Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Hyponeophagia: Мера Тревога в мышь

Published: May 17, 2011 doi: 10.3791/2613

Summary

Мыши и крысы, из-за их врожденной осторожности, первоначально медленно много новых пищевых продуктов, особенно в романе место. Это hyponeophagia легко измеряется в лаборатории, даже несмотря на лабораторных животных гораздо менее тревожными, чем их дикие коллегами

Abstract

До сегодняшнего дня, когда быстродействующий и мощный родентициды, таких как альфа-хлоралозовым еще не были в использовании, работы сельскохозяйственных вредителей, часто препятствует явление, известное как "приманку застенчивости". Мыши и крысы не могут рвота, из-за герметичности сердечной сфинктера желудка, таким образом, чтобы преодолеть проблему потенциальной токсичности продуктов, которые они развивались стратегии первого глотания только очень небольшое количество новых веществ. Количествах попадает затем постепенно увеличиваться, пока животное определить, является ли вещество является безопасным и питательным. Так старая крыса-ловушки сначала положить приемлемым вещества, такие как овсянка, которая должна была стать средством токсина в зараженной зоны. Только тогда, когда большие объемы были легко потребляются ли они затем добавить яд, в количествах, рассчитанных не влияет на вкус автомобиля. Отравленные приманки, которые животные теперь с готовностью едят в больших количествах, затем быстро выполнять свои функции.

Приманка застенчивость в настоящее время используется в лаборатории поведенческой способ измерения тревожности. Очень вкусный, но роман вещества, такие как кукуруза, орехи или сгущенное молоко с сахаром, предлагается мыши (или крысы) в новой ситуации, такие, как новые клетки. Задержки потреблять определенное количество новых пищевых затем измеряется.

Роберт MJ диакон может составить не robert.deacon @ psy.ox.ac.uk

Protocol

1. Введение:

Мыши и крысы первоначально будет потреблять лишь небольшое количество новой пищи. Считается, что это будет, потому что они подлежат отравления из-за их неспособности к рвоте.

Единственным исключением из этого является, если они ранее столкнулись с другой животное, которое едят, что пища, и если они пахнут его на выдыхаемый воздух от своих сверстников, они будут классифицировать его как безопасный 13. Это потому, что запах пищи в паре с сероуглерода на дыхание 12 других крыс. В самом деле, сероуглерода само по себе повышает потребление продуктов питания в обеих мышей и крыс 17. Явление называется "социальная передача пищевых предпочтений" и может быть использован в качестве простого обонятельных парадигмы обучения 22. Об этом сообщает чувствительны к поражениях гиппокампа 3, но в других исследованиях 5 не удалось повторить этот вывод. Было высказано предположение, что неокортекса холинергической системы, в частности орбитофронтальной компонент 19, может быть важнее, чем гиппокампа холинергической системы социальной передачи. Социальные передачи было даже показано отслеживать нарушения памяти у пожилых крыс, вероятно, опосредовано снижением CREB (цАМФ-ответ элемент-связывающий белок) передачи в гиппокампе в возрасте 7.

Легкость, с которой грызуны приобретают пищи предпочтение социальным передач имеет сильные последствия для тестирования hyponeophagia. Когда автор выполнял тест hyponeophagia с гиппокампа пораженном и контрольных крыс, он случайно, что бы протестировать гиппокампа крысы (которые ели сладкую кукурузу) в клетке крысы следующий контроль из-за тестирования 8. Он ел в течение 14 с, только контролировать, чтобы не иметь задержку 300 сек Большое внимание должно быть принято, чтобы предотвратить такие социальные передачи запахов пищи во время тестирования hyponeophagia.

Если первый тест hyponeophagia не приводит к ясной, однозначной результате нескольких дальнейшие испытания могут быть выполнены. Цифры 1-4 иллюстрируют примеры различных аппаратов. Количество тестовых ситуаций, которые могут быть разработаны ограничивается только фантазией экспериментатора. Результаты анализируются с помощью двусторонней повторяется ANOVA мер. С hyponophagia данных, как правило, очень изменчива, не соответствующие распределения Гаусса и часто искажены, с некоторыми животными, дает очень длинные задержки, оно должно быть сначала преобразовано; квадратный корень или войти преобразований особенно полезно для усечения крайней больше задержки.

2. Аппарат:

Рисунках 1-4 приведены в качестве примеров hyponeophagia тест настроек. Определенными сочетаниями новыми продуктами питания и окружающей среды не являются критическими, хотя пищу хорошо показано на рисунке 1, очевидно, лучше всего подходит для содержащие жидкости, хотя niblet сахарной кукурузы также может быть помещен в нем.

