Summary
एक
Protocol
1. इंजेक्शन के लिए तैयारी वायरस
- rAAVs सिफारिश वाणिज्यिक विक्रेता से खरीदे गए थे, लेकिन वे भी एक ही प्रयोगशाला में उत्पादित किया जा सकता है (नीचे चर्चा देखें). वायरस समाधान आमतौर पर ~ 1x10 12 मिली लीटर प्रति जीनोम प्रतियां (जीसी / एमएल) की एक टिटर पर निर्मित है और कक्षों की एक बड़ी संख्या में हेरफेर पूर्ण टिटर पर इस्तेमाल किया जा सकता है. वैकल्पिक रूप से, वे विरल लेबलिंग के वांछित स्तर का उत्पादन करने के लिए पतला किया जा सकता है. उपयुक्त कमजोर पड़ने उपयोगकर्ता द्वारा निर्धारित किया जाना चाहिए, लेकिन 1:10 कमजोर पड़ने शुरू करने की सिफारिश की है.
- बर्फ पर वायरस के तुरंत पहले गला लें, पहले का उपयोग. एक छोटी सी (~ 250μl) पीसीआर ट्यूब में वांछित वायरस समाधान के पूर्व मन्दन मात्रा स्थानांतरण. वायरस एक टिशू कल्चर हुड में बाँझ DPBS का एक उचित मात्रा का उपयोग कर समाधान पतला. बर्फ पर पतला वायरस समाधान स्टोर जब तक यह आवश्यक है.
नोट: सभी वायरस से निपटने के अनुसार, एक जैव सुरक्षा प्रोटोकॉल के साथ अपने संस्थान द्वारा अनुमोदित में आयोजित किया जाना चाहिए
2. सिरिंज लोड हो रहा है और उपकरणों विधानसभा
- लोड हो रहा है गिलास सिरिंज सुई कनेक्ट और धीरे सवार खींच द्वारा पीसीआर ट्यूब से वायरस समाधान आकर्षित. सवार खींचो जब तक हवा का एक बहुत छोटा बुलबुला सिरिंज में देखा जा सकता है है, यह इंगित करता है कि समाधान के सभी सिरिंज में है और लोड हो रहा है सुई में छोड़ दिया है नहीं है. वैकल्पिक रूप से, निष्क्रिय डाई की एक छोटी राशि समाधान के लिए जोड़ा जा सकता है यह दृश्य बनाना.
नोट: एक छोटे पीसीआर ट्यूब लोड हो रहा है सुई आम तौर पर काफी लंबे समय के अधिकांश अन्य ट्यूबों के नीचे तक पहुँचने नहीं है के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए. - लोड हो रहा है सुई निकालें और एक सिरिंज पंप के सिरिंज ब्लॉक पर सिरिंज जगह, यह सिरिंज सेवक के साथ हासिल है.
- धीरे सिरिंज में संयोजी टयूबिंग की एक अंत डालने, सुई धारक में दूसरे छोर सम्मिलित. सुई धारक में इंजेक्शन सुई डालें. इंजेक्शन सुई के अंत सीधे सुई धारक के संयोजी टयूबिंग अंदर के अंत से संपर्क करना चाहिए.
- धीरे धीरे सवार दबाना मैन्युअल संयोजी टयूबिंग के माध्यम से समाधान धक्का. पुश जब तक समाधान के एक छोटे से ड्रॉप इंजेक्शन सुई की नोक पर दिखाई देता है.
- ध्यान ढकेलनेवाला ब्लॉक करने के लिए अगले सवार की स्थिति और यह ढकेलनेवाला ब्लॉक वर्ग के साथ जगह में सुरक्षित हैं.
- इंजेक्शन पैरामीटर सेट: इंजेक्शन दर लगभग 8μl/min (~ 130nl / एस) होना चाहिए, 1-2ul आमतौर पर इंजेक्शन की मात्रा है, सिरिंज आकार (दिशा निर्देशों के लिए सिरिंज पंप पुस्तिका को देखें) का उपयोग कर रहे हैं के लिए उपयुक्त सिरिंज व्यास का चयन करें.
- Hotplate सेट 38 ~ डिग्री सेल्सियस और एक कागज तौलिया या अन्य पतली बाधा के साथ कवर वसूली चरण के दौरान पिल्ले की रक्षा के लिए.
