Summary
Die Maus komplette Stase Modell der unteren Hohlvene Thrombose liefert quantifizierbare Mengen Venenwand Gewebe und Thrombus. Es hat sich bewährt für die Bewertung Wechselwirkungen zwischen der Venenwand und der okklusiven Thrombus und bei der Beurteilung der Progression von akuten zu chronischen Entzündungen sinnvoll.
Abstract
Die venöse Thromboembolie (VTE) beinhaltet sowohl tiefe Venenthrombose (DVT) und Lungenembolie (PE). In den Vereinigten Staaten von Amerika (USA), die hohe Morbidität und Mortalität machen VTE ein ernstes Gesundheitsproblem 1-2. Nach Herzerkrankungen und Schlaganfall, ist VTE die dritthäufigste Gefäßerkrankungen 3. Allein in den USA gibt es schätzungsweise 900.000 Menschen erkranken jährlich mit 300.000 Todesfälle jährlich 3. Eine zuverlässige in vivo-Tiermodell, um die Mechanismen dieser Krankheit Studie notwendig ist.
Die Vorteile der Verwendung der Maus komplett Stase Modell der unteren Hohlvene Thrombose sind mehrere. Das Maus-Modell erlaubt die Verwaltung von sehr kleinen Volumina der begrenzten Verfügbarkeit Testmittel, Kosten zu reduzieren drastisch. Vielversprechendsten ist das Potenzial für Mäuse mit Gen-Knockouts, dass bestimmte Entzündungs-und Gerinnungsfaktor Funktionen abgegrenzt werden können. Aktuelle molekularbiologische Tests erlauben die Quantifizierung der Venenwand, Thrombus, Vollblut und Plasma-Assays. Allerdings ist ein wichtiges Anliegen mit diesem Modell die operative Größe Zwänge und die Brüchigkeit der Gefäße. Auch aufgrund der geringen IVC Einwaage (Mittelwert 0,005 Gramm) ist es notwendig, Tierzahlen zur genauen statistischen Analyse für Gewebe, Thrombose und Blut-Tests wie real-time Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR), Western-Blot zu erhöhen, Enzyme Linked Immuno (ELISA), Zymographie, Venenwand und Thrombus zelluläre Analyse und Vollblut-und Plasma-Assays 4-8.
Der größte Nachteil bei der Stasis-Modell ist, dass die mangelnde Durchblutung der maximalen Wirkung der verabreichten systemischen Therapeutika auf der Thrombus und Venenwand hemmt.
Protocol
1. Maus Anästhesieverfahren
- Die Tiere sind aus ihrem Käfig genommen und in ein Betäubungsmittel präoperativen Induktion Kammer für Gas-Induktion bei 5% Isofluran und 100% Sauerstoff, bei einer Flussrate von 0,5 Liter pro Minute (Verdampfer gesteuert).
- Mäuse sind in der Narkoseeinleitung Kammer sediert, entfernt von Kammer-und der ventralen Bauch ist mit elektrischen Haarschneider rasiert, gepflegt oder in der Kammer, wenn ein Haar Enthaarungsmittel verwendet wird (1min).
- Noch unter Sedierung, sie wogen, werden die Augen mit einer sterilen Augensalbe geschmiert und dann in einen dorsalen recumbancy an einem warmen Wasser zirkuliert Heizgerät unter Vollnarkose, mit einer Nase Kegel, mit Isofluran und Sauerstoff. An diesem Punkt der Sauerstoffmenge auf 0,2 Liter pro Minute reduziert.
- Der Bauch ist mit Chlorhexidin-Lösung besprüht (Chlorhexidindiacetat schnell bacterialcidal und persistent) und wischte sich mit steriler Gaze dreimal oder bis zum OP-Gebiet ist sauber.
2. Maus Micro-chirurgischen und Recovery-Verfahren
- Ein ventralen Mittellinie Schnitt (2cm) ist mit Iris Schere durch die Haut und Bauchwand Freilegung der Bauch gemacht. Ein steriler Kochsalzlösung getränkt 2x2in Gaze wird verwendet, um den Darm des Tieres linken Seite widerspiegeln. Eine Maus restrainer ist in Ort ermöglicht die Visualisierung der unteren Hohlvene (IVC) setzen.
- An dieser Stelle ist ein Wartungs-Niveau von 2% isoflurance und 100% Sauerstoff von 0,2 l / min für den Rest des chirurgischen Eingriffs eingesetzt.
- Stumpfe Präparation wird erleichtert, mit einem sterilen Tupfer Applikator und extra zarte Iris halbgebogen Gewebe Zange. Es muss im Umgang mit Maus Gewebe für sie äußerst fragil eingenommen werden. Beim Betreten der Bauchhöhle, eine sterile Kochsalzlösung getränkt 4x4in Gaze zu reflektieren und exteriorisieren den Darm auf einem sterilen Tuch, so dass die Visualisierung der IVC.
- Alle IVC zurück Branchen, von der Nierenvenen der iliakalen Bifurkation sind verödet, während Seitenäste mit 7-0 nicht-reaktiven Prolene Fäden werden ligiert.
- Die IVC ist von der Aorta getrennt, unmittelbar unterhalb des Nierenvenen. 7-0 Prolene wird verwendet, um die IVC ligieren.
- Die Laparotomie Website wird in einem Zwei-Schicht verschlossen. Unser Labor verwendet 5-0 Vicryl, ein synthetisches Nahtmaterial, in einem kontinuierlichen Muster, um die Bauchdecke zu schließen. Adhesive Hautleim wird verwendet, um die Haut zu schließen. Es gibt keine externen Nähte für die Herausnahme.
- Mäuse werden dann in einer individuellen Maus Käfig wieder beobachtet, post-operativ (45 Minuten bis 2 Stunden) unter einer Wärmelampe (Mindestabstand-24 cm entfernt von Käfig), dann wieder an ihren ursprünglichen Wohneinheiten. Schmerzmittel und entzündungshemmende Mittel können verwendet werden, wenn sie nicht mit Studienziel nicht stören. Wissenschaftliche Begründung für Schmerzmittel vorenthalten, Veterinär-und ICUCA Genehmigung erforderlich sind. Unser Labor hat festgestellt, dass Buprenorphin, 0.05-0.1 mg / kg SQ ein ausgezeichnetes pre-und post-operative Analgetikum für Mäuse ist. Darüber hinaus kann Lidocain bei 4mg/kg (0,4 ml / kg einer 1% igen Lösung) in die Inzisionsstelle infundiert werden, wenn systemische Analgetika können experimentelle Ergebnisse zu verwechseln.
- Sham Tiere von jeder experimentellen Gruppe durchlaufen die oben dissection für den chirurgischen Ansatz verwendet, mit Ausnahme der IVC oder Ablassen Zweige nicht ligiert oder koaguliert.
- Euthanasie ist in Übereinstimmung mit den Empfehlungen der American Veterinary Medical Association Richtlinien zur Euthanasie für Nager gesetzt durchgeführt.
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Discussion
Die Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose kann auf mehrere Stämme von Mäusen unterschiedlichen Alters durchgeführt werden. Das Modell ist am besten für Mäuse von mindestens 20 Gramm Gewicht geeignet. Dieses Tiermodell von venösen Thrombosen können Ermittler zu entzündlichen Wechselwirkungen zwischen der Venenwand und die Verschlusskrankheit Venenthrombose zu studieren. Aus unserer Erfahrung haben wir festgestellt, dass 10 oder mehr Tieren pro Gruppe erforderlich sind, um statistische Signifikanz zwischen den Gruppen für Thrombus Gewichte, Venenwand entzündliche Zellzahlen, Venenwand Protein, Venenwand Genexpression und Vollblut oder Plasma-Analyse für Aktivität zu erhalten Assays.
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Disclosures
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
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