В общем, это хорошая идея, чтобы иметь большинство этаже аппарата покрыта пищи. Мало того, что животные появляются, чтобы найти эту необычную поверхность отвращение, этот метод также устраняет смешивает в связи с разведкой, прежде чем найти пищу. Таким образом седативный препарат может появиться anxiogenic потому что он вырос задержки, чтобы найти и съесть пищу, потому что ее нажатой передвижения, а не потому что это было anxiogenic. Например, одна публикация посоветовал положить еду в центре открыты 2 поля. Мало того, что этот результат в кормлении задержки время путали поисковых время, но и вводит дополнительный аспект тревоги, то есть открытое поле центрального отвращение области, классическая мера открытом поле-опосредованной беспокойство, которое было связано с избежать хищничества риска в естественных мест обитания 14. Однако в некоторых ситуациях это может быть фактически желаемого особенностью эксперимента. Еще один недостаток эксперимента, описанного в 2 было то, что приманка была стандартной лаборатории чау в центре открытого поля. Это двойной недостаток, что это не роман, а также не очень приятный, в отличие от продуктов, таких как кукуруза или сгущенное молоко с сахаром. Мы всегда находили, что использование приманок крайних вкусовых не только увеличивает конфликт по поводу того, чтобы поесть или избежать новыми продуктами питания, но и животные не должны быть чрезмерно пищи лишен перед тестом, и только мягкий лишения необходимо, так что этот аспект протоколов, представленные здесь отражает "Уточнение" аспект 3Rs Рассела и Берч 20.

2.1 Процедура:

Рацион пищи мышей на ночь. Удалите все продукты питания из бункера клетке вечером перед тестированием затем дать 1 г / мышь обычного рациона, что составляет примерно треть того, что они, как правило, есть. Если они размещены группы убедитесь, что небольшие куски так, чтобы все мышей может съесть равных долях. Протестируйте ихСледующим утром и заменить их пищи, как только проверка закончится.

Настройка выбранного аппарата hyponeophagia теста, а также ряд небольших клетках, в которых мышам из клетки домашней группы размещаются индивидуально до и во время тестирования. (Это позволяет избежать увеличения тревогу в остальных мышей остается в клетке группы, которая может произойти, если вы постепенно устранять мышей из группы, а также социальные передачи пищевых предпочтений. Она также оказывает помощь в тестовом стандартизации (между группами и в одиночку размещались животные) и гарантирует, что животные оптимально начеку.

Место мыши в тесте аппарат. Измерьте задержку, чтобы поесть. Это определяется как еда / питье непрерывно в течение 2-3 сек Часто мышей будут нюхать или облизывать пищи кратко сначала, но только потом начинают есть непрерывно без торможения.

Другие меры могут быть приняты. Время, потраченное еды в течение определенного периода, например, через 2 мин после кормления первом запуске, а возможно, и количество потребляемой пищи в течение этого периода, также могут быть измерены. Поражения головного мозга иногда влияют на эти меры дифференциально 4.

2,2 Конкретные детали выполнения теста hyponeophagia с устройства, показанного на рисунке 1:

Полупрозрачный пластиковый кувшин (примерный объем 1,5 л, 15 см в диаметре с носиком выступающие еще 2 см), испытательного оборудования. Использование цельного сгущенного молока с сахаром (Nestle Гвоздика бренд отлично) 50:50 разбавленный водой (для облегчения работы с ней), как роман пищи. Чтобы содержать мыши на базу и облегчить исследование молока, место с ног на голову кувшин с носиком образуя небольшую нишу на пищу хорошо. Это фокусирует внимание мыши на хорошо и молоко, поэтому свести к минимуму последствия лечения, которые могут повлиять на восприятие, или ориентации к источнику пищи.

Мышь помещается в сторону от колодца и кувшин плавно опускается на место, стараясь не поймать за хвост мышь. Задержки с помещением в аппарат, чтобы начать правильно питьевой берется. Обнюхивает молоко не в счет, по крайней мере две секунды питьевой должно произойти. Граф любые фекальные Боли и отметить любые мочеиспускание (но учтите, что эти меры будут зависеть от времени в аппарат). Время отключения составляет 2 мин. Если мышь не пьян к тому времени, выньте его из аппарата и испытание еще одного или двух мышей, а затем повторное тестирование одна, которая не выпивать около 3 мин позже. На этот раз, возможно, оптимальным для беспокойства уровней снижения, сохраняя состояние привыкания к аппарату. Этот тест-отдыха повторите тест-отдых-ретеста цикл может быть продолжен, пока мышь ест или определенное количество испытания были проведены. Максимум 3 исследования должны привести к питьевой большинство мышей без эксперимент слишком долго. Тест параметр (нарастающим итогом) задержки для питья.

Как и в других тестах, где запах может сыграть существенную роль, не подопытные мыши должны быть помещены в аппарат перед началом испытания. Следуйте стандартизированный протокол очистке между всеми мышами. Удалить мочи / кала, протрите пищу хорошо, и пластиковая основа с влажными затем сухой тканью / ткани. Refill пищу хорошо с молоком (около 0,2 мл, до краев ямы).

Рисунок 1
Рисунок 1. Пластиковый внутренний кувшин переоборудованы для использования в качестве модульного тестирования hyponeophagia. Сгущенное молоко могут быть помещены в небольшой пищу хорошо расположен внутри носиком, который удобно направляет внимание мыши прямо к нему. Свинцовый груз приклеены к перевернутой базе кувшин помогает стабилизировать его против любого движения мыши от стен.

Рисунок 2
Рисунок 2. Наблюдение камера с двумя белыми (вызывающими тревогу) белыми вставками для тестирования hyponeophagia. Сахарная кукуруза может быть использована как роман пищи.

Рисунок 3
Рисунок 3. Другое подразделение hyponeophagia тест. Роман пищу смесь обезьяны лечить.

Рисунок 4
Рисунок 4. Другое подразделение hyponeophagia тест. Пища представлена ​​смешивают измельченные орехи.

3. Запуск нескольких экспериментов hyponophagia:

Первый тест hyponeophagia не может обеспечить однозначный результат. Это часто происходит, и часто из-за базовый (контроль) значения слишком высоким или низким, в результате чего потолок или пол эффектов. Этаж эффектов, возникающих при тестировании гиппокампа мышей пораженном 10; оказалось, что контрольное значение должно было быть достаточно высокой, чтобы наблюдаемыеэлектронной снижается hyponeophagia.

Это может быть трудно судить требуется неприятие тестовой ситуации. Если мышей были протестированы уже несколько раз (не обязательно на беспокойство задач, связанных с) их эмоциональность уровень будет ниже, чем если бы они наивны, чтобы поведенческие тестирование и более anxiogenic теста потребуется. Это часто может быть обеспечена повышенная тестовой среде (как на рис 4). Отвращение шума могут быть добавлены в тестовой ситуации, например, радио играет в громкий громкость или генератором белого шума. Яркое освещение также приведет к увеличению неприятие тестовой среде.

Так, если первый результат hyponeophagia не имеет существенного значения, попробуйте еще несколько ситуаций тестирования и повторных измерений ANOVA. Это очень мощный эксперимента.

4. Ожидаемые результаты:

Гиппокампа повреждения производят сильное снижение hyponeophagia у мышей 10 и последние неопубликованные работы показал, что это, как у крысы 1, в связи с вентральной области гиппокампа. Мыши, лишенные субъединицы KATP канал Kir6.2 показали повышенную hyponeophagia в одном тесте, но менее в другом 9, запутанной результат, но тот, который служит для акцента, что различия в тестовой среде может иметь заметное влияние на результат, а также указывает на полезность выполнения нескольких тестов. 129S2/SvHsd мышей были более чем hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. Действительно, сравнение нескольких инбредных линий мышей показали заметное между штаммом различия 21.

Discussion

Задержки цифры в тестировании hyponeophagia, как правило, сильно варьирует. Техника, описанная здесь, наложения определенного периода времени для животных, чтобы поесть, а затем повторное тестирование позже, если он не ест, служит для уменьшения риска сверхдальние задержек и экономит время экспериментатор.

Одним из преимуществ hyponeophagia за беспокойство тесты, такие как плюс-лабиринт, в том, что, если результаты первого теста не удается достичь статистической значимости, еще один тест может быть запущен с использованием другой среды тестирования новых и продуктов питания, а тип тревоги измеряется кажется, то же, а не качественно изменить ранее выполнения тестов, в отличие от крестообразного лабиринта 16. Повторные измерения ANOVA затем могут быть использованы для оценки серии испытаний.

В настоящее время известно, что несколько различных аспектов эмоциональности охвачены общим термином "тревога" 11,15,18. Мыши, показывающие изменения в hyponeophagia не обязательно показать изменения в чистом поле, приподнятого крестообразного лабиринта или светло-темного тестов коробки. Так системами мозга, основных показателей на эти тесты должны быть по крайней мере несколько иная. Например, гипоталамус и amygdale вполне может участвовать в hyponeophagia как они занимаются (среди прочего) регулирование приема пищи.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Wellcome Trust за предоставление открытого доступа к финансированию Оксфордского университета. Роберт Диакон является членом Оксфордского OXION группы, финансируемого Wellcome Trust грант WT084655MA.

References

  1. Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P., McHugh, S. B., Deacon, R. M. J., Yee, B. K., Bast, T., Zhang, W. -N., Pothuizen, H. H. J., Feldon, J. Regional dissociations within the hippocampus - memory and anxiety. Neurosci. Biobehav. Rev. 28, 273-283 (2004).
  2. Britton, D. R., Thatcher-Britton, R. A sensitive open-field measure of anxiolytic drug activity. Pharmacol. Biochem. Behav. 15, 577-582 (1981).
  3. Bunsey, M., Eichenbaum, H. Selective damage to the hippocampal region blocks long-term retention of a natural and non-spatial stimulus-stimulus association. Hippocampus. 5, 546-556 (1995).
  4. Burns-Lindsay, H., Annett, L., Kelley, A. E., Everitt, B. J., Robbins, T. W. Effects of lesions to amygdala, ventral subiculum, medial prefrontal cortex, and nucleus accumbens on the reaction to novelty: Implication for limbic-striatal interactions. Behav. Neurosci. 110, 60-73 (1996).
  5. Burton, S., Murphy, D., Qureshi, U., Sutton, P., O'Keefe, J. Combined Lesions of Hippocampus and Subiculum Do Not Produce Deficits in a Nonspatial Social Olfactory. J. Neurosci. 20, 5468-5475 (2000).
  6. Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice. Behav. Brain Res. 124, 33-46 (2001).
  7. Countryman, R. A., Gold, P. E. Rapid forgetting of social transmission of food preferences in aged rats: Relationship to hippocampal CREB activation. Learn. Mem. 14, 350-358 (2007).
  8. Deacon, R. M. J., Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P. Anxiolytic effects of cytotoxic hippocampal lesions in rats. Behavioral Neuroscience. 116, 494-497 (2002).
  9. Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2. Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).
  10. Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice. Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).
  11. File, S. E. Behavioural detection of anxiolytic action. Experimental approaches to anxiety and depression. Elliot, J. M., Heal, D. J., Marsden, C. A. Wiley. London. 25-44 (1992).
  12. Galef, B. G., Mason, J. R., Preti, G., Bean, N. J. Carbon disulfide: A semiochemical mediating socially-induced diet choice in rats. Physiol. Behav. 42, 119-124 (1988).
  13. Glickman, S. E., Morrison, B. J. Some behavioral and neural correlates of predation susceptibility in mice. Commun. Behav. Biol. A. 4, 261-267 (1969).
  14. Gray, J. A., McNaughton, N., N, The neuropsychology of anxiety. 2nd ed, Oxford University Press. Oxford, England. (2000).
  15. Holmes, A., Rodgers, R. J. Prior exposure to the elevated plus-maze sensitizes mice to the acute behavioral effects of fluoxetine and phenelzine. Eur. J. Pharmacol. 459, 221-230 (2003).
  16. Mason, J. R., Bean, N. J., Bennett, G., Galef, B. G. Attractiveness of carbon disulfide to wild Norway rats. Proceedings of the Thirteenth Vertebrate Pest Conference. 94-97 (1988).
  17. Ramos, A., Berton, O., Mormede, P., Chauloff, F., F, A multipletest study of anxiety-related behaviours in six inbred rat strains. Behav. Brain Res. 85, 57-69 (1997).
  18. Ross, R. S., McGaughy, J., Eichenbaum, H. Acetylcholine in the orbitofrontal cortex is necessary for the acquisition of a socially transmitted food preference. Learn. Mem.. 12, 302-306 (2005).
  19. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The principles of humane experimental technique. Methuen. London. (1959).
  20. Trullas, R., Skolnick, P. Differences in fear motivated behaviors among inbred mouse strains. Psychopharmacology. 111, 323-331 (1993).
  21. Wrenn, C. C. Social Transmission of Food Preference in Mice. Curr. Prot. Neurosci. (2004).
Hyponeophagia: Мера Тревога в мышь
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).More

Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter