Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

Published: January 5, 2012 doi: 10.3791/2760
Automatic Translation
1, 1,2
1Gladstone Institute of Neurological Disease, University of California, San Francisco, 2Department of Neurology, University of California, San Francisco

Summary

Fare spinal kolon stabilize ve tekrarlayan gerçekleştirmek için minimal invaziv bir protokol

Abstract

Farelerde genetik olarak belirli bir hücre türleri 2-3 in vivo 4-7 sayısız dokuların fizyolojik ve patolojik süreçler hakkındaki bilgimizi önemli ölçüde genişletti floresan proteinleri ifade etmek için tasarlanmış iki foton mikroskopi 1 kullanarak in vivo görüntüleme. Merkezi sinir sistemi (MSS) çalışmalarda, bir roman bolluk ve altında nöronlar, astrositler, mikroglia, hücrelerin davranışları hakkında sık sık beklenmedik bulgular üretti beyinde in vivo görüntüleme alanında geniş bir uygulama olmamıştır fizyolojik veya patolojik koşullar 8-17. Ancak, çoğunlukla teknik komplikasyonlar yaşayan fare omurilik çalışmalarda in vivo görüntüleme uygulanması sınırlıdır. Özellikle omurilik, akciğer ve kalp görüntüleme yaşayan omurilik zor bir görev yapan önemli bir hareket artifakı anatomik yakınlık üretir. Biz, omurga stabilizasyon, solunum kaynaklı hareketlerin azaltılması ve böylece iki foton mikroskopi in vivo fare omurilik görüntü kullanımının kolaylaştırılması omurilik görüntüleme doğasında kısıtlamaların üstesinden gelen yeni bir yöntem geliştirdi . Bu önemli bir azalma, solunum bağlı hareketleri sonucu, derin bir anestezi yöntemi ile özelleştirilmiş bir spinal stabilizasyon cihaz birleştirerek elde edilir. Bu video protokol, doku hasarı minimumda tutmak ve kanama uzun süre boyunca stabil fizyolojik şartlar altında muhafaza edilebilir yaşayan omurilik küçük bir alanda açığa çıkarmak için nasıl gösterir. Temsilci ham görüntüleri yüksek çözünürlükte in vivo ayrıntılı olarak mikroglia arasındaki yakın ilişki ve damarsal satın aldı. Timelapse dizisi canlı fare omurilik mikrogliyal süreçlerin dinamik davranışı gösterir. Ayrıca, aynı z kare sürekli bir tarama göstermekresmi hizalaması alım sonrası gerekmez görüntü ve / veya timelapse filmleri yığınları oluşturmak için bu yöntem elde edebilirsiniz olağanüstü istikrar var. Sonuç olarak, in vivo olarak devam eden fizyolojik veya patolojik süreçler uzunlamasına çalışmalar için izin veren bu yöntem, daha sonra timepoints omurilik aynı bölgede tekrar ve Reimage nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Protocol

1. Bina spinal stabilizasyon cihazı

  1. Narishige STS-Compact Omurilik Kelepçeleri ve Narishige MA-6N kafa tutma adaptörü sipariş edin.
  2. Özel tasarım ve spinal kolon ve kuyruk kenetli iken hayvan kafası desteklenen böylece paslanmaz çelik taban plakası iki Narishige parçaları hizada tutun. Tüm cihaz genellikle indirdi mikroskop sahnede mikroskop mercek altında uygun gerektiğini aklınızdan çıkarmayın.

