Summary
Мышь полная модель стаз уступает тромбоз полой вены дает значительных количествах вены ткани стену и тромба. Он оказался полезным для оценки взаимодействия между стенкой вены и окклюзионной тромб и в оценке прогрессии от острого к хроническому воспалению.
Abstract
Венозной тромбоэмболии (ВТЭ) включает в себя как тромбоз глубоких вен (ТГВ) и легочной эмболии (PE). В Соединенных Штатах Америки (США), высокой заболеваемости и смертности сделать ВТЭ серьезную озабоченность здоровьем 1-2. После болезни сердца и инсульта, ВТЭ является третьим наиболее распространенным сосудистым заболеванием 3. Только в США, есть примерно 900 тысяч людей, пострадавших в год, с 300 000 случаев смерти, происходящих ежегодно 3. Надежный в модельных животных для изучения естественных механизмов этого заболевания является необходимым.
Преимущества использования мыши полная модель стаз уступает тромбоз полой вены несколько. Модель мыши дает возможность администрации очень малых объемах ограниченных агентов тестирования доступности, снижение затрат резко. Наиболее перспективным является потенциал для мышей с нокаутом гена, которые позволяют конкретным воспалительных и свертывания функций фактор, который необходимо разграничены. Текущий молекулярного анализа позволяют количественного стенки вены, тромбоз, цельная кровь, а плазму для анализов. Тем не менее, основной проблемой с участием этой модели является оперативное ограничения размеров и хрупкости сосудов. Кроме того, из-за небольшой выборки IVC веса (в среднем 0,005 грамма), необходимо увеличить количество животных для точного статистического анализа для ткани, тромб, и кровь анализы, такие как в режиме реального времени полимеразной цепной реакции (ПЦР), западные пятно, иммуноферментного анализа (ИФА), zymography, настенные вен и тромбов сотовой анализа и цельной крови и плазмы анализы 4-8.
Основным недостатком модели является то, что застой отсутствие кровотока подавляет максимальный эффект вводимого системных терапевтических агентов на тромб и стенки вены.
Protocol
1. Процедуры Мышь Анестезия
- Животные будут удалены из их клетки и помещают в анестезии дооперационном индукции камеры для газовой индукции при 5% изофлуран и 100% кислорода, при расходе 0,5 л в минуту (испаритель управлением).
- Мыши седативные в камере индукции анестезии, удаляются из камеры и вентральной живот бритая с электрическими ножницами, либо поддерживать в камере, если волос для удаления волос используется (1мин).
- Хотя до сих пор под действием успокоительного, они подняты, глаза смазываются мазью стерильные офтальмологические и затем помещаются в спинной recumbancy на теплые воды, циркулирующей нагревательного устройства под общим наркозом, с носовой обтекатель, используя изофлуран и кислорода. На данный момент кислорода ставка снижается до 0,2 литров в минуту.
- Живот опрыскивают решение хлоргексидина (хлоргексидин диацетат быстро bacterialcidal и стойкие) и протирают стерильной марли в три раза или до места операции чист.
2. Мышь микро-хирургических и процедур восстановления
- Вентральный вырез средней линии (2 см) производится с диафрагмой ножницами через кожу и брюшной стенки подвергая живот. Стерильного физиологического раствора пропитанной марли 2x2in используется для отражения кишечника в левой части животного. Мышь фиксатор ставится на место позволяет визуализации нижней полой вены (НПВ).
- В этот момент прежнем уровне в 2% isoflurance и 100% кислорода скоростью 0,2 л / мин используется для оставшейся части хирургического вмешательства.
- Блант рассечение облегчается использованием стерильного тампона аппликатор и дополнительные тонкие half диафрагмы изогнутые щипцы ткани. Необходимо соблюдать осторожность при обращении мыши тканей они очень хрупкие. При входе в брюшную полость, использование стерильного физиологического раствора пропитанной марли 4x4in задуматься и экстериоризироваться кишечника на стерильной драпировки, что позволяет визуализировать IVC.
- Все назад IVC отраслей, от почечной вены подвздошной бифуркации, являются обезболивающий укол в то время как боковые ветви лигируют с 7-0 нереактивный швов проленовой.
- IVC отделена от аорты, чуть меньше почечных вен. 7-0 проленовой используется для лигировать IVC.
- Лапаротомия Сайт закрыт в двухслойной моды. Наша лаборатория использует 5-0 Викрил, синтетические шовные, в непрерывный узор, чтобы закрыть брюшной стенки. Клей клей кожа используется для закрытия кожи. Есть никаких внешних швов для удаления.
- Мыши затем восстановился в отдельные клетки мыши, наблюдается после операции (45 минут до 2 часов), при нагреве лампа (минимальное расстояние 24 см от клетки), а затем вернулся к своему первоначальному единиц жилья. Обезболивающие и противовоспалительные средства могут быть использованы, если она не вмешивается в исследовании цели. Научное обоснование отказать обезболивающие препараты, ветеринарные и ICUCA одобрение не требуется. Наша лаборатория обнаружила, что бупренорфин, 0,05-0,1 мг / кг SQ является отличным пред-и послеоперационного обезболивающего для мышей. Кроме того, лидокаин в 4mg/kg (0,4 мл / кг 1% раствора) могут вводиться в разрез сайт, когда системные анальгетики может вносить путаницу в результаты эксперимента.
- Шам животных из каждой экспериментальной группы проходят выше рассечение используется для хирургического доступа, за исключением IVC или осушения ветви не лигируют или обезболивающий укол.
- Эвтаназия проводится в соответствии с рекомендациями, изложенными Американской Ветеринарной Медицинской Ассоциации Руководство об эвтаназии для грызунов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Мышь Полная модель Стасис из Нижнего тромбоз полой вены может быть выполнено на несколько линий мышей разного возраста. Модель больше всего подходит для мышей не менее 20 граммов в весе. Это животное модели венозного тромбоза позволяет исследователям изучать воспалительных взаимодействия между стенкой вены и окклюзионные тромбы вен. Исходя из нашего опыта, мы обнаружили, что 10 или больше животных в группе необходимы для получения статистически значимые различия между группами для тромба веса, стенки вены воспалительного-клеток, белка венозной стенки, стенки вены экспрессии генов, а весь анализ крови или плазмы для деятельности анализов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
