Summary
Oncolytic वायरस कैंसर चिकित्सा के लिए वादा कर रहे हैं. जीवित ऊतक के इलाज के लिए पहले रोगियों से प्राप्त नमूनों के infectability का पता लगाने की क्षमता इस चिकित्सात्मक दृष्टिकोण का एक अनूठा लाभ है. इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे के लिए ऊतकों की प्रक्रिया
Abstract
Oncolytic वायरस (ओवर) उपन्यास चिकित्सा विज्ञान है कि चुनिंदा में दोहराने के लिए और ट्यूमर कोशिकाओं को मारने के एक हैं . कई नैदानिक एचएसवी, reovirus, और कैंसर के लिए इलाज के रूप में चेचक ओवर सहित oncolytic प्लेटफार्मों की एक किस्म की प्रभावशीलता का मूल्यांकन परीक्षण वर्तमान में चल 2-5 कर रहे हैं. Oncolytic वायरस के एक प्रमुख विशेषता यह है कि वे आनुवंशिक संवाददाता transgenes जो माइक्रोस्कोपी या जैव luminescence 6,7 इमेजिंग द्वारा ऊतकों के संक्रमण की कल्पना करने के लिए यह संभव बनाता है व्यक्त करने के लिए संशोधित कर सकते हैं. यह एक अद्वितीय लाभ प्रदान करता है के बाद से यह संभव है रोगियों पूर्व vivo से ऊतकों के उपचार के लिए पहले संक्रमित क्रम में सफल oncolytic virotherapy 8 की संभावना का पता लगाने. यह अंत करने के लिए, यह उचित ऊतक विविधता के लिए क्षतिपूर्ति और ऊतक व्यवहार्यता, विशेष रूप से 9 संक्रमण के पहले का आकलन करने के लिए ऊतक का नमूना करने के लिए महत्वपूर्ण है. यह भी वायरल संवाददाता transgenes का उपयोग कर यदि oncolytic मंच के रूप में के रूप में अच्छी तरह से homogenization में निम्नलिखित क्रम में निष्फल और उत्पादक संक्रमण के बीच भेदभाव ऊतकों के प्रत्यक्ष अनुमापन द्वारा व्यक्त की प्रतिकृति का पालन करने के लिए महत्वपूर्ण है. इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य इन मुद्दों को संबोधित है और यहां एक वर्णन है. और सेल संस्कृति के लिए 2 तैयारी ट्यूमर ऊतक के नमूने. ऊतक की व्यवहार्यता का आकलन चयापचय डाई alamar नीले 3 चेचक वायरस के साथ सुसंस्कृत ऊतकों या तो GFP या जुगनू luciferase 4 व्यक्त की पूर्व vivo में संक्रमण. उपयोग. Transgene अभिव्यक्ति की जांच प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी या Vivo इमेजिंग प्रणाली (IVIS) 5 फीट का उपयोग करके . वायरस की पट्टिका परख मात्रा का ठहराव. यह व्यापक विधि ऊतक प्रसंस्करण के आराम, ऊतक विविधता के लिए मुआवजा, ऊतक व्यवहार्यता का नियंत्रण, और निष्फल संक्रमण और हड्डी फाइड वायरल प्रतिकृति के बीच भेदभाव सहित कई फायदे प्रस्तुत करता है .
Protocol
1. ऊतक प्रसंस्करण
- सर्वोत्तम परिणामों के लिए, इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए हौसले से पृथक ऊतक DMEM मीडिया में जमा 10% FBS, 1% समाधान / Pennicilin स्ट्रेप्टोमाइसिन, और प्रसंस्करण के लिए पहले सर्जरी निम्नलिखित 0.1% Amphothericin बी तुरंत समाधान युक्त किया जाना चाहिए. यदि यह संभव नहीं है, ऊतकों को इस माध्यम में रात भर छोड़ा जा सकता 4 डिग्री पर प्रसंस्करण के लिए पहले.
