Summary
النموذج الكامل للركود الماوس تخثر الوريد الأجوف السفلي غلة كميات قابلة للقياس الكمي من نسيج جدار الوريد والجلطة. وقد ثبت أنها مفيدة لتقييم التفاعل بين الجدار وخثرة الوريد والانسداد في تقييم التقدم من حاد إلى التهاب مزمن.
Abstract
الجلطات الدموية الوريدية (VTE) يشمل كلا من خثار الأوردة العميقة (DVT) والانسداد الرئوي (PE). في الولايات المتحدة (الولايات المتحدة) ، وارتفاع معدلات المراضة والوفيات VTE معدلات جعل مشكلة صحية خطيرة 1-2. بعد أمراض القلب والسكتة الدماغية والجلطات هي ثالث الأكثر شيوعا 3 أمراض الأوعية الدموية. في الولايات المتحدة وحدها ، هناك ما يقدر ب 900000 شخص تضرروا من كل عام ، مع 300000 حالة وفاة تحدث سنويا 3. وموثوق بها في نموذج حيواني فيفو لدراسة آليات لهذا المرض هو ضروري.
مزايا استخدام النموذج الكامل للركود الماوس تخثر الوريد الأجوف السفلي عدة. الفأر نموذج يسمح لإدارة كميات صغيرة جدا من وكلاء اختبار مدى توافر محدودة ، والحد من التكاليف بشكل كبير. الواعدة وإمكانات مع الفئران بالضربة القاضية جين تسمح مهام محددة تحديدا والتهابات وعامل التخثر. المقايسات الجزيئية الحالية تسمح للالكميات من جدار الوريد ، خثرة الدم كله ، والبلازما لفحوصات. ومع ذلك ، شاغلا رئيسيا تنطوي على هذا النموذج هو حجم القيود المنطوق وتفتيت للسفن. أيضا ، نظرا لوزن عينة صغيرة IVC (يعني 0.005 غراما) من الضروري زيادة أعداد الحيوانات لأغراض التحليل الإحصائي الدقيق للأنسجة ، خثرة ، وفحوصات الدم مثل الوقت الحقيقي بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (RT - PCR) والغربية وصمة عار ، انزيم مرتبط المناعي (ELISA) ، الجدار zymography الوريد ، وتحليل خثرة الخلوية ، والدم كله والمقايسات البلازما 4-8.
أما العيب الرئيسي مع النموذج الركود هو أن نقص تدفق الدم يحول دون تأثير القصوى من وكلاء تديرها العلاجية الشاملة على الجدار وخثرة الوريد.
Protocol
1. إجراءات الماوس التخدير
- تتم إزالة الحيوانات من القفص ، وضعت في غرفة التخدير قبل العملية التعريفي لتحريض الغاز بنسبة 5 ٪ و 100 isoflurane الأكسجين ٪ ، بمعدل تدفق 0.5 ليتر في الدقيقة الواحدة (المرذاذ للرقابة).
- ومخدرا في غرفة الفئران تحريض التخدير ، وإزالتها من غرفة وحلق البطن بطني مع كليبرز الكهربائية ، أو صيانتها داخل غرفة إذا تم استخدام مزيل الشعر الشعر (1min).
- في حين لا يزال تحت التخدير ، ويوزن فيه ، ومشحم العينين مع مرهم عيني عقيم ومن ثم وضعها في recumbancy الظهرية على المياه الدافئة تعميم جهاز التسخين تحت التخدير العام ، مع مخروط الأنف ، وذلك باستخدام isoflurane والاوكسجين. عند هذه النقطة هو خفض معدل الأكسجين إلى 0.2 ليتر في الدقيقة الواحدة.
- يتم رش البطن بمحلول الكلورهيكسيدين (ثنائي الأسيتات الكلورهكسيدين هو bacterialcidal بسرعة والثابتة) ومسحت مع شاش معقم أو حتى ثلاث مرات في موقع جراحية نظيفة.
2. الفأر الصغير الجراحية وإجراءات الاسترداد
- يتم إجراء شق خط الوسط بطني (2cm) مع مقص القزحية من خلال الجلد وجدار البطن تعريض البطن. ويتم استخدام شاش معقم المالحة 2x2in غارقة لتعكس الأمعاء إلى الجانب الأيسر للحيوان. يتم وضع التصور restrainer الماوس في مكان يسمح للالوريد الأجوف السفلي (IVC).
- عند هذه النقطة ، وتستخدم على مستوى صيانة isoflurance 2 ٪ و 100 ٪ من معدل الأكسجين 0.2 لتر / دقيقة للفترة المتبقية من العملية الجراحية.
- ومما يسهل تشريح صريحا باستخدام قضيب مسحة معقمة والشوط الاضافي قزحية ملقط الأنسجة الدقيقة المنحنية. يجب توخي الحذر في التعامل مع الأنسجة الماوس لأنها هشة للغاية. عند الدخول في تجويف البطن ، واستخدام المياه المالحة شاش معقم 4x4in غارقة في تفكير وexteriorize الأمعاء في الصعود إلى ثنى معقمة ، وبالتالي السماح للIVC التصور.
- وأكتوي جميع فروع IVC الظهر ، من عروق الكلى إلى التشعب الحرقفي ، في حين و تربط فروع جنب مع خيوط 7-0 prolene غير المتفاعلة.
- يتم فصل IVC من الشريان الأورطي ، السفلي فقط إلى الأوردة الكلوية. يستخدم 7-0 prolene لligate في IVC.
- إغلاق موقع البطن بطريقة ثنائية الطبقة. مختبرنا يستخدم vicryl 5-0 ، وخياطة الاصطناعية ، في نمط مستمر لإغلاق جدار البطن. ويستخدم الصمغ اللاصق الجلد لإغلاق الجلد. لا توجد خيوط خارجية من أجل إزالة.
- لاحظ ثم يتم استرداد الفئران في قفص الماوس الفردية ، بعد العملية (45 دقيقة الى 2 ساعة) تحت مصباح التدفئة (المسافة - 24 بوصة بعيدا عن الحد الأدنى من القفص) ، ثم عاد إلى وحداتهم السكنية الأصلي. يمكن استخدام المسكنات والأدوية المضادة للالتهابات واذا لم يتعارض مع هدف الدراسة. وهناك حاجة إلى مبرر علمي لحجب عقاقير مضادة للألم ، والطب البيطري ، والموافقة ICUCA. وقد وجدت أن لدينا مختبر البوبرينورفين ، ،05-،1 ملغم / كغم SQ هو مسكن الممتازة قبل وبعد العملية مقابل الفئران. بالإضافة ، يمكن غرست في يدوكائين 4mg/kg (0.4 مل / كغ من محلول 1 ٪) في الموقع عندما شق المسكنات النظامية قد اربكت النتائج التجريبية.
- الحيوانات الشام من كل مجموعة تجريبية تخضع للتشريح أعلاه المستخدمة للنهج الجراحية ، ما عدا IVC أو أي من فروع استنزاف لا ligated أو أكتوي.
- يتم تنفيذ القتل الرحيم وفقا للتوصيات التي وضعتها أمريكا البيطرية المبادئ التوجيهية بشأن القتل الرحيم الرابطة الطبية للقوارض.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
لا يمكن أن يؤديها في نموذج الفأر ركود كاملة من الوريد الأجوف السفلي التخثر على سلالات متعددة من الفئران من مختلف الأعمار. هو الأكثر ملاءمة لهذا النموذج من الفئران لا يقل عن 20 غراما في الوزن. هذا نموذج حيواني من التخثر الوريدي يسمح للمحققين لدراسة التفاعلات بين التهاب جدار الوريد ، وخثرة وريدية مسد. من تجربتنا ، وجدنا أن هناك حاجة إلى 10 أو أكثر الحيوانات لكل مجموعة للحصول على دلالة إحصائية بين المجموعات للأوزان خثرة ، الوريد التهم جدار الخلية التهابات ، وجدار الوريد البروتين ، والتعبير الجيني الوريد الجدار ، وكلها تحليل الدم أو البلازما للنشاط المقايسات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