3. इंजेक्शन प्रक्रिया और पिल्ला वसूली
- इंजेक्शन के लिए उन्हें ठंड संज्ञाहरण के एक IACUC अनुमोदित प्रोटोकॉल निम्नलिखित subjecting द्वारा P0 या P1 माउस पिल्ले की तैयारी. पर पानी और बर्फ के स्थान के साथ एक कुछ कागज तौलिए गीला हो जाना. कागज तौलिया (उन्हें अच्छी तरह से अलग रखना) पिल्ले की वांछित संख्या (4-5) प्लेस और धीरे से पिल्ले पर कागज तौलिए गुना ताकि वे नम कागज तौलिया के द्वारा कवर कर रहे हैं. धीरे कागज तौलिए के शीर्ष पर एक कुचल बर्फ की एक छोटी राशि जगह और लगभग 5 मिनट के लिए पिल्ले को सेते हैं. पिल्ले बर्फ पर रखा जा सकता है, 15 मिनट के लिए और ठीक बाद पुनर्प्राप्त.
- बाद पिल्ला पर्याप्त anesthetized है, यह एक बढ़ते खंड पर जगह (हम एक स्टायरोफोम ब्लॉक है कि आम तौर पर 15ml ट्यूबों रखती का उपयोग करें) और यह इंजेक्शन साइट के लिए सबसे अच्छा उपयोग के लिए स्थिति. प्रांतस्था के लिए यह आसान है अपने पेट पर पशु फ्लैट रखना, जबकि सेरिबैलम के लिए यह उपयोगी है ब्लॉक के किनारे पर है पिल्ला सिर की स्थिति के लिए खोपड़ी के पीछे करने के लिए बेहतर पहुँच प्रदान. पिल्ला एक बैंड सहायता के साथ जगह में सुरक्षित किया जा सकता है, यदि वांछित.
- जगह में एक हाथ से है पिल्ला सिर, जबकि सुई मैन्युअल दूसरे हाथ से वांछित साइट पर है पकड़ो खोपड़ी के माध्यम से डाला. यह त्वचा के लिए यह इंजेक्शन के दौरान बढ़ने से रोकने के तंग पुल करने के लिए उपयोगी है. प्रांतस्था के लिए यह उपयोगी है खोपड़ी के लैम्ब्डा सीवन के रूप में एक अच्छी तरह से परिभाषित संरचनात्मक मील का पत्थर के सापेक्ष इंजेक्शन, बनाने, के रूप में यह भविष्य के इंजेक्शन में सहायता करेगा. सेरिबैलम ऊतक सीधे colliculus करने के लिए दुम झूठ बोल रही है की एक पतली पट्टी के रूप में खोपड़ी के माध्यम से देखा जा सकता है. गहराई तक जो सुई डाला जाना चाहिए अलग - अलग जानवरों और दबाव के बीच थोड़ा भिन्न होता है और सुई पर पूर्व निर्धारित मार्करों द्वारा लगाया जा सकता है है, लेकिन हम प्रांतस्था और सेरिबैलम के लिए लगता है कि ~ 0.5 की गहराई - सतह से 1mm आम तौर पर उपयुक्त है. अन्य साइटों के लिए सम्मिलन गहराई अंत उपयोगकर्ता द्वारा प्रयोगात्मक निर्धारित करना चाहिए.
नोट: सुई आसानी से खोपड़ी घुसना चाहिए, अगर यह नहीं है, नहीं भी मुश्किल धक्का के रूप में इस जानवर को घायल कर सकते हैं. सुई का स्थान बदलें और धीरे फिर से कोशिश. - वायरस समाधान इंजेक्षन. इंजेक्शन शुरू हैएड द्वारा पंप पर स्टार्ट बटन दबाने या एक पैर पेडल निराशाजनक इंजेक्टर का इस्तेमाल किया दबाव के मॉडल पर निर्भर करता है. एक पैर पेडल के अभाव में यह करने के लिए बटन दबाने के साथ एक सहयोगी की सहायता के लिए अनावश्यक हाथ आंदोलनों कि इंजेक्शन को प्रभावित कर सकता है कम से कम की सिफारिश की है.
