia :

الاختبار قد hyponeophagia الأولى لم يقدم نتيجة لا لبس فيها. هذا يحدث في كثير من الأحيان ، وكثيرا ما يرجع إلى القيم (مراقبة) خط الأساس يجري عالية جدا أو منخفضة ، مما يؤدي إلى آثار سقف أو أرضية. ووجهت آثار الكلمة عند اختبار الفئران lesioned الحصين (10) ؛ يبدو أن القيمة مراقبة أن تكون مرتفعة بما فيه الكفاية لobservخفضت ه hyponeophagia.

يمكن أن يكون من الصعب الحكم على aversiveness المطلوبة للحالة اختبار. إذا كان قد تم اختباره على الفئران عدة مرات بالفعل (وليس بالضرورة على المهام ذات الصلة القلق) وسوف يكون مستواها أقل من الانفعالية إذا كانوا غير متوفر لاختبار لقد السلوكية ، وسوف تكون هناك حاجة إلى اختبار أكثر anxiogenic. وغالبا ما تكون هذه المقدمة من بيئة اختبار مرتفعة (كما في الشكل 4). ويمكن إضافة مكره الضجيج إلى حالة اختبار ، على سبيل المثال اذاعة اللعب على حجم بصوت عال أو مولد الضوضاء البيضاء. سيكون أكثر إشراقا الإضاءة أيضا زيادة aversiveness اختبار البيئة.

لذا ، إذا كانت النتيجة الأولى هي hyponeophagia يست كبيرة ، حاول العديد من الحالات الأكثر اختبار وتنفيذ التدابير ANOVA المتكررة. هذا هو تصميم قوي جدا التجريبية.

4. النتائج المتوقعة :

آفات الحصين تنتج انخفاضا قويا في hyponeophagia في الفئران (10) وعمل غير منشورة الأخيرة أظهرت أن هذا هو ، كما هو الحال في الفئران 1 ، ويرجع ذلك إلى المنطقة البطنية من الحصين. وأظهرت الفئران التي تفتقر إلى الوحيدات قناة KATP Kir6.2 hyponeophagia زيادة في اختبار واحد ولكن أقل في آخر 9 ، نتيجة الخلط ولكن واحدة والذي يعمل على التأكيد على أن الاختلاف في بيئة اختبار يمكن أن يكون لها تأثير ملحوظ على النتيجة ، ويشير كذلك إلى فائدة لإجراء اختبارات متعددة. وكانت الفئران 129S2/SvHsd أكثر من hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. في الواقع ، أظهرت المقارنة بين العديد من السلالات الفطرية الماوس ملحوظ الخلافات بين سلالة 21.

Discussion

الأرقام الكمون في اختبار hyponeophagia وعادة ما تكون شديدة التباين. وصف تقنية هنا ، فرض الفترة الزمنية المحددة لهذا الحيوان لتناول الطعام ، ثم إعادة الاختبار في وقت لاحق اذا لم يأكل ، ويعمل على التقليل من مخاطر فائقة طويلة الإختفاء ويحفظ في الوقت مجرب.

ميزة واحدة من أكثر التجارب hyponeophagia القلق مثل المتاهة زائد ، هو أنه إذا كانت نتائج الاختبار الاول فشل في تحقيق دلالة إحصائية ، يمكن تشغيل اختبار آخر باستخدام اختبار رواية مختلفة البيئة والغذاء ، وكذلك نوع من القلق الذي يجري قياس ويبدو أن تكون هي نفسها لم تتغير ونوعيا من قبل تشغيل الاختبارات في وقت سابق ، على خلاف في دور ال 16 زائد المتاهة. ويمكن بعد ذلك اتخاذ تدابير المتكررة ANOVA يمكن استخدامها لتقييم سلسلة الاختبار.

ومن المعروف الآن أن تتم تغطية مختلف جوانب عدة من الانفعالية من قبل "القلق" مظلة مصطلح 11،15،18. وسوف تظهر التغيرات في الفئران لا تظهر بالضرورة hyponeophagia التغييرات في حقل مفتوح ، رفع زائد المتاهة أو اختبارات مربع ضوء الظلام. لذا يجب أن أنظمة الدماغ الكامنة وراء الأداء في هذه الاختبارات تكون على الاقل مختلفة بعض الشيء. على سبيل المثال ، قد المهاد وamygdale المشاركة بشكل جيد في hyponeophagia كما أنهم قلقون مع (من بين أمور أخرى) تنظيم تناول الطعام.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

ويلكوم ترست لتوفير التمويل فتح الوصول إلى جامعة أكسفورد. روبرت ديكون هو عضو في مجموعة OXION أكسفورد ، الذي تموله منحة ويلكوم ترست WT084655MA.