- नमूना प्रसंस्करण से पहले करने के लिए, 70% इथेनॉल समाधान में उन्हें कम से कम 5 मिनट के लिए जमा करके धातु संदंश और डिस्पोजेबल ब्लेड बाँझ. इसके अलावा DMEM मीडिया के 2 मिलीग्राम से युक्त 10% FBS, 1% समाधान / Pennicilin स्ट्रेप्टोमाइसिन, और 0.1% Amphothericin बी के साथ 24 अच्छी तरह से एक थाली तैयार
- एक लामिना का प्रवाह सेल संस्कृति निष्फल संदंश का उपयोग हुड में ऊतक का नमूना ले लीजिए और एक खाली 15 सेमी पेट्री डिश में ऊतक जमा पक्ष पर ढक्कन रखने, बाँझ की ओर.
- सेल संस्कृति हुड में, एक 2 मिमी बायोप्सी पंच का उपयोग करने के लिए चित्रा 1 के रूप में ऊतक के भीतर क्षेत्रों की एक किस्म से अलग कोर प्राप्त. संदंश की मदद से 15 सेमी पेट्री के ढक्कन में कोर जमा, प्रत्येक कोर के बीच पर्याप्त जगह छोड़ने इतना है कि वे आसानी से क्षैतिज अक्ष के साथ काटा जा सकता है.
- 4 भी तिमाहियों में चित्रा 1 के रूप में एक निष्फल रेजर ब्लेड का उपयोग कर प्रत्येक कोर भाजित.
- एक pipet टिप का उपयोग करना, A1 से एक अलग अच्छी तरह से में भी कोर से प्रत्येक कोर तिमाही डाल A4 संख्या 1 के रूप में, पहले से ही DMEM 10% FBS, 1% समाधान / Pennicilin स्ट्रेप्टोमाइसिन, और 0.1% Amphothericin बी समाधान युक्त 1.5 मिलीलीटर युक्त . प्रत्येक कोर के लिए दोहराएँ. यह ट्यूमर के प्रतिनिधि नमूने की अनुमति है, जबकि एक भी अच्छी तरह / हालत में पूर्वाग्रह कम से कम करना चाहिए. बेहतर प्रतिनिधित्व के लिए, कोर की संख्या में वृद्धि.
2. ऊतक व्यवहार्यता के मूल्यांकन
- के बाद ऊतक प्रसंस्करण, अच्छी तरह से # A1 और # A2 25μl Alamar नीला जोड़ने के रूप में संख्या 1 में दिखाया गया है और 5% सीओ 2 के साथ एक humidified इनक्यूबेटर में 37 डिग्री पर 1 घंटे के लिए सेते हैं.
- Alamar नीले रंग के साथ के बाद ऊष्मायन, 3 बार प्रत्येक A1 और A2 अच्छी तरह से 100 μl हटाने और एक 96 - अच्छी तरह से थाली के 6 अलग कुओं को हस्तांतरण. प्रतिदीप्ति प्लेट पाठक (530 उत्तेजना, 590 उत्सर्जन) का उपयोग करते हुए संकेत पढ़ें और अपने रिकॉर्ड के लिए डेटा रखने के.
- Alamar नीले संकेत पढ़ा दिया गया है, के बाद एक pipet टिप का उपयोग ऊतक के सभी टुकड़े हस्तांतरण, अच्छी तरह से A1 से C1 कि DMEM, 10% FBS + पी एस + AmphoB होता. अच्छी तरह A1 से मीडिया के एक अत्यधिक राशि स्थानांतरण नहीं सावधान रहो.
- कुओं A3 और A4 क्रमशः संक्रमित GFP-व्यक्त और चेचक वायरस मीडिया के 25 μl में पतला luciferase व्यक्त की 6 10 Pfu साथ. खैर A2 एक वायरस है कि सभी में कोई भी सहित किसी भी transgene व्यक्त के साथ संक्रमित हो सकता है.