- चुना गया मात्रा इंजेक्शन के बाद किया गया है, कुछ सेकंड के लिए जगह में सुई और रखने के फिर धीरे से यह फिसलने से बाहर सुचारू द्वारा सुई हटाने. जगह में है पिल्ला सिर पकड़ बाहरी आंदोलनों को कम करने के लिए सुनिश्चित करें. चूंकि इंजेक्शन उपकरण साफ है और इथेनॉल के साथ प्रयोगों के बीच निष्फल और घाव छोटा है, एंटीसेप्टिक का उपयोग अनावश्यक है.
- कवर hotplate पर 38 ~ तापमान पर सेट के साथ पिल्ला प्लेस ° यह वसूली आमतौर पर 5-10 मिनट के लिए गर्म सी. इस समय के दौरान आप अन्य पिल्ले इंजेक्शन जारी रख सकते हैं.
- बाद पिल्ले के सभी बरामद किया है (वे गुलाबी और बढ़ होना चाहिए) घर के बिस्तर के एक हिस्से को लेने के लिए और धीरे इसके साथ पिल्ले रगड़. माँ को एक समूह के रूप में पिल्ले लौटें.
नोट: यह बहुत महत्वपूर्ण है यकीन है कि पिल्ले गर्म और घर बिस्तर उजागर करने के लिए पहले कर रहे हैं उन्हें माँ को लौटने और उन्हें एक समूह के रूप में वापस करने है. ऐसा करने में विफलता घायल या हत्या पिल्ले माँ में परिणाम सकता है.
4. उपकरण सफाई
- बाद इंजेक्शन पूरा हो गया है और पिल्ले अपनी माँ को लौट गया है है, एसीटोन या 70% इथेनॉल के साथ पूरी तरह से लोड हो रहा है सिरिंज से इंजेक्शन सेटअप साफ. इंजेक्शन सेटअप कई बार के माध्यम से समाधान फ्लश, ताजा समाधान प्रत्येक समय का उपयोग कर. यह किसी भी शेष वायरस समाधान निकालने और precipitates जाएगा. एसीटोन या इथेनॉल तो लुप्त हो जाना जाएगा.
नोट: एसीटोन की सफाई के लिए पसंद है, लेकिन अगर आपके सेटअप cyanoacrylate चिपकने के रूप में किसी भी एसीटोन संवेदनशील घटकों का उपयोग करता है, तो इन चरणों के लिए 70% इथेनॉल का उपयोग. - एक उपयुक्त biohazard कंटेनर में ब्लीच त्यागें और अपशिष्ट के साथ क्षेत्र में काम कर रहे कीटाणुरहित.
5. विश्लेषण
- वांछित एक IACUC अनुमोदित इच्छामृत्यु विधि का उपयोग कर उम्र में पशुओं का बलिदान. छिड़काव निर्धारण करने के लिए वयस्क पशुओं में, विशेष रूप से संक्रमित न्यूरॉन्स के बाद दृश्य में सहायता के लिए सिफारिश की है.
- मानक immunostaining प्रक्रियाओं के लिए फ्लोरोसेंट संकेत बढ़ाना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. संक्षेप में, 100 vibratome वर्गों तैर सुक्ष्ममापी पीबीएस 1% X-100 ट्राइटन के साथ permeabilized हैं और 1% Triton एक्स 100% 10 सामान्य बकरी सीरम पीबीएस में अवरुद्ध है. धारा 4 बजे प्राथमिक एंटीबॉडी रातोंरात ° सी, धोने और अतिरिक्त अवरुद्ध द्वारा बाद के साथ समाधान को रोकने में incubated हैं. धारा तो कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ समाधान को रोकने में incubated हैं, अच्छी तरह से धो, स्लाइड्स पर घुड़सवार और विरोधी फीका बढ़ते मीडिया के साथ coverslipped. Cryosections भी हो लेबल न्यूरॉन्स कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन अंतर्जात प्रतिदीप्ति खो दिया जा सकता है.
