Summary
Blod drar är nödvändiga i ett stort antal studier, till exempel för att studera farmakokinetiken profil av en förening. Här visar vi hur man drar blod från råttor med hjälp av två tekniker: blod dra av ytlig ven eller från hjärtat.
Abstract
Ritning blod från gnagare är nödvändigt för ett stort antal både in vitro och in vivo-studier. Webbplatser av blod drar är många i gnagare: retro-orbital sinus, halsvenen, maxillary ven, ytlig ven, hjärta. Varje teknik har sina fördelar och nackdelar, och vissa är inte godkända längre i vissa länder (t ex, retro-orbital drar i Holland). En diskussion om olika tekniker för att dra blod finns 1-3. Här presenterar vi två tekniker för att dra blod från råttor, alla med sina specifika tillämpningar.
Blod dra från ytlig ven, förutsatt att det görs på rätt sätt, framkallar minimala lidande hos djur och inte kräver narkos. Denna teknik möjliggör upprepad drar av små mängder av blod, som behövs för farmakokinetiska studier 4,5, bestämma plasmakemi eller blodvärden 6.
Hjärtat punktering tillåter insamling av stora mängder av blod från ett enskilt djur (upp till 10 ml blod kan dras från en 150 g råtta). Denna teknik är därför mycket värdefullt som en terminal förfarande vid utarbetandet blod från ytlig inte skulle ge ett tillräckligt stort urval. Vi använder hjärt punktering när vi behöver tillräckliga mängder av serum från en viss stam av råttor för att växa T-lymfocyter linjer in vitro 4-9.
Protocol
Dra blod från råttor genom ytlig ven och från hjärtat
OBS: Alla förfaranden ska godkännas av din högskolans djurvård och använda kommitté.
1. Blod dra av ytlig ven
- Detta görs utan bedövning och det behövs två personer, en som hanterar råttan, och en som utför lottningen.
- Gör en kon av en handduk eller hålla råttan med gnagare handskar, lämnar en bakbenen utsätts för.
- Shave baksidan av benet med en elektrisk trimmer tills ytlig ven är synlig. Raka ett tillräckligt stort område så att inget hår kommer i kontakt med punktionsstället. Använd en liten mängd icke-doftande handkräm för att hålla icke-rakade håret bort från punktionsstället.
- Gör en kompression punkt vid basen av benet för att göra ytlig ut ven utbuktning (påminner om att använda ett tryckförband vid utarbetandet blod från en människa eller ett stort djur). Punktera venen med en 20G nål och skopa i blodet som det kommer ut med en microvette. Pumpning med benet kommer att hjälpa dra mer blod. När du har samlat tillräckligt med blod, hålla en ren kompress på injektionsstället för att stoppa blödning.
2. Blod dra från hjärtat
- Denna procedur kräver narkos och är terminalen. Djur skall omedelbart avlivas i slutet av en hjärt punktering.
- Förbered en 5 ml spruta med en 23G1 nål.
- Djupt anesthesize råttan och kontrollera för anestesi av en brist på spontana rörelser, långsam andning, och avsaknad av reaktion på stimuli (t.ex. nypa en tå). För att säkerställa långvarig anestesi, placera en sprutan innehåller hushållspapper indränkt i inhalationsanestetikum på råtta näsa under förfarandet.
- Placera råttan på rygg, vänd bort från dig.
- Om du är högerhänt, placera vänster pekfinger på samma nivå som den lägsta revben, utan att något tryck. Hjärtat kommer att vara belägen ca 1 cm ovanför denna punkt, något till höger.
- Håll din spruta på en 45-graders vinkel, in nålen mellan två revben och titta på en droppe blod att komma in nålen. Detta är en indikation på att du är i hjärtat. Utan att flytta din spruta och dra i kolven för att fylla sprutan. När sprutan är full försiktigt bort det från injektionsnålen och tömma den till ett rör. Sprutan kan sedan åter fäst nålen för att dra mer blod. Det bör vara möjligt att dra 5-10 ml blod från en 120-180 g råtta.
- Omedelbart avliva råttan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ritning blod från ytlig ven är ett bekvämt sätt att få små mängder av blod utan bedövning. Om upprepad provtagning krävs, kontrollera förordningar för att säkerställa att du inte drar alltför mycket blod från en råtta.
Teckning blod från hjärtat är ett bekvämt sätt att få stora mängder blod men detta är en terminal förfarande. Djuret ska avlivas i slutet av blodet oavgjort.
Dessa tekniker (som alla tekniker på levande djur) bör först göras i närvaro av en veterinär eller en veterinär tekniker som kommer att kunna bedöma att djuren behandlas väl och inte utsätts för onödig smärta och / eller ångest.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Needle 20G 1/2 | Tool | BD Biosciences | 305176 | For puncturing the saphenous vein |
| Microvette 300 | Tool | Sarstedt Ltd | 20.1308.100 | To collect blood from the saphenous vein |
| Electric trimmer | Tool | Braintree Scientific, Inc. | CLP-32130 | |
| Needle 23 G 1 | Tool | BD Biosciences | 305145 | For cardiac puncture |
| 5 ml plastic syringe, slip tip | Tool | Fisher Scientific | 14-826-12 | For cardiac puncture |
References
- Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
- Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
- Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).
- Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).
- Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 936-944 (2001).
- Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. , 317-320 (2003).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).
