Summary
एक न्यूनतम इनवेसिव के लिए माउस स्पाइनल कॉलम को स्थिर और दोहरावदार प्रदर्शन प्रोटोकॉल
Protocol
1. रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस भवन
- Narishige अनुसूचित जनजातियों एक कॉम्पैक्ट स्पाइनल कॉर्ड Clamps और Narishige एमए 6N सिर पकड़ एडाप्टर आदेश.
- कस्टम डिजाइन और एक स्टेनलेस स्टील बेस प्लेट संरेखण में दो भागों Narishige पकड़ करने के लिए इतना है कि जानवर के सिर जबकि अपने स्पाइनल कॉलम और पूंछ clamped रहे हैं समर्थित है. ध्यान रखें कि पूरी युक्ति खुर्दबीन लेंस के अंतर्गत एक कम खुर्दबीन मंच पर आम तौर पर फिट होना चाहिए.
2. पशु शल्य चिकित्सा
- एक हवा हीटिंग डिवाइस के साथ पूर्व गर्मी खुर्दबीन कक्ष और यह 37 पर बनाए रखने डिग्री सेल्सियस
- पशु वजन और चतनाशून्य करनेवाली औषधि मिश्रण का उपयोग करते हुए, 100 मिलीग्राम ketamine, 15 मिलीग्राम xylazine और शरीर के वजन के प्रति किलोग्राम 2.5 मिलीग्राम acepromazine, बाँझ शर्तों के तहत 0.9% NaCl समाधान में पतला कर.
- संवेदनाहारी मिश्रण intraperitoneally (KXA) इंजेक्शन लगाने के द्वारा पशु anesthetize. नियमित रूप से पैर की अंगुली बन्द रखो भर में गहरी संज्ञाहरण सुनिश्चित करने के लिए प्रदर्शन किया जाना चाहिएप्रयोग. आधा मूल प्रति घंटा या के रूप में की जरूरत खुराक के साथ अनुपूरक.
- एक छोटे जानवर हीटिंग पैड का उपयोग शल्य प्रक्रिया प्रदर्शन थर्मल समर्थन प्रदान करते हुए.
- आंखों पर कृत्रिम आँसू मरहम लागू करने के लिए corneal निर्जलीकरण और नुकसान को रोकने.
- एक trimming डिवाइस के साथ और फिर चीरा के आसपास के क्षेत्र को पूरी तरह से बालों को हटाने के लिए एक तेज ब्लेड के साथ जानवर की पीठ पहले दाढ़ी.
- मुंडा बाल निकालें और एक शराब पैड के साथ मुंडा त्वचा की सतह कीटाणुरहित.
- एक छोटी सी (~ 1.5 सेमी) वांछित रीढ़ की हड्डी स्तर (थोरैसिक कशेरुकाओं यहाँ दिखाया) पर त्वचा के अनुदैर्ध्य चीरा प्रदर्शन.
- Retracting द्वारा ध्यान से चमड़े के नीचे संयोजी ऊतक वापस मांसलता बेनकाब.
- ध्यान से स्पाइनल कॉलम से वांछित स्तर पर paravertebral मांसपेशियों को अलग. प्रत्येक spinous प्रक्रिया के दोनों पक्षों से अलग मांसपेशियों और फिर अलग मांसपेशियों परिमार्जन एक fewest संभव चीरों प्रदर्शनलामिना सतह से रास्ता.
- लामिना है कि हटाया जाएगा चुनें और स्पाइनल कॉलम के प्रत्येक पक्ष पर रीढ़ की हड्डी में clamps के लिए प्रवेश की साइटों को तैयार करने के लिए, तुरंत विजय - स्तम्भ और laminectomy के लिए दुम का. ध्यान से पेशी ऊतक विस्थापित करने के लिए चार जेब जहां clamps डाला जाएगा.
- लिफ्ट सीधे दांतेदार की नोक संदंश के साथ स्पाइनल कॉलम के लिए रीढ़ की हड्डी को छूने के बिना लामिना तहत घुमावदार कुंद की नोक कैंची की सुरक्षित सम्मिलन की अनुमति. धीरे धीरे एक तरफ अस्थि काटने और तब दूसरी तरफ laminectomy प्रदर्शन करना.