2. Hayvan cerrahisi

  1. Pre-ısı mikroskop bir hava ısıtma cihazı ile oda ve 37 bakımını ° C
  2. Hayvan tartılır ve 100 mg ketamin, 15 mg ksilizin ve steril koşullar altında% 0.9 NaCl çözeltisi seyreltilir kg vücut ağırlığı başına 2.5 mg acepromazine, anestezik karışımı yapmak.
  3. Anestezik karışımı (KXA) intraperitoneal olarak enjekte edilerek hayvan anestezisi. Düzenli ayak pinching boyunca derin anestezi sağlamak için yapılmalıdırdeney. Saatlik ya da gerektiği gibi orijinal yarım doz ile tamamlayın.
  4. Cerrahi işlem yaparken termal destek sağlamak amacıyla küçük bir hayvan ısıtma yastığı kullanın.
  5. Korneal dehidratasyon ve zarar görmesini önlemek için yapay gözyaşı merhemi gözleri üzerine uygulayın.
  6. Kırparak bir cihaz ile ve daha sonra keskin bir bıçak ile kesi etrafındaki alanı tamamen saç kaldırmak için öncelikle hayvanın arka Tıraş.
  7. Tıraş edilen kıllar çıkarın ve alkol ped ile traş cilt yüzeyi dezenfekte edin.
  8. İstenen spinal seviye (torakal vertebra burada görüldüğü gibi) cilt üzerinde küçük bir (~ 1.5 cm) uzunlamasına insizyon yapın.
  9. Dikkatli bir şekilde geri çekilmeden derialtı bağ dokusu tarafından arka kas Açığa.
  10. Dikkatlice istenilen düzeyde paravertebral kaslar omurga ayırın. Her spinöz sürecinin her iki tarafın kasları ayırmak ve sonra bir müstakil kasları kazımak mümkün olan en az kesiler gerçekleştirinlaminer yüzeyinden yolu.
  11. Laminektomi hemen rostral ve kaudal silinecektir lamina seçin ve omurganın her iki tarafta spinal kelepçeler için giriş siteler hazırlamak. Dikkatle kelepçeler eklenecektir dört cepleri yapmak kas dokusunun yerini.
  12. Lamina altında kavisli ucu künt makas omurilik dokunmadan güvenli girilmesine olanak ucu düz dişli forseps ile omuriliğe kaldırın. Yavaş yavaş, sonra bir tarafta diğer tarafta kemik kesme ve laminektomi gerçekleştirin.
  13. Bir pamuklu bir bez kullanın ya da ufak bir kanama sınırlamak için kesiler yanında hazır kesilmiş küçük gelfoam emilebilir jelatin sünger parçaları yerleştirin. Gerekirse daha fazla kanama kontrolü için küçük bir gemi cauterizer kullanın. Doku yıkama önceden ısıtılmış steril yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) kullanın.

3. In vivo görüntüleme için omuriliğe ve hazırlık Stabilizasyonu

  1. Plac e spinal stabilizasyon cihazın taban plakası üzerinde bir yükseklik pad üzerinde hayvan ve kafa kafa tutan adaptörü güvenli.
  2. STS-bir cihaz, laminektomi (Şekil 1) yan önceden hazırlanmış ceplerinde hayvan ön-arka eksen boyunca spinal kelepçeler yerleştirin . Iki kelepçeler ~ 45 bir açıyla yerleştirilmiş olmalıdır ° maruz spinal kord (Şekil 1) üzerinde bir suya daldırma lens düşürmek için yeterli alana izin hayvan postero-kaudal eksenine göre.
  3. STS-bir cihaz hayvanın vücut görüntüleme deneyleri (Şekil 1) süresi için yükseklik pad çıkarılmasından sonra havada asılı böylece kuyruk dibinde üçüncü kelepçe yerleştirin.
  4. ACSF spinal kord bakım ve in vivo görüntüleme için bu çözüm mikroskop objektif daldırma kolaylaştırmak için Gelseal (Amersham Biosciences Corp) maruz omurilik etrafındaki küçük bir kuyu oluşturun.
jove_title "> 4 fare omurilik in vivo görüntüleme iki foton mikroskobu ile

  1. Önceden ısıtılmış odasının içine mikroskop kapsayan spinal stabilizasyon cihaz hayvan aktarın ve alçaltılmış bir mikroskop sahnede düz mercek altında (Şekil 1) laminektomi yerleştirerek sabitleyin.
  2. ACSF çözüm, spinal kelepçeler veya Gelseal temas edip etmediğini emin olmak için dikkatli bir şekilde bir su-immersion lens indirin.
  3. Ilgi alanlarını belirlemek ve bunun üzerine odaklanmak Epifloresans kullanın. Lazer tarama modunu açın ve in vivo görüntüleme fluorophores için filtreler görüntülü doku mevcut uygun iki foton lazer dalgaboyu, dichroics ve bandpass kullanarak gerçekleştirmek.

5. Tekrarlanan görüntüleme ve ameliyat sonrası bakım

  1. Görüntüleme deneyler sonunda, spinal stabilizasyon cihazdan fare kaldırmak ve Gelseal laminektomi etrafındaki alanı dikkatlice silin.Alan iyi temizleyin.
  2. Geri Yükleme ve laminektomi üzerinde sırt kasları sütür.
  3. Restore cilt üzerinde laminektomi ve sütür, betadin çubukla.
  4. Bir besin ve hidrasyon ek olarak 1 ml Laktatlı Ringers çözüm (Baxter Healthcare), subkutan yanı sıra analjezik tedavisi (0,1 mg / kg buprenorfin) sağlayın.
  5. Antiseptik tedavi intraperitoneal (fare başına düşen 0.03 ml,% 2.27 enrofloxacin enjektabl antibakteriyel solüsyon) yönetin.
  6. Anesteziden tam iyileşme kadar bir ısıtma pedi üzerinde hayvan ve daha sonra tek tek bu ev.
  7. Ameliyat sonrası 2-3 gün için cerrahi ve analjezik tedavinin her 8-12 saat sonra ilk 3-5 gün için günlük antiseptik yönetim tekrarlayın. Normal davranış ve tam bir iyileşme sağlamak için günlük hayvan izleyin.
  8. Aynı laminektomi ile yeniden görüntüleme, sütüre cilt ve kasların yeniden ve bölüm 2 açıklanan adımları yineleyin - 4.
  9. Önceki teknolojik sıçramalarda yeniden bulmakPLC `e sürekli olarak kan damarsal daha önce 10 açıklandığı gibi bir harita kullanarak alanı görüntülenmiş.

6. Temsilcisi sonuçları

Bütün hayvan prosedürleri Kaliforniya, San Francisco Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından belirlenen kurallar çerçevesinde ve Federal düzenlemelere göre. Spinal stabilizasyon aygıtı ve bir fare, bir mikroskop objektif altında cihaz üzerinde konumlandırma gösteren şematik bir resmi Şekil 1'de gösterilmiştir. Hayvanın gövdesinin altındaki solunum hareketleri için yeterli oda izin verme omurilik in vivo görüntüleme istikrarlı sağlar. Onu Cx3cr1 GFP / + transgenik fareler 18 spinal kord in vivo olarak görüntülenmiş oldu gibi Şekil 2 mikroglia ve damarsal arasında yakın bir ilişki gösterir , mikroglia endojen GFP ile etiketlenmiş. Şekil 3 yakalanma gösterir örneklerspinal aksonlar floresan protein (YFP-H hat 3) ve mikroglia (Cx3cr1 GFP / + fareler) ifade farelerde aynı omurilik alanları yapıldı gibi in vivo görüntüleme.

Şekil 1
Şekil 1: İki foton mikroskopi kullanılarak in vivo görüntüleme için fare omurganın Sabitleme (A) ısmarlama çelik taban plakası STS-Narishige kompakt omurilik kelepçeler ve MA-6N Narishige destek ve hizalamak için kullanılır . Burada görüldüğü gibi kafa adaptörü tutarak (B), spinal istikrar cihaz üzerinde bir KXA anestezi ile anestezi yetişkin transgenik farelerin doğru yerleştirilmesi . Eklemek spinal kelepçeler hemen rostrally ve kaudal laminektomi ve açık omurilik dokusu yerleşimi gösterir.

<img alt = "Şekil 2" src = "/ files/ftp_upload/2760/2760fig2.jpg" />
Şekil 2 anestezi farelerin omurilik yüksek yoğunluk mikroglia hücreleri ve kan damarları in vivo görüntüleme. Öngörülen ama olmayan hizalı z yığınlarının (A), kan damarları ile yakın bir CX3CR1 GFP / + fare (kırmızı, rodamin dekstran iv enjeksiyon ile etiketli) spinal kord çok yoğun GFP pozitif mikroglia (yeşil) . (B) Yüksek büyütmeli görüntü (A) tek bir mikrogliyal hücre geminin etrafında genişletilmiş süreçleri ve omurilik parankimi doğru bir kan damarı duvarına bağlı olarak etiketlenmiş. Ölçek barlar, 10μm.

Şekil 3
Şekil 3 farklı günlerde taşındı ve anestezi farelerin omurilik reimaged aynı aksonal segment ve mikroglia in vivo görüntüleme de Tekrarlanan. (A) YFP-lab 0 ve 5 gün eLED aksonlar. (B). Çevrelerindeki aynı vasküler yapılar ve mikroglia hücreleri, 0 ve 1 gün Cx3cr1 GFP / + farelerin omurilik in vivo olarak görüntülenmiş . Ölçek barlar, 10μm.

Movie 1 Temsilcisi timelapse dizisi in vivo fare omurilik satın aldı. Bu dizi detay ince floresan yapıları ile yoğun nüfuslu bir doku içinde zamanla damar (kırmızı, rodamin dekstran iv enjeksiyon ile etiketli) mikroglia Proses dinamiği (yeşil) ve bunların etkileşimleri gösterir. Ham görüntüleri sadece arka plan gürültü, parlaklık ve kontrast için düzeltilmiş ve timelapse film görüntü hizalama olmadan, ortalama veya bireysel uçakları z seçim z projelendirme sıralı olarak elde edilen görüntü yığınları tarafından inşa edilmiştir. Kan damarları mikroglia görüntü olarak z uçaklar benzer bir aralık içerisinde. Z düzlemi derinliği: 38 mm.oad/2760/Davalos_Movie_1.mov "> film izlemek için buraya tıklayın.

Film 2 Timelapse dizisi, tek bir z-düzlemi düzeyinde görüntüleme yöntemi ham istikrar göstermektedir . KXA anestezi altında spinal stabilizasyon cihaz yerleştirilir CX3CR1 GFP / + fareler omurilikte aynı tek z-düzlemi Hızlı satın alma, daha hızlı bir tarama 1 kare / s hızında ardışık çerçeve arasındaki minimum görüntü deplasman gösteriyor farenin solunum hızı. Küçük kalan deplasman muhtemelen kalp atışı nedeniyle film izlemek için buraya tıklayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Istikrarlı ve tekrarlayan yoğun nüfuslu iki foton mikroskopi kullanılarak anestezi farelerin omurilik floresan hücresel yapılarının in vivo görüntüleme yöntemi, burada açıklanan sağlar. Yakalanan istikrar, ısmarlama bir spinal stabilizasyon cihaz ve solunum kaynaklı hareket artifakı azaltan bir anestezik rejiminin bir sonucudur. Spinal stabilizasyon aygıtı fare gövdesinin altında nefes alan sağlar ve piyasada mevcut spinal kelepçeler ve baş montaj parçası (Şekil 1) kullanılarak inşa edilebilir. Bu yöntem son derece minimal invaziv, tekrarlanabilir ve sürekli geniş görüntü post-processing (Şekil 2 ve Video 1) olmadan deneysel analizler için kullanılabilir ham veri oluşturur. Bu teknik, bu yüzden piyasada bulunan floresan fare hatları (Şekil 1-3 ve Video 1) bolluk içinde hücre-hücre etkileşimleri çalışmaları için kullanılabilir. Bu yöntem, yoğun nüfuslu hücresel yapılar değil, sadece bir çözebilirsinizLSO hızla oluşan hücresel fonksiyonları veya yanıtları (Video 1, 2). Örneğin, nicel yanı sıra zamanla mesafe kemotaktik davranış sırasında katedilen mikrogliyal sürecinin dinamiklerini ölçmek için kullanılabilir. 8 canlı beyin görüntüleme mikrogliyal yanıtları daha önce açıklandığı gibi, Niceleme yapılabilir . Ayrıca, in vivo omurilik mikrogliyal fagositoz ölçmek için floresan etiketli mikroküreler kullanımı gibi diğer deneysel yaklaşımlar ile kombinasyon halinde kullanılabilir.

, In vivo görüntüleme farklı günlerde aynı hayvanların omurilik tam olarak aynı bölgede tekrarlayan gerçekleştirmek için yeteneği, biyolojik olayların, örneğin, hastalığın gelişimi ile ilgili olabilir olaylar dizisi ilerlemesini ve diseksiyon eğitim sağlar. . Boylamsal çalışmalar için bu yöntemi başarılı bir uygulama din doku yerlerinden mevcudiyetine dayanırhünerle önceden görüntülenmiş olan alanlar yerleşti. Bu, omurilik yaralanması çalışmaları için özellikle dikkate alınması gerekir. Örneğin, bazı yaralanma üssünde oluşturulan büyük nekrotik lezyon daha önce görüntülü bir alana taşınması engelleyebilecek önemli aksonal ve vasküler yeniden düzenlenmesi neden olan spinal kord kontüzyonu veya dorsal hemisection gibi yaygın olarak kullanılan spinal kord yaralanması modelleri. Bu lezyonun kenarında in vivo görüntüleme ya sahne tekrarlayan ya da böyle ince bir iğne transeksiyonu modeli 19 olarak hedeflenen, daha küçük bir lezyon neden olan bir yaralanma modeli seçerek üstesinden gelinebilir .

Burada açıklanan yöntem, hedef görüntüleme alanı üzerinden tek bir laminektomi gerçekleştirerek, omurilik küçük bir bölümü ortaya çıkarır. Altta yatan bir dura maddenin mümkün olan yerlerde bozulmadan bırakılmıştır. Bu görüntülü meninksler altındaki doku minimal pertürbasyon sağlar ve oluşan yaralanmanın en aza indirirhayvan omurga. Genel istikrar düzeni kolayca interlaminar uzayda laminektomi 20 yapmadan veya daha küçük veya daha büyük bir görüntüleme penceresi, belirli bir çalışma için tercih sırasıyla birden çok seri laminektomileri aracılığıyla ya resme adapte olabilir .

In vivo teknikler en yaygın olduğu gibi, bu in vivo görüntüleme yöntemi kullanılarak elde edilen sonuçlar, uygun anestezi kullanımı büyük ölçüde bağlıdır. Burada tavsiye edilir KXA anestezik karışımı farklı dokuların görüntüleme çalışmaları da 21-24 önce kullanılan ve solunum hareketleri önemli ölçüde azaltmak için yeteneğine göre özel olarak seçildi . Diğer anestezik yaklaşımlar bu KXA karışımı karşılaştırılabilir sonuçlar doğurabilir.

Yeteneği gerçek t hücre-hücre etkileşimleri kaydetmek için bu protokolü açıklanan omurilik görüntüleme tekniği, omurilik araştırma için güçlü bir araç sağlarime fizyolojisi ve patolojisi omurilik in vivo çalışmalar büyük ölçüde kolaylaştırabilir .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Biz ifşa etmek başka bir şey var.

Acknowledgments

Bu çalışma, Ulusal Multipl Skleroz tarafından desteklenen Toplum hibe uyarlanmış ve / veya Davalos ve ark. J Neurosci Yöntemleri yeniden basıldı KA Şekiller ve filmler için DD ve NIH / NINDS hibe NS051470 NS052189 ve NS066361 RG4595A1 / T. Mar 30 2008, Elsevier gelen izni ile 169 (1) :1-7 2008 Telif Hakkı,.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rhodamine B dextran Invitrogen D1841 70 kDa, diluted in
ACSF (3% w/v)
Ketamine HCl Bioniche Pharma NDC No: 67457-001-10 Injectable, 50mg/ml
Anased Lloyd, Inc. NADA No: 139-236 Xylazine injectable,
20mg/ml
Acepromazine Vedco, Inc. NADA No: 117-531 Injectable,10mg/ml
Artificial tears ointment Phoenix Pharmaceuticals, Inc. NDC No: 57319-760- 25 Lubricant
Betadine Fisher Scientific 19-061617
McPherson-Westcott Scissors World Precision Instruments, Inc. 555500S Curved, blunt-tipscissors
Straight Forceps World Precision Instruments, Inc. 555047FT Toothed tip forceps
Small vessel cauterize Fine Science Tools 18000-00
Gelfoam Pharmacia Corporation (Pfizer) Mixer Mill MM400
Compact spinal cord clamps Narishige International STS-A
Head holding adaptor Narishige International MA-6N
Gelseal Amersham 80-6421-43
Lactated Ringers Baxter Internationl Inc. 2B8609
Buprenex Reckitt Benckiser NDC No: 12496- 6757-1 Buprenorphine,injectable
Baytril Bayer AG NADA 140-913 Enrofloxacin,
antibacterial injectable
2.27% (20ml)
Heating pad - Large Fine Science Tools 21060-10

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73-76 (1990).
  2. Tsien, R. Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 509-544 (1998).
  3. Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
  4. Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat. Methods. 2, 932-940 (2005).
  5. Germain, R. N., Miller, M. J., Dustin, M. L., Nussenzweig, M. C. Dynamic imaging of the immune system: progress, pitfalls and promise. Nat. Rev. Immunol. 6, 497-507 (2006).
  6. Misgeld, T., Kerschensteiner, M. In vivo imaging of the diseased nervous system. Nat. Rev. Neurosci. 7, 449-463 (2006).
  7. Svoboda, K., Yasuda, R. Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience. Neuron. 50, 823-839 (2006).
  8. Davalos, D. ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo. Nat. Neurosci. 8, 752-758 (2005).
  9. Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo. Science. 308, 1314-1318 (2005).
  10. Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. Long-term dendritic spine stability in the adult cortex. Nature. 420, 812-816 (2002).
  11. Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 385, 161-165 (1997).
  12. Trachtenberg, J. T. Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex. Nature. 420, 788-794 (2002).
  13. Wang, X. Astrocytic Ca2+ signaling evoked by sensory stimulation in vivo. Nat. Neurosci. 9, 816-823 (2006).
  14. Christie, R. H. Growth arrest of individual senile plaques in a model of Alzheimer's disease observed by in vivo multiphoton microscopy. J. Neurosci. 21, 858-864 (2001).
  15. Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches. Nat. Neurosci. 7, 1181-1183 (2004).
  16. Grutzendler, J., Gan, W. B. Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain. NeuroRx. 3, 489-496 (2006).
  17. Takano, T., Han, X., Deane, R., Zlokovic, B., Nedergaard, M. Two-photon imaging of astrocytic Ca2+ signaling and the microvasculature in experimental mice models of Alzheimer's disease. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1097, 40-50 (2007).
  18. Jung, S. Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion. Mol. Cell. Biol. 20, 4106-4114 (2000).
  19. Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. In vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord. Nat. Med. 11, 572-577 (2005).
  20. Kim, J. V. Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites. J. Immunol. Methods. 352, 89-100 (2010).
  21. Shakhar, G. Stable T cell-dendritic cell interactions precede the development of both tolerance and immunity in vivo. Nat. Immunol. 6, 707-714 (2005).
  22. Tadokoro, C. E. Regulatory T cells inhibit stable contacts between CD4+ T cells and dendritic cells in vivo. J Exp Med. 203, 505-511 (2006).
  23. Lindquist, R. L. Visualizing dendritic cell networks in vivo. Nat. Immunol. 5, 1243-1250 (2004).
  24. Schwickert, T. A. vivo imaging of germinal centres reveals a dynamic open structure. Nature. 446, 83-87 (2007).

Tags

Nörobilim Sayı 59 Omurilik görüntüleme, aksonlar mikroglia kan damarlarının
Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in <em>vivo</em> Görüntüleme
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Davalos, D., Akassoglou, K. In… More

Davalos, D., Akassoglou, K. In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy. J. Vis. Exp. (59), e2760, doi:10.3791/2760 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter