Summary
توجه الدم ضرورية في عدد كبير من الدراسات ، على سبيل المثال لدراسة ملف الدوائية للمجمع. هنا ، ونحن لشرح كيفية سحب الدم من الفئران باستخدام اثنين من تقنيات : سحب الدم من الوريد الصافن أو من خلال ثقب في القلب.
Abstract
سحب الدم من القوارض من الضروري بالنسبة لعدد كبير من كلا في التجارب المختبرية والدراسات المجراة. مواقع عديدة توجه الدم في القوارض : قلب الرجعية المدارية الجيوب الأنفية ، وحبل الوريد ، عرق الفك العلوي ، الوريد الصافن. كل أسلوب له مزاياه وعيوبه ، وعدم الموافقة على بعض أي أكثر في بعض البلدان (مثل الرجعية المدارية تلفت في هولندا). مناقشة أساليب مختلفة للرسم والدم 1-3 المتاحة. هنا ، نقدم اثنين من التقنيات لسحب الدم من الفئران ، مع كل التطبيقات الخاصة.
سحب الدم من الوريد الصافن ، شريطة ان يتم ذلك بشكل صحيح ، يدفع الحد الأدنى من الضائقة في الحيوانات و لا يتطلب التخدير. هذا الأسلوب يسمح المتكررة تلفت كميات صغيرة من الدم ، مثل الحاجة للدراسات الدوائية 4،5 ، وتحديد البلازما والكيمياء ، أو تهمة الدم 6.
ثقب في القلب تسمح (ويمكن استخلاص ما يصل الى 10 مل من الدم من الفئران 150 غ) جمع كميات كبيرة من الدم من حيوان واحد. هذه التقنية مفيدة للغاية ولذلك كإجراء المحطة عند سحب الدم من الصافن لن تقدم عينة كبيرة بما فيه الكفاية. نستخدم ثقب في القلب عندما نحتاج كميات كافية من المصل من سلالة معينة من الفئران أن تنمو خطوط اللمفاويات T 4-9 في المختبر.
Protocol
سحب الدم من الفئران عن طريق الوريد الصافن والبزل القلب
ملاحظة : يجب الموافقة على جميع الإجراءات من قبل رعاية الحيوانات المعهد الخاص واستخدام لجنة.
1. سحب الدم من الوريد الصافن
- يتم تنفيذ هذا الإجراء دون تخدير ويتطلب شخصين ، واحد الذي يعالج الفئران ، وأحد الذين ينفذ التعادل.
- جعل مخروط من منشفة أو الاستمرار على الفئران مع قفازات القوارض المناولة ، وترك أحد أطرافه الخلفية المكشوفة.
- حلق الخلفي من الساق مع الانتهازي الكهربائية حتى الوريد الصافن مرئيا. يحلق على مساحة واسعة بما فيه الكفاية ، بحيث لا شعر سوف تأتي في اتصال مع موقع الثقب. استخدام كمية صغيرة من المستحضر جهة غير عطرة للحفاظ على الشعر غير حلق بعيدا عن موقع الثقب.
- جعل نقطة ضغط على قاعدة الساق لجعل الوريد الصافن من انتفاخ (مشابه لاستخدام عاصبة عند سحب الدم من الإنسان أو الحيوان الكبرى). ثقب الوريد باستخدام إبرة 20G وحلج القطن في الدم لأنه يخرج باستخدام microvette. وسوف تضخ مع الساق تساعد في جذب مزيد من الدماء. عندما كنت قد جمعت ما يكفي من الدم ، ضغط عقد النظيفة على موقع البزل لوقف النزيف.
2. سحب الدم من خلال ثقب في القلب
- هذا الإجراء يتطلب التخدير والطرفية. يجب أن يتم التخلص فورا الحيوانات في نهاية ثقب في القلب.
- إعداد محقنة 5 مل مع إبرة 23G1.
- anesthesize عميقا للفئران ، والاختيار للتخدير بسبب قلة الحركة العفوية ، وبطء معدل التنفس ، وعدم الاستجابة للمحفزات (مثل معسر في احد اصابع القدم). لضمان التخدير لفترة طويلة ، ومكان للبرميل حقنة تحتوي على منشفة ورقية غارقة في مخدر المضطربة على أنف الفئران خلال هذا الإجراء.
- وضع فأر على ظهرها ، تواجه بعيدا عنك.
- إذا كنت اليد اليمنى ، ضع السبابة اليسرى في مستوى أدنى من أضلاعه ، ودون تطبيق أي ضغط. وسوف يكون موجودا في قلب ~ 1 سم فوق هذه النقطة ، قليلا إلى اليمين.
- عقد المحقنة الخاص بزاوية 45 درجة ، تضاف إبرة بين ضلعين ومشاهدة لقطرة من الدم إلى حيز الإبرة. هذا هو إشارة إلى أن كنت في القلب. حقنة دون تحريك الخاص بك ، سحب على المكبس لملء الحقنة. بمجرد حقنة مليئة ، بعناية فصلها من الإبرة وتفريغها في أنبوب. ويمكن بعد ذلك المحقنة يعاد تعلق على إبرة لسحب المزيد من الدم. ينبغي أن يكون من الممكن استخلاص 50-10 مل من الدم من الفئران ز 120-180.
- الموت ببطء على الفور الفئران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
سحب الدم من الوريد الصافن هو وسيلة مريحة للحصول على كميات صغيرة من الدم من دون تخدير. إذا كان مطلوبا أخذ العينات المتكررة ، والتحقق من لوائح لضمان عدم سحب الدم الكثير من الفئران.
الرسم في الدم عن طريق ثقب في القلب هو وسيلة مريحة للحصول على كميات كبيرة من الدم ولكن هذا هو الاجراء المحطة. يجب أن يتم التخلص من الحيوانات في نهاية سحب الدم.
وينبغي أن تكون هذه التقنيات (كما هو الحال في جميع التقنيات الحيوانات الحية) القيام به أولا في وجود طبيب بيطري أو فني بيطري الذين سيكونون قادرين على تقييم بأن يتم التعامل مع الحيوانات بشكل سليم وعدم تعرض لآلام لا داعي لها و / أو استغاثة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Needle 20G 1/2 | Tool | BD Biosciences | 305176 | For puncturing the saphenous vein |
| Microvette 300 | Tool | Sarstedt Ltd | 20.1308.100 | To collect blood from the saphenous vein |
| Electric trimmer | Tool | Braintree Scientific, Inc. | CLP-32130 | |
| Needle 23 G 1 | Tool | BD Biosciences | 305145 | For cardiac puncture |
| 5 ml plastic syringe, slip tip | Tool | Fisher Scientific | 14-826-12 | For cardiac puncture |
References
- Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
- Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
- Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).
- Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).
- Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 936-944 (2001).
- Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. , 317-320 (2003).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).