- एक कपास झाड़ू का प्रयोग करें या precut छोटे gelfoam absorbable जेलाटीन स्पंज के टुकड़े चीरों को बगल में डालने के लिए मामूली खून बह रहा है सीमा. एक छोटे पोत cauterizer प्रयोग करने के लिए और अधिक खून बह रहा नियंत्रण यदि आवश्यक. Preheated बाँझ कृत्रिम मस्तिष्कमेरु द्रव (ACSF) का प्रयोग करने के लिए ऊतक को धोने के लिए.
3. स्पाइनल कॉलम और की तैयारी के लिए vivo इमेजिंग में स्थिरीकरण
- Plac ई रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस के बेस प्लेट पर ऊंचाई पैड पर जानवर और सिर पकड़ एडाप्टर में सिर सुरक्षित.
- पूर्वकाल - पीछे पूर्व तैयार laminectomy (चित्रा 1) flanking जेब में जानवर की धुरी के साथ अनुसूचित जनजातियों एक डिवाइस की रीढ़ की हड्डी clamps रखें . दो clamps ~ 45 के एक कोण पर रखा जाना चाहिए जानवर अक्ष समास में प्रयुक्त रूप दुम का रिश्तेदार उजागर रीढ़ की हड्डी (चित्रा 1) पर एक पानी विसर्जन लेंस को कम करने के लिए पर्याप्त स्थान की अनुमति °.
- पूंछ तो जानवर के शरीर ऊंचाई पैड के इमेजिंग प्रयोगों (चित्रा 1) की अवधि के लिए हटाने के बाद हवा में निलंबित किया जा सकता है है के आधार पर अनुसूचित जनजातियों एक डिवाइस के तीसरे क्लैंप रखें.
- ACSF में रीढ़ की हड्डी के रखरखाव और vivo इमेजिंग के लिए इस समाधान में खुर्दबीन लेंस के विसर्जन की सुविधा के लिए Gelseal (Amersham बायोसाइंसेज कार्पोरेशन) के उजागर रीढ़ की हड्डी के आसपास के एक छोटे से अच्छी तरह से बनाने के लिए.
- Preheated खुर्दबीन चैम्बर कवर के अंदर जानवर और रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस पर स्थानांतरण के लिए यह एक कम खुर्दबीन लेंस (चित्रा 1) के तहत सीधे laminectomy रखकर मंच पर सुरक्षित.
- पानी विसर्जन एक लेंस ध्यान लोअर ACSF समाधान यकीन है कि यह रीढ़ की हड्डी clamps या Gelseal स्पर्श नहीं करता है बनाने में.
- हित के क्षेत्र की पहचान करने और उस पर ध्यान देते हैं epifluorescence का प्रयोग करें. लेजर स्कैनिंग मोड में स्विच करें और उपयुक्त दो photon लेजर उत्तेजना तरंगदैर्ध्य, dichroics और bandpass fluorophores के लिए फिल्टर imaged ऊतकों में मौजूद का उपयोग vivo इमेजिंग में प्रदर्शन.
5. दोहराए इमेजिंग और पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल
- इमेजिंग प्रयोगों के अंत में, रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस से माउस को हटाने और ध्यान से laminectomy के आसपास के क्षेत्र से Gelseal पोंछ.क्षेत्र में अच्छी तरह से साफ करें.
- पुनर्स्थापित और laminectomy पीठ की मांसपेशियों पर सिवनी.
- पुनर्स्थापित और laminectomy अधिक त्वचा सीवन, यह betadine साथ झाड़ू से साफ़ करना.
- 1 मिलीलीटर lactated एक पोषक तत्व और जलयोजन पूरक के रूप में Ringers (बैक्सटर हेल्थकेयर) समाधान है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से subcutaneously एनाल्जेसिक उपचार (0.1 मिलीग्राम / किलो buprenorphine) प्रदान करें.
- एंटीसेप्टिक उपचार intraperitoneally प्रशासन (माउस प्रति 0.03 मिलीग्राम, 2.27% enrofloxacin इंजेक्शन जीवाणुरोधी समाधान).
- संज्ञाहरण से पूरी वसूली जब तक एक हीटिंग पैड पर प्लेस जानवर और बाद में यह व्यक्तिगत घर.
- 2-3 दिन के बाद operatively के लिए पहली सर्जरी और एनाल्जेसिक उपचार हर 8-12 घंटे के बाद 3-5 दिनों के लिए एंटीसेप्टिक प्रशासन दैनिक दोहराएँ. सामान्य व्यवहार और पूरी वसूली सुनिश्चित करने के पशु दैनिक मॉनिटर.
- फिर से उसी laminectomy के माध्यम से इमेजिंग के लिए, sutured त्वचा और मांसपेशियों को फिर से खोलना और 2 वर्गों में वर्णित चरणों को दोहराएँ - 4.
- पुनः पता लगाने previously एक नक्शे के रूप में पहले 10 में वर्णित के रूप में रक्त vasculature का उपयोग करके क्षेत्र imaged.
6. प्रतिनिधि परिणाम
सभी पशु की प्रक्रिया संस्थागत पशु और कैलिफोर्निया, सैन फ्रांसिस्को विश्वविद्यालय में देखभाल का प्रयोग करें समितियों द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों के तहत प्रदर्शन किया गया और संघीय नियमों के साथ अनुसार कर रहे हैं. रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस के एक चित्र और एक डिवाइस पर एक खुर्दबीन के लेंस के तहत एक माउस की स्थिति दिखाने के योजनाबद्ध चित्र 1 में दिखाया गया है. जानवर के शरीर के नीचे साँस लेने आंदोलनों के लिए पर्याप्त कमरे की अनुमति दे रीढ़ की हड्डी में vivo इमेजिंग में स्थिर सुनिश्चित करता है चित्रा 2 microglia और vasculature के बीच घनिष्ठ संबंध से पता चलता है के रूप में यह vivo में Cx3cr1 GFP + / ट्रांसजेनिक 18 चूहों की रीढ़ की हड्डी में imaged किया गया था. जिसमें microglia endogenously GFP के साथ लेबल रहे हैं 3 दोहराव के शो उदाहरण चित्रा .vivo इमेजिंग के रूप में यह एक ही रीढ़ की हड्डी में axons में एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन (YFP - एच पंक्ति 3) और microglia (Cx3cr1 GFP + / चूहों में) व्यक्त चूहों में रीढ़ की हड्डी क्षेत्रों में प्रदर्शन किया गया था.
चित्रा 1 vivo इमेजिंग में दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग के लिए माउस स्पाइनल कॉलम के स्थिरीकरण. (ए) एक कस्टम बनाया इस्पात बेस प्लेट के लिए समर्थन और अनुसूचित जनजातियों के एक Narishige कॉम्पैक्ट रीढ़ की हड्डी clamps और एमए - 6N Narishige संरेखित करने के लिए प्रयोग किया जाता है सिर एडाप्टर पकड़े जैसा कि यहाँ दिखाया गया है (बी) वयस्क ट्रांसजेनिक रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस पर एक KXA संवेदनाहारी के साथ anesthetized चूहों की उचित स्थिति है.. डालने के तुरंत rostrally और laminectomy और उजागर रीढ़ की हड्डी के ऊतकों दुमदारी से रीढ़ की हड्डी में clamps के स्थान से पता चलता है.
<img alt = "चित्रा 2" src = "/ files/ftp_upload/2760/2760fig2.jpg" />
2 उच्च घनत्व microglial anesthetized चूहों की रीढ़ की हड्डी में कोशिकाओं और रक्त वाहिकाओं के vivo इमेजिंग में चित्रा. अनुमानित लेकिन गैर गठबंधन के z-ढेर (ए) अत्यधिक घने GFP पॉजिटिव microglia एक GFP CX3CR1 / + रक्त वाहिकाओं के साथ करीब निकटता में माउस (लाल, rhodamine dextran के चार इंजेक्शन के साथ लेबल) की रीढ़ की हड्डी में (हरा ). (ख) उच्च आवर्धन छवि (ए) एक एकल microglial पोत के आसपास बढ़ाया प्रक्रियाओं के साथ और रीढ़ की हड्डी पैरेन्काइमा की दिशा में एक रक्त वाहिका की दीवार से जुड़ी सेल में के रूप में लेबल. स्केल सलाखों, 10μm.
चित्रा 3 ही axonal क्षेत्रों और microglia के रूप में वे दूसरी जगह थे और अलग अलग दिनों पर anesthetized चूहों की रीढ़ की हड्डी में reimaged के vivo इमेजिंग में दोहराव है . (ए) YFP-प्रयोगशाला 0 दिन और 5 पर eled axons. (बी). एक ही नाड़ी संरचनाओं और उनके आसपास microglial कोशिकाओं Cx3cr1 GFP / 0 दिन और 1 पर + चूहों की रीढ़ की हड्डी में vivo में imaged. स्केल सलाखों, 10μm.
मूवी प्रतिनिधि 1. Timelapse अनुक्रम माउस रीढ़ की हड्डी से vivo में हासिल कर ली. इस अनुक्रम में ठीक विस्तार microglial प्रक्रिया (हरा) और फ्लोरोसेंट संरचनाओं के साथ एक घनी आबादी वाले ऊतक के भीतर समय पर vasculature (लाल, rhodamine dextran के चार इंजेक्शन के साथ लेबल) साथ गतिशीलता उनकी बातचीत में पता चलता है है. कच्चे छवियों केवल पृष्ठभूमि शोर, चमक, और इसके विपरीत के लिए सही थे और z-पेश क्रमिक रूप से अधिग्रहीत छवि ढेर द्वारा timelapse फिल्म का निर्माण किया गया था, छवि संरेखण के बिना, औसत या अलग - अलग विमानों के z - चयन. रक्त वाहिकाओं microglia की छवियों के रूप में एक z विमानों के समान श्रृंखला के माध्यम से जाओ. जेड विमान गहराई: 38 सुक्ष्ममापी.oad/2760/Davalos_Movie_1.mov "> फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
मूवी timelapse 2. अनुक्रम एक एकल z विमान के स्तर पर प्रदर्शन इमेजिंग विधि के कच्चे स्थिरता. वही CX3CR1 GFP + / KXA संज्ञाहरण के तहत रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस पर रखा चूहों की रीढ़ की हड्डी में एक z विमान के फास्ट अधिग्रहण, एक फ्रेम / के एक स्कैनिंग दर तुलना में तेजी से लगातार फ्रेम के बीच न्यूनतम छवि विस्थापन को दर्शाता है माउस के साँस लेने की दर. मामूली अवशिष्ट विस्थापन शायद दिल की धड़कन की वजह से है . फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
विधि यहाँ वर्णित के लिए अनुमति देता है स्थिर और घनी आबादी दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके anesthetized चूहों की रीढ़ की हड्डी में फ्लोरोसेंट सेलुलर संरचनाओं के vivo इमेजिंग में दोहराव है. स्थिरता हासिल एक कस्टम निर्मित रीढ़ की स्थिरीकरण डिवाइस और एक चतनाशून्य करनेवाली औषधि आहार है कि श्वसन प्रेरित आंदोलन विरूपण साक्ष्य कम कर देता है की एक परिणाम है. रीढ़ की स्थिरीकरण युक्ति माउस शरीर के नीचे साँस लेने में अंतरिक्ष की अनुमति देता है और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रीढ़ की clamps और सिर बढ़ते टुकड़ा (1 छवि) का उपयोग कर बनाया जा सकता है है. विधि अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, न्यूनतम इनवेसिव है और लगातार कच्चे डेटा है कि प्रयोगात्मक विश्लेषण के लिए व्यापक छवि पोस्ट प्रोसेसिंग (Fig.2 और वीडियो 1) के बिना इस्तेमाल किया जा सकता है उत्पन्न. इसलिए इस तकनीक को व्यावसायिक रूप से उपलब्ध फ्लोरोसेंट माउस लाइनों (Figs. 1-3 और वीडियो 1) की बहुतायत में सेल सेल बातचीत के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस विधि न केवल घनी आबादी सेलुलर संरचनाओं लेकिन एक को हल कर सकते हैंlso तेजी से सेलुलर कार्यों या प्रतिक्रियाओं (1 वीडियो, 2) घटनेवाला. उदाहरण के लिए, यह करने के लिए मात्रात्मक से अधिक समय के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दूरी chemotactic व्यवहार के दौरान कूच microglial प्रक्रिया की गतिशीलता को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. मात्रा का ठहराव के रूप में हम पहले से रहने वाले 8 मस्तिष्क में इमेजिंग microglial प्रतिक्रियाओं के लिए वर्णित किया जा सकता है है. इसके अलावा, यह fluorescently लेबल microspheres का उपयोग करने के लिए vivo में रीढ़ की हड्डी में microglial phagocytosis उपाय के रूप में अन्य प्रयोगात्मक दृष्टिकोण के साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है.
अलग अलग दिनों पर एक ही पशुओं की रीढ़ की हड्डी में सटीक एक ही क्षेत्र के vivo इमेजिंग में दोहराए प्रदर्शन करने की क्षमता जैविक घटना की प्रगति और घटनाओं के अनुक्रम है कि उदाहरण के लिए रोग के विकास के साथ शामिल किया जा सकता है के विच्छेदन का अध्ययन करने की अनुमति देता है . अनुदैर्ध्य अध्ययन के लिए इस पद्धति के सफल आवेदन धर्म के लिए ऊतक स्थलों की उपलब्धता पर निर्भर करता हैably क्षेत्रों है कि पहले से imaged थे स्थानांतरित. इस खाते में विशेष रूप से रीढ़ की हड्डी की चोट के अध्ययन के लिए ले जाया जा जरूरत है. सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले रीढ़ की हड्डी contusion या पृष्ठीय hemisection भारी परिगलित घाव है कि चोट के उपरिकेंद्र पर उत्पन्न होता है महत्वपूर्ण axonal और नाड़ी पुनर्व्यवस्था कि पहले imaged क्षेत्र के स्थानांतरण में बाधा सकता है का कारण बनता है जैसे रीढ़ की हड्डी की चोट मॉडल के कुछ उदाहरण के लिए. यह या तो प्रदर्शन घाव किनारे पर vivo इमेजिंग में दोहराव या एक चोट मॉडल है कि एक लक्षित, छोटे घाव, जैसे पतली सुई transection मॉडल 19 का कारण बनता है है का चयन करके दूर किया जा सकता है.
यहाँ वर्णित विधि लक्ष्य इमेजिंग क्षेत्र पर एक एकल laminectomy प्रदर्शन से रीढ़ की हड्डी के एक छोटे से क्षेत्र को उजागर. अंतर्निहित dura मामला जहां बरकरार संभव छोड़ दिया गया है. यह meninges नीचे imaged ऊतक के न्यूनतम गड़बड़ी सुनिश्चित करता है और खर्च चोट कम से कमजानवर की रीढ़ की हड्डी. समग्र स्थिरीकरण योजना छवि को आसानी से अनुकूलित किया जा सकता है या तो एक 20 laminectomy प्रदर्शन के बिना या एक छोटे या एक बड़ा इमेजिंग विंडो दिए गए अध्ययन के लिए पसंद है क्रमशः अगर कई धारावाहिक laminectomies माध्यम interlaminar अंतरिक्ष के माध्यम से .
के रूप में vivo में तकनीक में अधिकांश के साथ आम है, vivo इमेजिंग विधि में इस का उपयोग करके प्राप्त परिणामों बहुत उचित संज्ञाहरण के उपयोग पर निर्भर हो सकता है. KXA चतनाशून्य करनेवाली औषधि मिश्रण की सिफारिश की है कि यहाँ भी 21-24 से पहले किया गया है विभिन्न ऊतकों के इमेजिंग अध्ययन में प्रयोग किया जाता था और इसके लिए काफी श्वास आंदोलनों को कम करने की क्षमता के आधार पर विशेष रूप से चयनित है. अन्य संवेदनाहारी दृष्टिकोण तुलनीय परिणाम इस KXA मिश्रण करने के लिए उत्पादन हो सकता है.
रीढ़ की हड्डी इमेजिंग तकनीक इस प्रोटोकॉल में वर्णित रीढ़ की हड्डी में अनुसंधान के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है, के बाद से की क्षमता असली टी में सेल सेल बातचीत रिकॉर्ड करने के लिएIME बहुत vivo अध्ययन में शरीर विज्ञान और विकृति में रीढ़ की हड्डी की सुविधा कर सकते हैं .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
यह काम राष्ट्रीय मल्टीपल स्केलेरोसिस के द्वारा समर्थित किया गया था सोसायटी अनुदान / RG4595A1 टी के.ए. आंकड़े और फिल्मों अनुकूलित और / या Davalos एट अल., जम्मू Neurosci तरीके से reprinted डीडी और NIH / NINDS NS051470 अनुदान, NS052189 और NS066361. 2008 Mar 30, 169 (1) :1-7 2008 कॉपीराइट Elsevier से अनुमति के साथ.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rhodamine B dextran | Invitrogen | D1841 | 70 kDa, diluted in ACSF (3% w/v) |
| Ketamine HCl | Bioniche Pharma | NDC No: 67457-001-10 | Injectable, 50mg/ml |
| Anased | Lloyd, Inc. | NADA No: 139-236 | Xylazine injectable, 20mg/ml |
| Acepromazine | Vedco, Inc. | NADA No: 117-531 | Injectable,10mg/ml |
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharmaceuticals, Inc. | NDC No: 57319-760- 25 | Lubricant |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-061617 | |
| McPherson-Westcott Scissors | World Precision Instruments, Inc. | 555500S | Curved, blunt-tipscissors |
| Straight Forceps | World Precision Instruments, Inc. | 555047FT | Toothed tip forceps |
| Small vessel cauterize | Fine Science Tools | 18000-00 | |
| Gelfoam | Pharmacia Corporation (Pfizer) | Mixer Mill MM400 | |
| Compact spinal cord clamps | Narishige International | STS-A | |
| Head holding adaptor | Narishige International | MA-6N | |
| Gelseal | Amersham | 80-6421-43 | |
| Lactated Ringers | Baxter Internationl Inc. | 2B8609 | |
| Buprenex | Reckitt Benckiser | NDC No: 12496- 6757-1 | Buprenorphine,injectable |
| Baytril | Bayer AG | NADA 140-913 | Enrofloxacin, antibacterial injectable 2.27% (20ml) |
| Heating pad - Large | Fine Science Tools | 21060-10 |
References
- Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73-76 (1990).
- Tsien, R. Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 509-544 (1998).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
- Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat. Methods. 2, 932-940 (2005).
- Germain, R. N., Miller, M. J., Dustin, M. L., Nussenzweig, M. C. Dynamic imaging of the immune system: progress, pitfalls and promise. Nat. Rev. Immunol. 6, 497-507 (2006).
- Misgeld, T., Kerschensteiner, M. In vivo imaging of the diseased nervous system. Nat. Rev. Neurosci. 7, 449-463 (2006).
- Svoboda, K., Yasuda, R. Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience. Neuron. 50, 823-839 (2006).
- Davalos, D. ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo. Nat. Neurosci. 8, 752-758 (2005).
- Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo. Science. 308, 1314-1318 (2005).
- Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. Long-term dendritic spine stability in the adult cortex. Nature. 420, 812-816 (2002).
- Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 385, 161-165 (1997).
- Trachtenberg, J. T. Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex. Nature. 420, 788-794 (2002).
- Wang, X. Astrocytic Ca2+ signaling evoked by sensory stimulation in vivo. Nat. Neurosci. 9, 816-823 (2006).
- Christie, R. H. Growth arrest of individual senile plaques in a model of Alzheimer's disease observed by in vivo multiphoton microscopy. J. Neurosci. 21, 858-864 (2001).
- Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches. Nat. Neurosci. 7, 1181-1183 (2004).
- Grutzendler, J., Gan, W. B. Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain. NeuroRx. 3, 489-496 (2006).
- Takano, T., Han, X., Deane, R., Zlokovic, B., Nedergaard, M. Two-photon imaging of astrocytic Ca2+ signaling and the microvasculature in experimental mice models of Alzheimer's disease. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1097, 40-50 (2007).
- Jung, S. Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion. Mol. Cell. Biol. 20, 4106-4114 (2000).
- Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. In vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord. Nat. Med. 11, 572-577 (2005).
- Kim, J. V. Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites. J. Immunol. Methods. 352, 89-100 (2010).
- Shakhar, G. Stable T cell-dendritic cell interactions precede the development of both tolerance and immunity in vivo. Nat. Immunol. 6, 707-714 (2005).
- Tadokoro, C. E. Regulatory T cells inhibit stable contacts between CD4+ T cells and dendritic cells in vivo. J Exp Med. 203, 505-511 (2006).
- Lindquist, R. L. Visualizing dendritic cell networks in vivo. Nat. Immunol. 5, 1243-1250 (2004).
- Schwickert, T. A. vivo imaging of germinal centres reveals a dynamic open structure. Nature. 446, 83-87 (2007).
