Summary
המודל להשלים עכבר קיפאון של פקקת נחות הווריד הנבוב התשואות כמויות מדידים של רקמת עורק בקיר פקיק. זה הוכיח שימושי להערכת אינטראקציות בין הקיר וריד ואת פקיק occlusive והן להערכת התקדמות של דלקת כרונית חריפה.
Abstract
תרומבואמבוליזם ורידי (VTE) כולל גם פקקת ורידים עמוקה (DVT) ו תסחיף ריאתי (PE). בארצות הברית (ארה"ב), תחלואה ותמותה גבוהה ושיעורי לעשות VTE דאגה בריאותית רצינית 1-2. אחרי מחלות לב ושבץ, VTE הוא 3 third הנפוצים ביותר למחלות כלי הדם. בארה"ב לבדה יש כ 900,000 אנשים מושפעים מדי שנה, עם 300,000 מקרי מוות מתרחשים מדי שנה 3. אמין במודל בבעלי חיים vivo ללמוד את המכניזם של מחלה זו הוא הכרחי.
היתרונות של שימוש במודל עכבר קיפאון מוחלט של פקקת הווריד הנבוב נחותים הם מספר. המודל העכבר מאפשר ניהול של כמויות קטנות מאוד של סוכני הבדיקה המוגבלת זמינות, הקטנת עלויות באופן דרמטי. המבטיחים ביותר הוא פוטנציאל עכברים עם גן knockouts המאפשרים פונקציות מסוימות גורם דלקתי קרישה להיות התחום. מבחני מולקולרית נוכחי לאפשר quantitation החומה וריד, דם פקיק, שלם, פלזמה עבור מבחני. עם זאת, החשש העיקרי הכרוך מודל זה הוא אילוצי גודל הניתוח ואת פרירות הכלים. כמו כן, בשל המשקל IVC קטן מדגם (ממוצע 0.005 גרם) יש צורך להגדיל את מספר בעלי החיים לניתוח סטטיסטי מדויק של רקמות, פקיק, מבחני דם כגון תגובה בזמן אמת שרשרת פולימרז (RT-PCR), כתם המערבי, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography וריד קיר וניתוח הסלולר פקיק, ודם כל מבחני פלזמה 4-8.
החיסרון העיקרי עם המודל קיפאון זה חוסר זרימת הדם מעכב את האפקט המקסימלי של סוכני טיפולית מערכתית מנוהל על פקיק ועל הקיר וריד.
Protocol
1. עכבר פרוצדורות הרדמה
- בעלי חיים יוסרו מן הכלוב שלהם והניחו בתא טרום ניתוחית בהרדמה אינדוקציה לזירוז גז 5% isoflurane ו 100% חמצן, בקצב זרימה של 0.5 ליטר לדקה (מאדה מבוקר).
- עכברים הם מסומם בחדר אינדוקציה הרדמה, להסיר קאמרית הבטן הגחון הוא מגולח עם קוצץ חשמלי, או לשמור בתוך החדר אם מקריח שיער משמש (1min).
- אמנם עדיין תחת סדציה, הם שקלו, העיניים משומנים עם משחה עיניים סטריליות ואז להציב recumbancy הגב על מים חמים במחזור מכשיר החימום תחת הרדמה כללית, עם חרוט האף, באמצעות isoflurane וחמצן. בשלב זה בשיעור מופחת חמצן 0.2 ליטר לדקה.
- הבטן הוא ריסס עם פתרון chlorhexidine (diacetate chlorhexidine הוא bacterialcidal במהירות קבועה) וקינח עם גזה סטרילית שלוש פעמים או עד אתר כירורגי נקי.
2. עכבר מיקרו כירורגי ונהלים Recovery
- חתך קו האמצע הגחוני (2 ס"מ) הוא עשה עם איריס מספריים דרך העור ואת דופן הבטן לחשוף את הבטן. גזה סטרילי מלוחים 2x2in ספוג משמש כדי לשקף את המעיים אל הצד השמאלי של החיה. עוצר העכבר לשים להדמיה מקום המאפשר של נחות הווריד הנבוב (IVC).
- בשלב זה, רמת התחזוקה של isoflurance 2% בשיעור 100% חמצן של 0.2 ליטר / דקה משמש לשארית ההליך הכירורגי.
- דיסקציה בלאנט הוא הקל באמצעות ספוגית המוליך סטרילית עדינה במיוחד איריס מעוקל half מלקחיים רקמות. יש להקפיד בטיפול ברקמות העכבר כי הם שבירים מאוד. עם כניסתו חלל הבטן, להשתמש גזה סטרילי מלוחים 4x4in ספוג לשקף exteriorize את המעיים על וילון סטרילי, ובכך מאפשר הדמיה של IVC.
- כל הסניפים בחזרה IVC, מן הוורידים כליות אל הסתעפות הכסל, הם צרוב בעוד סניפים לוואי ligated עם 7-0 לא מגיב התפרים prolene.
- IVC היא להפריד בין אבי העורקים, נחות רק כדי הוורידים כליות. 7-0 prolene משמש ולקשור IVC.
- האתר laparotomy סגור באופן דו שכבה. המעבדה שלנו משתמשת 5-0 vicryl, תפר סינתטיים, דפוס מתמשך כדי לסגור את דופן הבטן. דבק דבק העור משמש כדי לסגור את העור. אין תפרים חיצוניים להסרה.
- עכברים הם התאוששו אז בכלוב עכבר בודדות, ציין שלאחר הניתוח (45 דקות עד 2 שעות) תחת מנורת חימום (מרחק מינימלי-24 סנטימטרים ספורים כלוב), ואז חזר יחידות דיור המקורי שלהם. משככי כאבים ואנטי דלקתיים יכולים לשמש אם זה לא מפריע מטרת המחקר. ההצדקה המדעית לעכב בתרופות לשיכוך כאבים, וטרינרי, ואישור ICUCA נדרשים. המעבדה שלנו מצא כי עצירות, 0.05-0.1 מ"ג / ק"ג SQ הוא משכך כאבים לפני ואחרי הניתוח מצוין עכברים. בנוסף, לידוקאין ב 4mg/kg (0.4 מ"ל / ק"ג של פתרון 1%) יכול להיות חדורים באתר חתך כאשר משככי כאבים מערכתית עשויה לבלבל תוצאות הניסוי.
- חיות שאם מכל קבוצת הניסוי לעבור את הניתוח לעיל המשמש לגישה ניתוחית, מלבד IVC או כל סניפי ניקוז אינם ligated או צרוב.
- המתת החסד מתבצעת בהתאם להמלצות שנקבעו על ידי הנחיות האיגוד האמריקאי לרפואה וטרינרית על המתת חסד של מכרסמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
המודל השלם עכבר הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב ניתן לבצע מספר רב של זנים של עכברים בגילים שונים. המודל המתאים ביותר לעכברים של לפחות 20 גרם במשקל. זה מודל חיה של פקקת ורידים מאפשר לחוקרים ללמוד אינטראקציות בין דלקת הווריד הקיר ואת פקיק ורידי occlusive. מניסיוננו, מצאנו כי 10 או יותר בעלי חיים לכל קבוצה יש צורך לקבל מובהקות סטטיסטית בין הקבוצות עבור משקולות פקיק, קיר וריד ספירת תאים דלקתיים, קיר חלבון וריד, וריד קיר ביטוי גנים, והניתוח כולו דם או פלסמה לפעילות מבחני.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