6. प्रतिनिधि परिणाम:
एक सफल इंजेक्शन प्रक्रिया नहीं नमूदार ऊतकों को नुकसान या जानवर पर अन्य बीमार प्रभाव के साथ इंजेक्शन साइट के क्षेत्र में न्यूरॉन्स की मजबूत संक्रमण का उत्पादन होगा. जैसा कि चित्र 1 में सचित्र है, संक्रमण के प्रसार Cre रिपोर्टर (ROSA26R) चूहों विभिन्न संरचनात्मक साइटों में 12 rAAV8-Cre के साथ इंजेक्शन में मनाया जा सकता है. प्रांतस्था और बेहतर colliculus जैसे विशिष्ट क्षेत्रों में इंजेक्शन, आमतौर पर आसन्न क्षेत्रों (छवि 1 ए बी) के लिए कम से कम प्रसार के साथ स्थानीय संक्रमण उत्पन्न करते हैं. उच्च टिटर वायरस समाधान का उपयोग हिप्पोकैम्पस जैसे आसन्न क्षेत्रों, अधिक संभावना है (छवि 1A) के संक्रमण बनाता है. विरल संक्रमण में कम टिटर वायरस समाधान परिणाम है, जो आम तौर पर इंजेक्शन साइट के पास रहता है, के रूप ROSA26R संवाददाता चूहों (चित्रा 1C - डी) के midline में rAAV8 Cre के अनुमस्तिष्क इंजेक्शन में दिखाया के साथ इंजेक्शन. हम पुनर्संयोजन ROSA26R संवाददाता चूहों में मनाया rAAV8-Cre के इंजेक्शन के बाद 2 दिनों के भीतर, सुझाव है कि संक्रमण, पुनर्संयोजन, रिपोर्टर जीन की अभिव्यक्ति और सब अपेक्षाकृत तेजी से हो सकता है. इसके अतिरिक्त, हम सफलतापूर्वक इस तकनीक का इस्तेमाल किया है एक गैर रोज़ा floxed सशर्त एलील का उपयोग ठिकाना पर जीन विलोपन के प्रभाव का अध्ययन है, जो के परिणामों कहीं प्रकाशित किया जाएगा.
संक्रमित कोशिकाओं की संख्या इंजेक्शन वायरल समाधान के टिटर के साथ सहसंबंधी चाहिए. उदाहरण के लिए, दो rAAV8 सेरिबैलम में विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त वायरस के उच्च टिटर समाधान का एक मिश्रण इंजेक्शन कई Purkinje कोशिकाओं है कि विभिन्न प्रकार से चिह्नित कर रहे हैं (2A छवि) को संक्रमित करता है. इसके विपरीत, एक कम टिटर वायरस समाधान इंजेक्शन विरल एकल कक्षों (छवि 2B) visualizing में सहायता संक्रमण में परिणाम कर सकते हैं. Fluorescently लेबल न्यूरॉन्स ताजा कटौती, जीना ऊतक (छवि 2B) में सीधे मनाया सकता है या व्यापक क्षेत्र या सह द्वारा बाद में छवि अधिग्रहण के लिए अंतर्जात फ्लोरोसेंट संकेत बढ़ाने immunostaining अधीन किया जा सकता है हैnfocal फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी (छवि 2A, चित्र 3A सी). अन्त में, rAAV8 ठीक प्रक्रियाओं की मजबूत लेबलिंग (छवि 3A - सी) के साथ प्रांतस्था में न्यूरॉन के प्रकार की एक किस्म को संक्रमित करने में सक्षम है.
चित्रा 1: कि P0 पर rAAV8-Cre के साथ अंतःक्षिप्त थे ROSA26R संवाददाता चूहों के मस्तिष्क में LacZ धुंधला Cre गतिविधि और संक्रमण का स्थान दर्शाता है.
- वाइड क्षेत्र एक p14 उच्च टिटर (1x10 12 जीसी / एमएल) प्रांतस्था और बेहतर colliculus में इंजेक्शन दिखा मस्तिष्क के बाण के समान दृश्य. उच्च टिटर वायरस के उपयोग यह अधिक संभावना है कि आसन्न क्षेत्रों को भी संक्रमित हो जाएगा बनाता है.
- P14 प्रांतस्था के बाण के समान अनुभाग कम टिटर (1x10 11 जीसी / एमएल) के साथ इंजेक्शन वायरस कम प्रसार के साथ एक स्थानीय संक्रमण को दर्शाता है.
- एक P28 सेरिबैलम के एक wholemount दृश्य कम टिटर साथ midline (1x10 9 जीसी / एमएल) वायरस के समाधान में इंजेक्शन से पता चलता है कि संक्रमण विरल है और आमतौर पर इंजेक्शन साइट के पास रहता है.
- सी में सेरिबैलम के midline के बाण के समान दृश्य). ध्यान दें कि आमतौर पर केवल Purkinje कोशिकाओं rAAV8 द्वारा संक्रमित हैं.
चित्रा 2: फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त rAAV8 के उच्च और निम्न titers के साथ इंजेक्शन द्वारा अनुमस्तिष्क लेबलिंग .
- P21cerebellum के एक बाण के समान खंड दो EGFP (हरा) और (लाल) DsRed व्यक्त वायरस का एक मिश्रण के साथ संक्रमित. Purkinje कोशिकाओं की एक बड़ी संख्या को संक्रमित वायरस के एक उच्च टिटर मिश्रण इस्तेमाल किया गया था.
- बहुत कम टिटर वायरल संक्रमण से रहते p14 सेरिबैलम में Purkinje सेल विच्छेदन के तुरंत बाद imaged.
चित्रा 3: rAAV8 DsRed द्वारा cortical लेबलिंग.
एक p21 प्रांतस्था कि P0 पर rAAV8 DsRed से संक्रमित किया गया था के राज्याभिषेक वर्गों में cortical न्यूरॉन प्रकार की विविधता के उदाहरण.
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Discussion
नवजात वायरल इंजेक्शन विधि यहाँ प्रस्तुत करने के लिए एक सरल और तेजी से प्रसव के बाद मस्तिष्क के विकास के अध्ययन के लिए vivo मोज़ाइक में उत्पन्न तरीका प्रदान करता है. विधि floxed alleles कि वर्तमान में उपलब्ध हैं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से उन है कि उच्च Throughput 6 परियोजना का लक्ष्य निर्धारण जीन के माध्यम से किए जा रहे हैं का लाभ लेता है. Cre के ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति का उपयोग करने के लिए तुलना में, इस विधि तेजी से करने के लिए विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं में जीन समारोह का परीक्षण, floxed alleles ले जाने चूहों के रूप में प्रयोगों के लिए सीधे इस्तेमाल किया जा सकता है प्रदान करता है, और पूरे वायरस इंजेक्शन प्रक्रिया से शुरू करने के लिए खत्म किया जा सकता है एक घंटे के तहत में निपुण. इसके अलावा, संक्रमित कोशिकाओं की संख्या आसानी से वायरस है, जो व्यक्तिगत न्यूरॉन्स की विरल लेबलिंग की अनुमति देता है के टिटर बदलकर नियंत्रित किया जा सकता है. हालांकि हम केवल नमूना छवियों में neuronal आकारिकी वर्णित है, संक्रमित न्यूरॉन्स के विश्लेषण कई axonal और वृक्ष के समान विकास सहित, शाखाओं में बंटी और खपरैल का छत के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जैसे रीढ़ morphogenesis synaptic विकास के लिए महत्वपूर्ण विकास की प्रक्रिया, के लिए विस्तारित किया जा सकता है.
प्रक्रिया के तीन सबसे महत्वपूर्ण भागों इंजेक्शन साइट, इंजेक्शन उपकरण की विश्वसनीयता, और पिल्ले के अस्तित्व लक्ष्यीकरण की सटीकता हैं. पहला पहलू - सटीकता सबसे अच्छा अनुभव के माध्यम से सीखा है. इंजेक्शन उपकरण की विश्वसनीयता तथ्य यह है कि एक यकीन है कि वहाँ कोई मोज़री, लीक, या इंजेक्शन के लिए पहले उपकरणों के साथ अन्य समस्याओं कर रहे हैं करना चाहिए करने के लिए संदर्भित करता है. अन्त में, पिल्ले के अस्तित्व आम तौर पर अगर 3.7 चरण में उल्लिखित सुझावों का पालन कर रहे हैं एक समस्या नहीं है.
इस प्रक्रिया का एक स्पष्ट संशोधन विभिन्न जीनों व्यक्त वायरस का एक मिश्रण का उपयोग करने के लिए है. उदाहरण के लिए, दो वायरस, rAAV Cre - GFP और rAAV - आरएफपी, का एक मिश्रण कम लेबल (हरा) और एक ही पशुओं में पीटा नियंत्रण कक्ष (लाल) के एक मोज़ेक उत्पादन इंजेक्ट किया जा सकता है. यह एकल कक्षों के विश्लेषण के लिए एक पारंपरिक जीन knockouts पर एक विशिष्ट लाभ प्रदान करता है, यह विशेष रूप से या एक ही माउस मस्तिष्क में जंगली प्रकार उत्परिवर्ती alleles के साथ न्यूरॉन्स की morphological विश्लेषण के लिए उपयोगी बनाने. यह भी एक सीमा जा सकता है, तथापि, यदि किसी की इच्छा के व्यवहार के अध्ययन, जिसमें यह आवश्यक हो न्यूरॉन्स की एक बड़ी संख्या में हेरफेर करने के लिए एक नमूदार प्रभाव उत्पन्न कर सकते हैं प्रदर्शन करने के लिए. हमें लगता है कि हम आम तौर पर इंजेक्शन प्रसव के बाद 3 उम्र (पी 3) के लिए कर सकते हैं प्रदर्शन ऊपर, लेकिन उम्र P4 से और खोपड़ी पर अक्सर भी इंजेक्शन सुई के साथ आसानी से पंचर करने के लिए मोटी है. जानवर से जानवर के लिए एक विशेष उम्र में खोपड़ी की मोटाई भिन्न हो सकते हैं, तथापि, तो इस मुद्दे experimenter द्वारा मूल्यांकन किया जाना चाहिए.
Cre-व्यक्त वायरस, loxP बंद करो loxP alleles के साथ कई फ्लोरोसेंट संवाददाता चूहों 13 उत्पन्न किया गया है और floxed एलील साथ शामिल किया जा सकता से व्यक्त फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग करने के अलावा. हालांकि नए एलील सहित उपयुक्त जीनोटाइप के साथ चूहों प्राप्त करने के लिए आवश्यक समय कहते हैं, इन संवाददाता चूहों के साथ Cre गतिविधि और लेबल व्यक्तिगत न्यूरॉन्स की निगरानी कर सकते हैं.
पुनः संयोजक rAAVs के चुनिंदा tropism की वजह से, अलग neuronal सेल प्रकार संरचनात्मक क्षेत्रों में एक विशेष rAAV सीरोटाइप (चित्रा 1D) का चयन करके लेबल किया जा सकता है. विशिष्टता भी विभिन्न प्रमोटरों का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है. इसके अलावा, lentivirus रूप में अन्य वायरस, 10 न्यूरॉन्स को संक्रमित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यहाँ लाभ यह है कि इन वायरस डीएनए आवेषण बड़ा ले जाने के लिए ही नहीं बल्कि Cre shRNA और प्रमुख सक्रिय जीनों के रूप में अन्य आनुवंशिक सामग्री, व्यक्त कर सकते हैं. इसके अलावा, विधि भी नव विकसित ट्रांसजेनिक 14 चूहों, जहां सशर्त व्यक्त Cre लाइनों अच्छी तरह से स्थापित नहीं कर रहे हैं में इस्तेमाल किया जा सकता है. अंत में, एक बार इस तकनीक प्रयोगशाला में स्थापित है, यह आगे vivo में जैसे अन्य विश्लेषणात्मक उपकरणों, दो photon 11 इमेजिंग और / या इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, प्रत्येक जीन की तंत्रिका सर्किट विकास और समारोह में समारोह का अध्ययन के साथ संयुक्त किया जा सकता है
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
इस काम एनआईएच (NINDS) से एक RO1 अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| rAAV8-Cre, -GFP, -DsRed, | Vector Biolabs | #7060, #7061, custom order | http://www.vectorbiolabs.com |
| Harvard Pump 11 Plus | Harvard Apparatus | #702208 | (No foot pedal port) |
| Retinal Pigment Epithelium Injection Kit | World Precision Instruments, Inc. | RPE-KIT | Contains connective tubing, injection needles (36G), and needle holder |
| NanoFil Syringe, 100μl | World Precision Instruments, Inc. | NANOFIL-100 | Includes reusable loading needle |
| D-PBS | Invitrogen | 14040-117 | |
| GFP antibody | Aves | GFP-1020 | |
| DsRed antibody | Clontech Laboratories | 632496 | |
| Heating Block | VWR international | 97042-610 | |
| ROSA26R mouse | Jackson Laboratory | 003309 |
References
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