Summary
El modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis cava produce cantidades cuantificables de los tejidos de la pared venosa y trombosis. Que ha demostrado ser útil para evaluar las interacciones entre la pared de la vena y el trombo oclusivo y en la evaluación de la progresión de la aguda a la inflamación crónica.
Abstract
El tromboembolismo venoso (TEV), incluye la trombosis venosa profunda (TVP) y embolismo pulmonar (EP). En los Estados Unidos (EE.UU.), la morbilidad y mortalidad elevadas tasas de TEV hacer un serio problema de salud 1.2. Después de la enfermedad cardíaca y accidente cerebrovascular, tromboembolismo venoso es la tercera enfermedad vascular tres más comunes. Sólo en los EE.UU., hay unas 900.000 personas sufren cada año, con 300.000 muertes anuales 3. Un confiable en un modelo animal in vivo para estudiar los mecanismos de esta enfermedad es necesario.
Las ventajas de utilizar el modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis cava son varias. El modelo de ratón permite la administración de volúmenes muy pequeños de la limitada disponibilidad de los agentes de la prueba, lo que reduce drásticamente los costes. Más prometedora es la posibilidad de que los ratones con knock-outs genéticos que permiten a funciones específicas de los factores inflamatorios y de coagulación para ser delineadas. Actuales técnicas moleculares permiten la cuantificación de la pared de la vena, la sangre de trombos, todo, y el plasma para los ensayos. Sin embargo, una preocupación importante participación de este modelo es el tamaño de las limitaciones operativas y la friabilidad de los vasos. Además, debido al peso de la muestra pequeños IVC (media de 0.005 gramos) es necesario aumentar el número de animales para el análisis estadístico preciso para los tejidos, trombosis, y los ensayos de la sangre, como la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR), western blot, ligado a enzimas (ELISA), zymography, la pared venosa y el análisis celular de trombos, y la sangre entera y plasma de los ensayos 4-8.
La principal desventaja con el modelo de estancamiento es que la falta de flujo sanguíneo inhibe el efecto máximo de agentes terapéuticos administrados sistémica en el trombo y la pared de la vena.
Protocol
1. Procedimientos de ratón anestesia
- Los animales son extraídas de su jaula y se colocan en una cámara de inducción de la anestesia antes de la operación para la inducción de gas en isoflurano 5% y el 100% de oxígeno, con un caudal de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada).
- Los ratones son sedados en la cámara de inducción de la anestesia, se retiran de la cámara y la parte ventral del abdomen se afeita con una maquinilla eléctrica, o mantenerse dentro de la cámara si es una crema depilatoria el cabello se utiliza (1 minuto).
- Si bien todavía bajo sedación, se pesan, los ojos están lubricados con un ungüento oftálmico estéril y se coloca en un recumbancy dorsal en un agua caliente que circula dispositivo de calentamiento bajo anestesia general, con un cono de la nariz, con isoflurano y oxígeno. En este punto, la tasa de oxígeno se reduce a 0,2 litros por minuto.
- El abdomen se rocía con una solución de clorhexidina (diacetato de clorhexidina es rápidamente bacterialcidal y persistente) y se limpió con una gasa estéril tres veces o hasta que el sitio quirúrgico está limpio.
2. Ratón Micro-quirúrgicos y procedimientos de recuperación
- Una incisión de línea media ventral (2 cm) se realiza con unas tijeras iris a través de la piel y la pared abdominal exponer el abdomen. Una solución salina estéril gasa empapada 2x2in se utiliza para reflejar los intestinos al lado izquierdo del animal. Una inmovilización del ratón se pone en la visualización lugar en que se de la vena cava inferior (VCI).
- En este punto, un nivel de mantenimiento del 2% isoflurance y 100% de oxígeno de 0,2 litros / min se utiliza para el resto de la intervención quirúrgica.
- Disección roma se facilita con un hisopo aplicador estéril y extra pinzas delicadas medio del iris curva de tejidos. Se debe tener cuidado en la manipulación de los tejidos del ratón para que son extremadamente frágiles. Al entrar en la cavidad abdominal, utilice una gasa estéril salina 4x4in empapado de reflejar y exteriorizar el intestino en un campo estéril, lo que permite la visualización de la vena cava inferior.
- Todas las ramas de nuevo IVC, a partir de las venas renales hasta la bifurcación ilíaca, se cauterizan, mientras que las ramas laterales se ligan con sutura de prolene 7-0 no reactivo.
- El IVC está separada de la aorta, inmediatamente por debajo de las venas renales. 7-0 prolene se utiliza para ligar la vena cava inferior.
- El sitio de la laparotomía se cierra en forma de dos capas. Nuestro laboratorio utiliza Vicryl 5-0, una sutura sintética, en un patrón continuo para cerrar la pared abdominal. Pegamento pegamento de la piel se utiliza para cerrar la piel. No hay puntos de sutura externos para su eliminación.
- Ratones después se recuperan en una jaula de ratón individual, observada después de la operación (45 minutos a 2 horas), bajo una lámpara de calentamiento (distancia mínima de 24 centímetros de distancia de la jaula), y luego regresaron a sus viviendas originales. Medicamentos para el dolor y agentes anti-inflamatorios no se puede utilizar si no interfiere con el objetivo de este estudio. Justificación científica para suspender medicamentos para el dolor, veterinarios, y la aprobación ICUCA se necesitan. Nuestro laboratorio ha descubierto que la buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg vía subcutánea es un analgésico excelente pre-y post-operatorios para los ratones. Además, la lidocaína en 4mg/kg (0,4 ml / kg de una solución al 1%) puede ser infundida en el sitio de la incisión, cuando analgésicos sistémicos pueden confundir los resultados experimentales.
- Animales Sham de cada grupo experimental someterse a la disección más, utilizados para el abordaje quirúrgico, con excepción de la vena cava inferior o las ramas de drenaje no se ligan o cauterizan.
- La eutanasia se realiza de acuerdo con las recomendaciones establecidas por la directrices de la American Veterinary Medical Association sobre la eutanasia para los roedores.
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Discussion
El modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis Cava se puede realizar en múltiples cepas de ratones de diferentes edades. El modelo más adaptado a los ratones de al menos 20 gramos de peso. Este modelo animal de trombosis venosa permite a los investigadores para estudiar las interacciones entre inflamatoria en la pared venosa y la trombosis venosa oclusiva. Desde nuestra experiencia, hemos encontrado que más de 10 animales por grupo son necesarios para obtener la significación estadística entre los grupos para el peso de trombos, los recuentos de células inflamatorias de la pared venosa, la proteína de la pared venosa, la expresión del gen de la pared venosa, y el análisis de sangre total o plasma de la actividad ensayos.
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Disclosures
No hay conflictos de interés declarado.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
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