- 72 घंटे बाद, कुओं C1 और D1 25 μl Alamar नीले जोड़ने और 2.2 कदम दोहराएँ
3. GFP transgene अभिव्यक्ति की पुष्पन माइक्रोस्कोपी द्वारा विज़ुअलाइज़ेशन
- सभी सेल संस्कृति ऊतक के टुकड़े को कवर करने में अच्छा प्रतिदीप्ति तस्वीरें ले मीडिया निकालें.
- प्रतिदीप्ति सक्षम विच्छेदन सूक्ष्मदर्शी का प्रयोग, पहली बार एक उपयुक्त संकल्प पर एक चरण विपरीत छवि ले
- प्रतिदीप्ति मोड में स्विच और एक उपयुक्त फिल्टर का उपयोग इस मामले GFP में ब्याज की transgene, कल्पना तस्वीर ले लो.
- पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति की एक तस्वीर लेने की है कि ब्याज की transgene (जैसे आरएफपी के रूप में) से दूसरे के रूप में जहां तक संभव हो तरंग दैर्ध्य के लिए एक प्रतिदीप्ति फिल्टर का प्रयोग करें
4. Luciferase अभिव्यक्ति के विज़ुअलाइज़ेशन Vivo इमेजिंग प्रणाली (IVIS) में एक का उपयोग कर
- यकीन है कि IVIS इससे पहले कि आप शुरू करने के लिए initialized है.
- कुओं A4 और B4, luciferin 10 सब्सट्रेट के 5 μl जोड़ने मिलीग्राम / एमएल, अच्छा मिश्रण है और कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए सेते हैं.
- 5 सेकंड के लिए IVIS जोखिम समय सेट और अपने कुओं की एक तस्वीर ले. यदि छवि संतृप्त है, कम जोखिम समय के साथ दोहराएँ. अगर वहाँ कोई संकेत नहीं है, जोखिम समय में वृद्धि.
- IVIS इमेजिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके, आप अच्छी तरह से B4 से संकेत का उपयोग पृष्ठभूमि हटाने और ब्याज की luminescence संकेत यों क्षेत्र का चयन करें कर सकते हैं.
5. पट्टिका परख द्वारा वायरल titers मूल्यांकन
- वायरल titers बढ़ाता से पहले, ऊतकों पहले वायरल कणों जारी homogenized होना चाहिए. यह संक्रमित ऊतकों के नमूनों में कई महीनों के बाद किया जा सकता है -80 पर संग्रहित कर रहे हैं
- नमूना है कि एक विश्लेषणात्मक पैमाने का उपयोग homogenized की जरूरत है वजन. इस मामले में, हम अच्छी तरह से A2 से एकत्र नमूने का उपयोग करेंगे.
- प्लेस ऊतक एक 5 मिलीलीटर polystyrene दौर नीचे बाज़ ट्यूब में है और पीबीएस के 1 मिलीलीटर जोड़ें. एक ऊतक homogenizer का उपयोग ऊतक homogenize. यदि आवश्यक हो, -80 में वायरल titers के एक बाद में समय पर मूल्यांकन के लिए homogenate की दुकान.
- टिटर चेचक वायरस, पहले थाली 6 अच्छी तरह से एक थाली में 1 लाख U2OS कोशिकाओं और एक 37 डिग्री में रातोंरात सेते हैं, 5% सीओ 2 नमified इनक्यूबेटर ऐसी है कि वे लगभग 95% confluency अगले दिन पहुँच गए हैं.
- सीरम मुक्त मीडिया का उपयोग करने के लिए वायरस के धारावाहिक dilutions करते हैं, प्रत्येक कमजोर पड़ने कदम के बीच सुझावों को बदलने के लिए सुनिश्चित करने. आमतौर पर हम 10 dilutions में 1 और 100 μl का उपयोग करने के लिए 900 μl में स्थानांतरित. कितने dilutions बना रहे हैं प्रत्याशित वायरस उपज पर निर्भर करता है.