References

  1. Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P., McHugh, S. B., Deacon, R. M. J., Yee, B. K., Bast, T., Zhang, W. -N., Pothuizen, H. H. J., Feldon, J. Regional dissociations within the hippocampus - memory and anxiety. Neurosci. Biobehav. Rev. 28, 273-283 (2004).
  2. Britton, D. R., Thatcher-Britton, R. A sensitive open-field measure of anxiolytic drug activity. Pharmacol. Biochem. Behav. 15, 577-582 (1981).
  3. Bunsey, M., Eichenbaum, H. Selective damage to the hippocampal region blocks long-term retention of a natural and non-spatial stimulus-stimulus association. Hippocampus. 5, 546-556 (1995).
  4. Burns-Lindsay, H., Annett, L., Kelley, A. E., Everitt, B. J., Robbins, T. W. Effects of lesions to amygdala, ventral subiculum, medial prefrontal cortex, and nucleus accumbens on the reaction to novelty: Implication for limbic-striatal interactions. Behav. Neurosci. 110, 60-73 (1996).
  5. Burton, S., Murphy, D., Qureshi, U., Sutton, P., O'Keefe, J. Combined Lesions of Hippocampus and Subiculum Do Not Produce Deficits in a Nonspatial Social Olfactory. J. Neurosci. 20, 5468-5475 (2000).
  6. Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice. Behav. Brain Res. 124, 33-46 (2001).
  7. Countryman, R. A., Gold, P. E. Rapid forgetting of social transmission of food preferences in aged rats: Relationship to hippocampal CREB activation. Learn. Mem. 14, 350-358 (2007).
  8. Deacon, R. M. J., Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P. Anxiolytic effects of cytotoxic hippocampal lesions in rats. Behavioral Neuroscience. 116, 494-497 (2002).
  9. Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2. Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).
  10. Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice. Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).
  11. File, S. E. Behavioural detection of anxiolytic action. Experimental approaches to anxiety and depression. Elliot, J. M., Heal, D. J., Marsden, C. A. Wiley. London. 25-44 (1992).
  12. Galef, B. G., Mason, J. R., Preti, G., Bean, N. J. Carbon disulfide: A semiochemical mediating socially-induced diet choice in rats. Physiol. Behav. 42, 119-124 (1988).
  13. Glickman, S. E., Morrison, B. J. Some behavioral and neural correlates of predation susceptibility in mice. Commun. Behav. Biol. A. 4, 261-267 (1969).
  14. Gray, J. A., McNaughton, N., N, The neuropsychology of anxiety. 2nd ed, Oxford University Press. Oxford, England. (2000).
  15. Holmes, A., Rodgers, R. J. Prior exposure to the elevated plus-maze sensitizes mice to the acute behavioral effects of fluoxetine and phenelzine. Eur. J. Pharmacol. 459, 221-230 (2003).
  16. Mason, J. R., Bean, N. J., Bennett, G., Galef, B. G. Attractiveness of carbon disulfide to wild Norway rats. Proceedings of the Thirteenth Vertebrate Pest Conference. 94-97 (1988).
  17. Ramos, A., Berton, O., Mormede, P., Chauloff, F., F, A multipletest study of anxiety-related behaviours in six inbred rat strains. Behav. Brain Res. 85, 57-69 (1997).
  18. Ross, R. S., McGaughy, J., Eichenbaum, H. Acetylcholine in the orbitofrontal cortex is necessary for the acquisition of a socially transmitted food preference. Learn. Mem.. 12, 302-306 (2005).
  19. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The principles of humane experimental technique. Methuen. London. (1959).
  20. Trullas, R., Skolnick, P. Differences in fear motivated behaviors among inbred mouse strains. Psychopharmacology. 111, 323-331 (1993).
  21. Wrenn, C. C. Social Transmission of Food Preference in Mice. Curr. Prot. Neurosci. (2004).
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).More

Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter