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Neuroscience

Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato

doi: 10.3791/2613 Published: May 17, 2011

Summary

Camundongos e ratos, devido à sua prudência inata, são inicialmente lento em consumir um alimento novo, particularmente em um lugar novo. Este hyponeophagia podem ser facilmente medidos em laboratório, apesar de animais de laboratório são muito menos ansiosos do que suas contrapartes selvagens

Abstract

Antes do dia de hoje, quando raticidas de ação rápida e potente, como alfa-Cloralose ainda não estavam em uso, o trabalho dos controladores de pragas foi muitas vezes dificultada por um fenômeno conhecido como "timidez isca". Camundongos e ratos não pode vomitar, devido ao aperto do esfíncter cardíaco do estômago, de modo a superar o problema da toxicidade de alimentos potencial que eles têm desenvolvido uma estratégia de primeira ingerir apenas quantidades muito pequenas de substâncias novas. As quantidades ingeridas, em seguida, aumentar gradualmente até que o animal tenha determinado se a substância é segura e nutritiva. Então o velho caçadores de ratos em primeiro lugar colocar uma substância palatável como aveia, que era para ser o veículo para a toxina, na área infestada. Somente quando grandes quantidades estavam sendo consumidas prontamente que eles em seguida, adicione o veneno, em quantidades calculadas para não afetar o sabor do veículo. A isca envenenada, que os animais foram agora prontamente comer em grandes quantidades, então rapidamente executar sua função.

Timidez isca é usado agora no laboratório de comportamento como uma forma de medir a ansiedade. A substância altamente palatável, mas novela, como o milho doce de frutas ou leite condensado, é oferecido a todos os ratos (ou animais) em uma situação nova, como uma nova gaiola. A latência de consumir uma quantidade definida de o novo alimento é, então, medido.

Robert MJ Deacon pode chegar a robert.deacon @ psy.ox.ac.uk

Protocol

1. Introdução:

Camundongos e ratos, inicialmente consumir apenas pequenas quantidades de um novo alimento. Isto é pensado para ser, porque são susceptíveis de envenenamento devido à sua incapacidade de vomitar.

A única exceção a isso é se eles já se deparou com outro animal que tenha comido esse alimento; se sentir o cheiro no ar exalado de seus pares, eles vão classificá-lo como 13 seguro. Isto é porque o odor dos alimentos está emparelhado com dissulfeto de carbono em 12 o rato do outro fôlego. De fato, dissulfeto de carbono por si só aumenta o consumo de alimentos em ambos os ratos e camundongos 17. O fenômeno é chamado de "transmissão social das preferências alimentares" e pode ser usado como um paradigma de aprendizagem simples olfativo 22. Isto foi relatado para ser sensíveis às lesões do hipocampo 3, mas outros estudos não conseguiram replicar 5 este achado. Tem sido sugerido que o sistema colinérgico neocortical, particularmente a componente orbitofrontal 19 de maio ser mais importante do que o sistema colinérgico do hipocampo para a transmissão social. Transmissão social foi mostrado mesmo para monitorar perda de memória em ratos idosos, provavelmente mediada por CREB diminuiu (cAMP-resposta proteína elemento de ligação) de transmissão no hipocampo de 7.

A facilidade com que os roedores adquirir uma preferência alimentar por transmissão social tem fortes implicações para os testes hyponeophagia. Quando o autor estava realizando um teste com hyponeophagia hipocampo ratos lesados ​​e controle, ele acidentalmente colocou um rato testado hipocampo (que tinha comido o milho doce) na gaiola do rato próximo controle devido para o teste 8. Ele comeu dentro de 14 s, não o controle só para ter uma latência de 300 s. Grande cuidado deve ser tomado para evitar a transmissão social, de odores de alimentos durante os testes hyponeophagia.

Se o teste hyponeophagia primeira não resultar em um resultado claro e inequívoco, vários outros testes podem ser realizados. Figuras 1-4 ilustram exemplos de aparelhos diferentes. O número de situações de teste que podem ser criados é limitado apenas pela imaginação do experimentador. Resultados são analisados ​​por ANOVA medidas repetidas. Desde hyponophagia dados geralmente é muito variável, não conformes a distribuição de Gauss e, muitas vezes distorcida, com alguns animais dando latências muito tempo, ele deve primeiro ser transformado; uma raiz quadrada ou transformação log é particularmente útil para truncar as latências mais extremas.

2. Aparelhos:

Figuras 1-4 são apresentados como exemplos de hyponeophagia teste set-ups. As combinações específicas de novos alimentos e meio ambiente não são críticos, embora a comida bem mostrado na Figura 1 é, obviamente, mais adequada para conter líquidos, embora um niblet de milho doce também pode ser colocado nela.

Em geral, é uma boa idéia ter a maior parte do chão do aparelho coberto com a comida. Não só os animais parecem encontrar esta superfície incomum aversivo, esta técnica também elimina confunde devido à exploração antes de encontrar o alimento. Assim, uma droga sedativa podem aparecer ansiogênicas porque aumentou a latência para encontrar e comer a comida porque deprimido locomoção, não porque era ansiogênicas. Por exemplo, uma publicação aconselhou colocar o alimento no centro de um campo aberto 2. Não só este resultado na latência de alimentação sendo confundidos por exploratória tempo, ela também apresenta uma faceta adicional de ansiedade, abra a aversão ao campo ou seja, área central, uma medida clássica de ansiedade campo mediada aberto, o que tem sido relacionado para evitar risco de predação em habitats naturais 14. No entanto, em algumas situações isso pode realmente ser uma característica desejada do experimento. Outra desvantagem do experimento descrito no 2 foi que a isca era padrão laboratório comida no centro do campo aberto. Isto tem a desvantagem dupla que não é romance, e também não é extremamente palatável, ao contrário de alimentos como o milho doce ou leite condensado. Temos sempre achei que o uso de iscas de palatabilidade extrema não só aumenta o conflito sobre se a comer ou evitar o alimento, mas também os animais não precisam ser excessivamente privados de alimentos antes do teste, apenas a privação leve é ​​necessário, para esse aspecto dos protocolos aqui apresentados reflete o "Requinte" aspecto dos 3Rs de Russell e Burch 20.

2,1 procedimento:

Ração dos ratos durante a noite. Remova toda a comida da tremonha gaiola à noite antes de testar em seguida, dar 1 g / mouse da dieta comum, que é aproximadamente um terço do que normalmente comem. Se eles estão alojados em grupo se certificar de que as peças são pequenas, para que todos os ratos podem comer partes iguais. Testá-losna manhã seguinte e substituir seus alimentos, assim como o teste está terminado.

Configurar o aparelho de teste escolhido hyponeophagia, também uma fileira de pequenas gaiolas em que os ratos da gaiola grupo são colocados individualmente, antes e durante o teste. (Isso evita o aumento da ansiedade em camundongos remanescente na gaiola grupo, que pode ocorrer se você eliminar progressivamente os ratos a partir de um grupo, também transmissão social das preferências alimentares. Também auxilia na normalização do teste (entre o grupo e os animais alojados individualmente) e garante que os animais são perfeitamente alerta.

Coloque o mouse em um aparelho de teste. Medir a latência para comer. Esta é definida como comer / beber continuamente por 2-3 s. Muitas vezes, os ratos vão cheirar ou lamber o alimento brevemente no início, mas só depois começar a comer continuamente, sem inibição.

Outras medidas também podem ser tomadas. O tempo gasto comer durante um determinado período, por exemplo, 2 min após a alimentação começa a primeira, e possivelmente também a quantidade de alimentos consumidos durante este período, também pode ser medido. Lesões cerebrais às vezes afetar estas medidas diferencialmente 4.

2,2 Os detalhes específicos de execução de um teste hyponeophagia com o aparelho mostrado na Figura 1:

Um jarro de plástico translúcido (aproximado do volume de 1,5 l, 15 cm de diâmetro com um bico protuberante mais 2 cm) é o aparelho de teste. Use creme cheio de leite condensado (Nestlé marca Carnation é excelente) 50:50 diluído com água (para facilitar a manuseá-lo) como o novo alimento. Para conter o mouse sobre a base e facilitar a investigação do leite, coloque o jarro de cabeça para baixo com o bico formando uma pequena alcova sobre o alimento bem. Este centra a atenção do mouse sobre o bem eo leite, assim minimizar os efeitos de tratamentos que podem afetar a percepção de, ou orientação para a fonte de alimento.

O mouse é colocado de costas para o bem e o jarro é suavemente abaixado em posição, tomando o cuidado para não prender o rabo do rato. A latência de ser colocado no aparelho para iniciar corretamente beber é tomada. Cheira a leite não contam, pelo menos dois segundos de beber deve ocorrer. Contar qualquer boli fecal e observe qualquer micção (mas note que estas medidas serão influenciadas pelo tempo no aparelho). O tempo de corte é de 2 min. Se um rato não tem bebido até então, retire-o do aparelho e testar mais um ou dois camundongos, teste novamente aquele que não beber cerca de 3 min mais tarde. Este tempo é, provavelmente, ideal para os níveis de ansiedade para diminuir ainda preservar um estado de habituação ao aparelho. Este ciclo de teste-reteste de descanso descanso-reteste pode ser continuado até que o rato come ou um determinado número de ensaios foram realizados. Um máximo de três ensaios deve resultar em mais ratos beber sem fazer a experiência muito longa. O parâmetro de teste é a latência (cumulativos) para beber.

Como em outros testes onde o odor poderia desempenhar um papel significativo, não-experimental ratos deve ser colocado no aparelho antes do início do teste. Seguir um protocolo de limpeza padronizada entre todos os ratos. Remover urina / fezes, limpe bem os alimentos e da base de plástico com úmido seguido de pano seco / tecido. Recarga de alimentos do bem com o leite (cerca de 0,2 ml, até a borda do poço).

Figura 1
Figura 1. Um jarro de plástico doméstico convertidos para uso como uma unidade de teste hyponeophagia. Leite condensado pode ser colocado na comida pequeno bem localizado no interior do bico, que, convenientemente, direciona a atenção do mouse diretamente para ele. O peso de chumbo colado à base invertida do jarro ajuda a estabilizá-lo contra qualquer movimento do mouse contra as paredes.

Figura 2
Figura 2. Uma câmara de observação contendo duas brancas (que provoca ansiedade) insere branco para testar hyponeophagia. Milho doce pode ser usado como alimento.

Figura 3
Figura 3. Outra unidade de teste hyponeophagia. O alimento é misturar tratar macaco.

Figura 4
Figura 4. Outra unidade de teste hyponeophagia. A comida apresentada é misturado nozes picadas.

3. Execução de experiências múltiplas hyponophagia:

O teste hyponeophagia primeira não pode fornecer um resultado inequívoco. Isto acontece muitas vezes e é frequentemente devido à linha de base (controle) os valores serem muito altos ou baixos, resultando em efeitos de teto ou no chão. Efeitos de fundo foram encontrados quando testes hipocampo ratos lesados ​​10; parecia que o valor de controle tiveram que ser suficientemente alta para observávele redução hyponeophagia.

Pode ser difícil para julgar a aversão exigido da situação de teste. Se os ratos foram testados várias vezes já (não necessariamente sobre a ansiedade relacionada com tarefas) o seu nível de emotividade será menor do que se eles são ingênuos para comportamentais testes e um teste mais ansiogênicas será necessária. Isso muitas vezes pode ser prestada por um ambiente de teste elevados (como na Figura 4). Ruído aversivo poderia ser acrescentado à situação de teste, por exemplo, um rádio tocando em um volume alto ou um gerador de ruído branco. Iluminação mais brilhante também aumentaria aversão ambiente de teste.

Assim, se o resultado hyponeophagia primeiro não é significativo, tente mais diversas situações de teste e realizar uma ANOVA de medidas repetidas. Este é um projeto muito poderoso experimental.

4. Resultados esperados:

As lesões do hipocampo produzem um forte decréscimo hyponeophagia em camundongos 10 e trabalhos inéditos recente tem mostrado que este é, como em ratos 1, devido à região ventral do hipocampo. Camundongos sem a subunidade do canal KATP Kir6.2 mostraram aumento hyponeophagia em um teste, mas menos em outro 9, um resultado confuso, mas uma que serve para enfatizar que as diferenças no ambiente de teste pode ter um efeito significativo sobre o resultado, e também aponta a utilidade de realizar múltiplos testes. 129S2/SvHsd ratos eram mais do que hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. De fato, uma comparação de várias linhagens de camundongos mostrou puras marcada inter-tensão diferenças 21.

Discussion

Os números da latência nos testes hyponeophagia são tipicamente altamente variável. A técnica descrita aqui, de impor um período de tempo definido para o animal para comer, então novos testes mais tarde, se ele não consegue comer, serve para minimizar o risco de ultra-longa latências e economiza o tempo experimentador.

Uma vantagem de hyponeophagia sobre testes de ansiedade, como o labirinto, é que se os resultados do primeiro teste não atingiu significância estatística, outro teste pode ser executado usando um ambiente de teste diferentes romance e comida, como o tipo de ansiedade que está sendo medido parece ser o mesmo e não mudou qualitativamente pelos testes executados anteriormente, ao contrário do labirinto 16. Medidas repetidas ANOVA pode então ser usada para avaliar a série de testes.

Sabe-se agora que vários aspectos diferentes de emotividade são cobertos pela "ansiedade" guarda-chuva prazo 11,15,18. Camundongos mostrando mudanças na hyponeophagia não necessariamente mostram mudanças em campo aberto, labirinto em cruz elevado ou testes de claro-escuro caixa. Assim, os sistemas cerebrais subjacentes desempenho nos testes deve ser de pelo menos um pouco diferente. Por exemplo, o hipotálamo ea amígdala podem muito bem participar hyponeophagia como eles estão preocupados com (entre outras coisas) a regulação da ingestão de alimentos.

Disclosures

Não há conflitos de interesse declarados.

Acknowledgments

Wellcome Trust para a concessão de financiamento de Acesso Livre na Universidade de Oxford. Robert Deacon é um membro do grupo de Oxford OXION, financiado pelo Wellcome Trust conceder WT084655MA.

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Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato
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Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).More

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