Summary
Inferior vena kava trombozu fare tam durağanlık modeli ven duvar dokusu ve trombüs ölçülebilir miktarda verir. Bu damar duvar ve oklüzif trombüs arasındaki etkileşimleri ve akut ve kronik inflamasyon ilerlemesini değerlendirmek değerlendirmek için yararlı olduğu kanıtlanmıştır.
Abstract
Venöz tromboemboli (VTE), derin ven trombozu (DVT) ve pulmoner emboli (PE) içerir. Amerika Birleşik Devletleri (ABD), yüksek morbidite ve mortalite oranları ciddi bir sağlık sorunu 1-2 VTE olun. VTE, kalp hastalığı ve inme sonrası üçüncü en yaygın damar hastalığı 3. Sadece ABD'de her yıl etkilenen 300.000 ölüm yılda 3 oluşan, yaklaşık 900.000 kişi var. Bu hastalığın mekanizmaları incelemek için güvenilir bir in vivo hayvan modeli gereklidir.
Inferior vena kava trombozu fare tam durağanlık modeli kullanmanın avantajları çok sayıda vardır. Fare modeli, maliyetleri önemli ölçüde azaltarak, sınırlı sayıda test ajanların çok küçük hacimli yönetim sağlar. En çok gelecek vaat eden spesifik inflamatuvar ve pıhtılaşma faktörü fonksiyonları belirlendi izin gen nakavt fareler için bir potansiyeldir. Şu moleküler deneyleri, damar duvarı, trombüs, tam kan ve plazma deneyleri için kantitatif için izin verir. Ancak, bu model ile ilgili büyük bir endişe ameliyat boyutu kısıtlamaları ve gemilerin kırılganlık. Ayrıca, küçük IVC örnek ağırlığı (ortalama 0.005 gram) sayesinde gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR), western blot gibi hayvansal doku için doğru istatistiksel analiz numaraları, trombüs ve kan testleri artırmak için gerekli enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, damar duvarı ve trombüs hücresel analiz ve tam kan ve plazma testleri 4-8.
Staz modeli ile büyük bir dezavantaj, kan akışının olmaması, trombüs ve damar duvarı üzerinde uygulanan sistemik terapötik ajanlar maksimal etkisi inhibe ettiği.
Protocol
1. Fare Anestezi Prosedürleri
- Hayvanlar, kendi kafesinden dakikada 0.5 litre (buharlaştırıcı kontrollü) bir akış hızında kaldırılır ve izofluran% 5 ve% 100 oksijen gazı indüksiyon için ameliyat öncesi anestezi indüksiyon odasına yerleştirilir.
- Fare, anestezi indüksiyon odasında sedasyon odasına çıkarıldı ve ventral karın saç tüy dökücü (1dk) kullanılması durumunda elektrik kesme makineleri ile traş, ya da odanın içinde korunur.
- Hala sedasyon altında, tartılır, gözler, izofluran ve oksijen kullanarak bir burun konisi, steril oftalmik merhem ile yağlanır ve daha sonra, genel anestezi altında dolaşan bir sıcak su ısıtma cihazı dorsal recumbancy yerleştirilir. Bu noktada, dakikada 0.2 litre oksijen oranı azalır.
- Karın klorheksidin solüsyonu ile püskürtülür (klorheksidin diasetat hızla bacterialcidal ve kalıcı) ve steril gazlı bez ile üç kez sildi ya da cerrahi bölge temiz olana kadar.
2. Fare Mikro-cerrahi ve Kurtarma Prosedürleri
- Ventral orta hat insizyonu (2cm), deri ve karın duvarı ile karın açığa iris makası ile yapılır. , Bir steril serum fizyolojik batırılmış 2x2in gazlı bez bağırsaklarda hayvanın sol tarafında yansıtmak için kullanılır. Bir fare süzgeç görselleştirme izin inferior vena kava (IVC) yerine konur.
- Bu noktada,% 2 isoflurance ve 0.2 litre / dk% 100 oksijen oranı, bir bakım seviyesi cerrahi işlemin geri kalanı için kullanılır.
- Künt diseksiyon steril bir aplikatör çubukla ve ekstra hassas iris yarım kavisli doku forseps kullanarak kolaylaştırılır. Bakım son derece kırılgan olduğu için fare dokuları ele alınmalıdır. IVC görüntüleme sağlayan, böylece karın boşluğuna girdikten sonra steril örtüyü üzerine bağırsaklarında yansıtacak ve exteriorize, steril bir tuzlu batırılmış 4x4in gazlı bez kullanın.
- Yan dalları, non-reaktif 7-0 prolen sütür ile bağlandı ise bütün böbrek damarları iliak bifurkasyon IVC arka dalları, koterize.
- IVC, böbrek damarları sadece alt, aort ayrılır. 7-0 prolen IVC Arter için kullanılır.
- Iki katmanlı bir moda laparotomi sitesi kapalı. Laboratuvarımız sürekli bir desen 5-0 Vicryl, sentetik dikiş, karın duvarı kapatmak için kullanır. Yapışkan deri tutkal cilt kapatmak için kullanılır. Çıkarılması için herhangi bir dış sütür vardır.
- Fare, daha sonra bireysel bir fare kafes içinde ele, bir ısıtma lambası (minimum mesafe 24 inç uzakta kafes) altında (2 saat 45 dakika) ameliyat sonrası gözlenen, daha sonra kendi özgün konut döndü. Bu çalışmanın amacı engel değilse, ağrı kesici ilaçlar ve anti-inflamatuar ajanlar kullanılabilir. Bilimsel ağrı kesici ilaçlar alıkoyma gerekçesi, veteriner ve ICUCA onayına ihtiyaç vardır. Laboratuvarımız Buprenorfin, 0.05-0.1 mg / kg SQ fareler için mükemmel bir pre-ve post-operatif ağrı kesici olduğunu tespit etmiştir. Lidokain az 4mg/kg (0.4 ml / kg% 1 solüsyon) ek olarak, sistemik analjezikler deneysel sonuçlar karıştırıcı kesi yeri aşılanan.
- IVC veya herhangi bir drenaj dalları bağlandı veya koterize değildir hariç, her deney grubundan Şam hayvanların cerrahi yaklaşım için kullanılan yukarıdaki diseksiyon tabi.
- Ötenazi, kemirgenler için Ötenazi Amerikan Veteriner Tıp Derneği Kuralları tarafından belirlenen tavsiyelere uygun olarak yapılır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model değişik yaştaki farelerin birden fazla suşları yapılabilir. Bu model en az 20 gram ağırlığı farelere en çok uygundur. Bu hayvan modelinde venöz tromboz, araştırmacılar, damar duvarı ve oklüzif venöz trombüs arasındaki inflamatuar etkileşimleri çalışmak için izin verir. Deneyimlerimizi, biz grup başına 10 veya daha fazla hayvan trombüs ağırlıkları, damar duvarının inflamatuvar hücre sayımı, damar duvarı protein, damar duvarı gen ekspresyonu ve aktivitesi için tam kan veya plazma analizi için gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı elde etmek için gerekli olduğunu bulmuşlardır deneyleri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