- Dilutions बनाने के बाद, मीडिया कवर चढ़ाया U20S कोशिकाओं तो पतला वायरस शेयर के 500 μl (प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए) को जोड़ने के लिए U2OS कोशिकाओं को संक्रमित हटा दें. एक 5% सीओ 2 humidified इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के मिनट के लिए कोशिकाओं को सेते हैं .
- इस समय के दौरान, 2 DMEM 20% FBS, और 3% के एक 37 डिग्री के पानी के स्नान में सीएमसी समाधान युक्त करने के लिए ध्यान केंद्रित एक्स गर्म.
- 1 घंटे ऊष्मायन के बाद, मीडिया संक्रमित U2OS कोशिकाओं को कवर हटा दें. 2X DMEM, 20% FBS एक साथ और इस मिश्रण के 2 मिलीलीटर का उपयोग करने के लिए संक्रमित U2OS कोशिकाओं के प्रत्येक अच्छी तरह से कवर: 3% सीएमसी के 01:01 मात्रा मिलाई.
- कोशिकाओं को वापस एक और 48 घंटे के लिए एक 37 डिग्री के 5% सीओ 2 humidified इनक्यूबेटर में रखो.
- 48 घंटे के बाद, एक अच्छी तरह से में सीएमसी उपरिशायी के शीर्ष पर मेथनॉल एसिटिक एसिड लगानेवाला 2 मिलीलीटर जोड़ने और एक सेल संस्कृति हुड में 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं.
- तय उपरिशायी त्यागें और शेष पानी के नल का उपयोग कर कुओं के बंद धो.
- एक coomassie नीले समाधान के प्रति अच्छी तरह से 2ml के साथ तय U2OS कोशिकाओं दाग और एक प्रकार के बरतन प्लेट पर कम गति से कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए सेते हैं.
- Remove coomassie कुओं से दाग और पानी के नल का उपयोग प्लेटें धोने. के बारे में एक घंटे के लिए ढक्कन बंद के साथ शुष्क करने की अनुमति दें.
- परिणामस्वरूप वायरल सजीले टुकड़े आसानी आंकड़ा 2C में visualized किया जा सकता है. प्लेट्स इस स्तर पर अनिश्चित काल के संग्रहीत किया जा सकता है.
- कमजोर पड़ने कदम जहां 10 और 100 के बीच सजीले टुकड़े दिखाई दे रहे हैं सजीले टुकड़े गिन लो.
- इस्तेमाल किया कमजोर पड़ने से गिना सजीले टुकड़े की संख्या गुणा और परिणामस्वरूप संख्या 2 से गुणा करने pfu / मिलीलीटर में एक टिटर दे. उदाहरण के लिए, यदि 25 सजीले टुकड़े में अच्छी तरह से जहां एक लाख गुना कमजोर पड़ने का इस्तेमाल किया गया था गिना जाता है, प्रारंभिक undiluted नमूने के टिटर एक लाख दो या 50 लाख / Pfu मिलीलीटर गुणा 25 गुणा है. इसके अलावा वजन द्वारा इस संख्या को शुरू pfu / छ में titers रिपोर्ट नमूना के लिए उपाय विभाजित
6. प्रतिनिधि परिणाम:
आदेश में सही निर्धारित करने के लिए कि क्या एक शल्य चिकित्सा से प्राप्त सामान्य / ट्यूमर ऊतक नमूना है या वायरस के साथ infectable नहीं है, एक पहले सुनिश्चित करें कि ऊतक नमूना कम से कम व्यवहार्य है. चित्र 1A पता चलता है कि व्यवहार्यता एक चयापचय (Alamar नीला) डाई 72h कम से कम अवधि में दोनों सामान्य और ट्यूमर के ऊतक metabolically सक्रिय रह सकते हैं कि का उपयोग कर मूल्यांकन किया जा सकता है. यह पता चलता है कि ऊतकों सुसंस्कृत पूर्व vivo वायरल प्रतिकृति का समर्थन कर सकते हैं. Oncolytic वायरस के एक महत्वपूर्ण लाभ यह है कि वे चिकित्सीय या इमेजिंग transgenes को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर किया जा सकता है. चित्र 2 डी - ई से पता चलता है कि luciferase या GFP पूर्व vivo संक्रमित ऊतकों से पता लगाया जा सकता है, आगे का समर्थन है कि इन ऊतकों व्यवहार्य और भी infectable हैं. हालांकि बढ़ transgene अभिव्यक्ति आमतौर पर वायरल प्रतिकृति के साथ जुड़ा हुआ है, यह जरूरी एक उत्पादक वायरल जीवन चक्र है कि आत्म प्रवर्धन और फैला है, जो चिकित्सीय गतिविधि के लिए महत्वपूर्ण माना जाता है की ओर जाता है के लिए नहीं समानता है. इस कारण से, यह निर्धारित करने के लिए आवश्यक है कि क्या और अधिक वायरस की तुलना में क्या करने के लिए शुरू ऊतक संक्रमित इस्तेमाल किया गया था का उत्पादन किया है. चित्र 2B पता चलता है कि पट्टिका परख द्वारा वायरल मात्रा का ठहराव पर, और अधिक वायरस संक्रमण के बाद 72 घंटे प्राप्त है तो ऊतक संक्रमण के तुरंत बाद एकत्र. कुल मिलाकर, इन आंकड़ों का पता चलता है कि सेल संस्कृति में शल्य चिकित्सा excised ट्यूमर ऊतक व्यवहार्य कम से कम 72 घंटे की अवधि के लिए रह सकते हैं जो समय के दौरान वायरल प्रतिकृति समर्थित किया जा सकता है.
चित्रा 1. ऊतक के अवलोकन नमूना / प्रोटोकॉल सेक्शनिंग. ऊतक नमूना कई मिमी 2 कोर जो बाद में जो बेतरतीब ढंग से A1-A4 कुओं में वितरित कर रहे हैं चार तिमाहियों में विभाजित कर रहे हैं को हटाने के द्वारा संसाधित है. रंग कोड प्रत्येक कुएं में इस्तेमाल किया अभिकर्मकों से संकेत मिलता है. कुओं के भीतर ग्रे छायांकित वर्गों 6 व्यक्ति दर्शाया कोर से प्रत्येक तिमाही का प्रतिनिधित्व करते हैं. A1: में अच्छी तरह से ऊतक प्रारंभिक alamar नीले पढ़ने के बाद मीडिया के साथ एक नया अच्छी तरह से (C1) को सौंप दिया है. एक दूसरे पढ़ने वायरस के साथ 72 घंटे ऊष्मायन के अंत में किया जाता है. वेल्स A4 और B4 Luciferin के साथ 72 घंटे बाद संक्रमण ऊष्मायन के बाद पूरक हैं
चित्रा 2. व्यवहार्यता और रोगी के ऊतकों के नमूनों की infectability. ए) ऊतक व्यवहार्यता के रूप में alamar पर नीले संकेत 2 घंटे और 72 घंटे के बाद संग्रह द्वारा मापा. Y-अक्ष का प्रतिनिधित्व करता है रिक्त alamar नीले संकेत सही. बी) चेचक वायरस के टिटरऊतक 2 और 72 घंटे बाद संक्रमण coomassie धुंधला हो जाना. U2OS कोशिकाओं पर) चेचक वायरस सजीले टुकड़े के उदाहरण सी) Luminescence रोगी वी.वी.-luciferase संक्रमित ऊतकों से प्राप्त संकेत के नमूने की प्रति ग्राम एकत्र IVIS का उपयोग कर ई imaged.) प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी तस्वीरें वी.वी.-GFP के साथ संक्रमित रोगी ऊतक नमूने की.
Discussion
इस प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम के ताजा ऊतक का नमूना प्राप्त है. अगर नमूना सेल संस्कृति में एक अनुचित मीडिया (eg. पीबीएस) में ऑपरेटिंग कमरे में एक लंबे इंतजार के बाद डाला जाता है, यह ऊतक की व्यवहार्यता समझौता और infectability को रोकने सकता है. ध्यान से, सामान्य ऊतकों को स्वाभाविक रूप से अधिक ट्यूमर ऊतकों की तुलना में इन प्रभावों के लिए प्रवण है. एक अन्य महत्वपूर्ण बिंदु है कितने कोर ऊतक नमूना और उनके आकार की निरंतरता के लिए उपयोग किया जाता है. आकार में विसंगतियों को रोगी के नमूने भर में परिवर्तनशीलता के लिए नेतृत्व के बाद से ऊतक hypoxia और infectectable सतह जैसे कारकों कोर और कोर तिमाहियों के आकार के आधार पर उतार चढ़ाव हो जाएगा. हालांकि यह आंशिक रूप से ऊतक slicers का उपयोग करके हल किया जा सकता है, यहाँ प्रस्तुत विधि का एक फायदा यह है कि यह अपेक्षाकृत आसान है, कम संदूषण की संभावना है, और व्यापक रूप से ऊतक प्रकार की एक किस्म के लिए लागू सहित नरम या चिपचिपा ऊतकों जो आसानी से उत्तरदायी नहीं हैं, ऊतक टुकड़ा करने की क्रिया. विशेष रूप से, कोर की संख्या के क्रम में बेहतर ऊतक प्रतिनिधित्व मिल बढ़ा जा सकता है है. इसके अलावा, कोर अधिक टुकड़े (08/05 eg.) में काटा जा सकता करने के लिए अन्य संभावित assays को समायोजित करने के लिए समानांतर में डीएनए, शाही सेना, या प्रोटीन निष्कर्षण के रूप में किया जा. हालांकि, टुकड़ों की संख्या में जो कोर प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आकार के लिए काटा जा सकता है है कोर, जो विभिन्न आकार corers का उपयोग करके संशोधित किया जा सकता है की वास्तविक आकार पर निर्भर करेगा. वैकल्पिक रूप से, एक ही रास्ता मदद करने के लिए reproducibly आकार ऊतक टुकड़े को प्राप्त करने के पहले एक शासक का उपयोग करने के लिए उन्हें छोटे टुकड़ों में subdividing आगे कोर की लंबाई भी है. प्रोटोकॉल अन्य वायरस को समायोजित करने के लिए स्वाभाविक रूप से संशोधित किया जा सकता है और हमने पाया है कि ऊतकों व्यवहार्य हो सकता है और 6 दिनों के लिए प्रतिकृति का समर्थन कर सकते हैं. प्रोटोकॉल आगे cytrokines सहित अन्य virally व्यक्त transgenes की माप के लिए बढ़ाया जा सकता है है. के बाद संक्रमण, ऊतकों भी आगे सेक्शनिंग और immunohistochemical विधियों, जो ऊतक ऊतक विज्ञान के आगे शोधन के लिए अनुमति देता है और कैसे यह वायरल संक्रमण 10-12 के लिए संबंधित द्वारा धुंधला हो जाना करने के लिए आयल में कर सकते हैं एम्बेडेड हो.
Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम 2 अंजीर में प्रस्तुत डेटा के लिए मानव शल्य नमूनों प्रदान करने के लिए डॉ. हेसाम Abdelbary धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| High glucose DMEM | Hyclone | SH30243.01 | |
| Fetal Bovine Serum | NorthBio Inc. | NBSF-701 | |
| Amphothericin B solution | Sigma-Aldrich | A2942 | Use at 0.1% |
| Pennicilin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | Use at 1% |
| Alamar Blue | Invitrogen | DAL1025 | |
| D-Luciferin potassium salt | Molecular Imaging Products | D-Luciferin potassium salt 1g | Resuspend in PBS at 10 mg/ml and filter on 0.22 μm filter |
| MEM powder | GIBCO, by Life Technologies | #41500018 | Make in half the suggested volume to make 2X MEM and filter on 0.22 μm filter prior to use |
| Carboxymethyl cellulose (CMC) | Sigma-Aldrich | C9481 | Make a 3% solution in deionized water and autoclave. Note that powder can take some time to resuspend |
| Coomassie Brilliant Blue R | Sigma-Aldrich | B7920 | |
| 2 mm Biopsy punch | Miltex Inc. | MX-33-31 | |
| Double Edge Prep Blades | Personna Medical Care | 74-0002 | |
| Fluorescence disection Microscope | Leica Microsystems | model M205 FA | |
| In vivo imaging system (IVIS) | Caliper Life Sciences | IVIS® 200 series | |
| Tissue Tearor | Biospec Products | model 985370-395 |
References
- Parato, K. A., Senger, D., Forsyth, P. A., Bell, J. C. Recent progress in the battle between oncolytic viruses and cancer. Nat Rev Cancer. 5, 965-976 (2005).
- Renouf, L. C., Thway, K., Sibtain, A., McNeish, I. A., Newbold, K. L., Goldsweig, H., Coffin, R., Nutting, C. M. Phase I/II study of oncolytic HSV GM-CSF in combination with radiotherapy and cisplatin in untreated stage III/IV squamous cell cancer of the head and neck. Clin Cancer Res. 16, 4005-4015 (2010).
- Lal, R., Harris, D., Postel-Vinay, S., de Bono, J. Reovirus: Rationale and clinical trial update. Curr Opin Mol Ther. 11, 532-539 (2009).
- Park, B. H., Hwang, T., Liu, T. C., Sze, D. Y., Kim, J. S., Kwon, H. C., Oh, S. Y., Han, S. Y., Yoon, J. H., Hong, S. H., Moon, A., Speth, K., Park, C., Ahn, Y. J., Daneshmand, M., Rhee, B. G., Pinedo, H. M., Bell, J. C., Kirn, D. H. Use of a targeted oncolytic poxvirus, JX-594, in patients with refractory primary or metastatic liver cancer: a phase I trial. Lancet Oncol. 9, 533-542 (2008).
- Breitbach, C. J., Reid, T., Burke, J., Bell, J. C., Kirn, D. H. Navigating the clinical development landscape for oncolytic viruses and other cancer therapeutics: no shortcuts on the road to approval. Cytokine Growth Factor Rev. 21, 85-89 (2010).
- Boeuf, F. L. e Synergistic interaction between oncolytic viruses augments tumor killing. Mol Ther. 18, 888-895 (2010).
- Silva, N. D. e, Atkins, H., Kirn, D. H., Bell, J. C., Breitbach, C. J. Double trouble for tumours: exploiting the tumour microenvironment to enhance anticancer effect of oncolytic viruses. Cytokine Growth Factor Rev. 21, 135-141 (2010).
- Diallo, J. S. A high-throughput pharmacoviral approach identifies novel oncolytic virus sensitizers. Mol Ther. 18, 1123-1129 (2010).
- Cooke, S. L. Intra-tumour genetic heterogeneity and poor chemoradiotherapy response in cervical cancer. Br J Cancer. , Forthcoming (2010).
- Pennington, K., Chu, Q. D., Curiel, D. T., Li, B. D. L., Mathis, J. M. The Utility of a Tissue Slice Model System to Determine Breast Cancer Infectivity by Oncolytic Adenoviruses. J Surg Res. , 1-6 (2010).
- Hochberg, M. Tropism of herpes simplex virus type 1 to non-melanoma skin cancers. Br J Dermatol. , Forthcoming (2010).
- Kuip, H. vander Short term culture of breast cancer tissues to study the activity of the anticancer drug taxol in an intact tumor environment. BMC Cancer. 6, 86-86 (2006).
