Summary
Fopius arisanus هو طفيل البيض من يرقات ذباب الفاكهة Tephritid يستخدم بنجاح في المكافحة البيولوجية للآفات استوائية هذه المهمة. نحن هنا وصف بروتوكول الأمثل لتربية F. arisanus على نطاق صغير باستخدام مواد متوفرة بسهولة.
Abstract
Fopius arisanus (Sonan) هو الطفيل هاما من ذباب الفاكهة Tephritid لسببين على الأقل. الأول ، هو واحد من ثلاثة فقط opiine الطفيليات التي يعرف أنها تصيب المضيف خلال المرحلة البيض 1. الثاني ، أن لديها مجموعة واسعة من المضيفين المحتملين ذبابة الفاكهة. ربما بسبب التاريخ حياتها ، F. وقد استخدمت بنجاح a arisanus عن المكافحة البيولوجية لذبابة الفاكهة في المناطق المدارية متعددة 2-4. أحد العوائق لاستخدام واسعة من ف. arisanus لمكافحة ذبابة الفاكهة هو أنه من الصعب إقامة مستعمرة المختبر مستقرة 5-9. رغم هذه الصعوبة ، في وزارة الزراعة الأميركية 1990s الباحثين وضعت طريقة موثوق بها للحفاظ على السكان مختبر F. arisanus 10-12. هناك اهتمام كبير في واو arisanus 13،14 البيولوجيا ، ولا سيما فيما يتعلق بقدرتها على استعمار طائفة واسعة من المضيفين Tephritid 14-17 ؛ مدفوعة خصوصا الفائدة من جانب الانتشار المقلق للآفات Bactrocera ذبابة الفاكهة إلى قارات جديدة في العقد الأخير 18. مزيد من البحوث بشأن F. وسيتم نشر arisanus إضافية من هذا النوع كعامل المكافحة البيولوجية الاستفادة من التحسينات وإدخال تحسينات على أساليب التربية. في هذا البروتوكول المادة وما يرتبط بها من الفيديو وصفنا أسلوب الأمثل لتربية F. arisanus على أساس نهج الموصوفة سابقا 12. الأسلوب وصفنا هنا يسمح تربية F. arisanus في نطاق ضيق دون استخدام الفاكهة ، وذلك باستخدام المواد المتاحة في المناطق المدارية في جميع أنحاء العالم ، ومنخفضة نسبيا مع متطلبات العمل اليدوي.
Protocol
1. تحضير البيض المضيف ذبابة الفاكهة لتطفلل
- تعد ركيزة للبيض ذبابة الفاكهة ليكون عن طريق إعداد مطفول آغار (بدلا من ذلك ، Gelcarin GP812 ، FMC البوليمر الحيوي ، يوينغ NJ ؛ خيارا أكثر فعالية من حيث التكلفة) الأطباق شغلها ، 10 سم في الطول لكل جانب و 1.5 سم عمق. إعداد أغار عند تركيز من 9 غ لكل لتر من الماء.
- أطباق لملء الحافة مع آغار السائل (70ml تقريبا) ، والسماح لهم بارد ويصلب (على الأقل 45 دقيقة).
- مرة واحدة في كتل صلبة آغار ، وتطبيق طبقة واحدة من المناديل الورقية (أ رقائق الأنسجة دفعة واحدة من "ميول" جورجيا المحيط الهادئ) ، التي تغطي الجزء العلوي من كل كتلة. ينبغي للنسيج عصا بسهولة إلى آغار بسبب رطوبة السطح.
- تطبيق حجم 0.5 مل البيض ذبابة الفاكهة معلقة في الماء على سطح النسيج المغطاة من كتل آغار. في insectary لدينا ، وهذا يعادل حوالي 6000 بيض الظهراني Bactrocera (12000 بيضة في مل).
- استخدام فرشاة تنظيف 2.5 سم واسعة في مجال المياه انخفض إلى انتشار ذبابة الفاكهة والبيض بشكل متساو على سطح النسيج.
- وضع البيض ذبابة الفاكهة تحت الشاشة أسفل الأقفاص الطفيل للسماح oviposition. اضغط على الجانب السفلي من الشاشة السفلى لإزالة الطفيليات التي قد تعيق القتلى البيض. فمن الأفضل إذا كان أسفل الشاشة لا تلمس البيض.
- السماح للطفيليات لoviposit بين عشية وضحاها في اليوم التالي ، وحوالي 21 ساعة. هذا هو الوقت الكافي لنسبة عالية من البيض أن مطفول. يعد superparasitization مخاطر التعرض.
2. الفقس وpupation من الفاكهة المضيفة مطفول الذباب
- تعد تربية حاوية عن طريق وضع كتل 3-3،5 أغار على استعداد للبيض في مطفول 1.25 ليتر من حمية ذبابة الفاكهة 19 مع البيض التي تواجه التصاعدي.
- مكان الحاوية حمية مع البيض على الناهض على طبقة الطول 1.5 العميق الفيرميكوليت الصف غرامة أو الرمل المغسول في وعاء أكبر pupation. تغطية الحاويات pupation مع غطاء والشريط حواف اخفاء الشريط معها. ويمكن إعادة استخدامها بعد غربلة الفيرميكوليت (أنظر أدناه).
- ضمان وجود مساحة كافية بين الجزء العلوي من الحاوية النظام الغذائي وغطاء الحاوية pupation ليرقات ذبابة الفاكهة من الزحف و "البوب" في 20 vemiculite أدناه.
- نقل الحاويات pupation إلى غرفة حتى 27 درجة مئوية والرطوبة النسبية 80 ٪ (RH) لمدة أسبوع. تغطية الحاويات بقطعة قماش داكنة للأيام الأربعة الأولى ثم إزالة القماش للأيام المتبقية.
- إزالة نظام غذائي اليرقات بعد أسبوع واحد ، انتشرت اليرقات مرة واحدة ودخلت الفيرميكوليت لpupation. إذا كان هناك اليرقات في الفيرميكوليت ، وتسمح لهم تخدر تصبح خادرة بين عشية وضحاها.
- غربال للعذارى من الخس. تبدأ مع منخل خشن (حوالي 3 مم) ثم استخدام منخل لإزالة أي جهة كتل المتبقية من الخس.
3. الفرز والاختيار
- خادرة تحتوي F. ويمكن فصل arisanus جزئيا من ذباب الفاكهة unparasitized حسب الحجم. خادرة جمع بين 1.65 مم و 2.26 في قطر ، كما سيتم إثراء هذه ذباب مطفول (12). Puparia التي هي أصغر تحتوي على طفيليات معظمهم الأصغر ، معظمها تحتوي على أكبر خادرة الذباب. نلاحظ أيضا أن للعذارى مطفول نسبة الإناث يرتبط بشكل إيجابي مع حجم 12.
- يجوز استخدام مجموعة متنوعة من أساليب لفرز الشرانق حسب الحجم. سنقوم بشرح طريقة الميكانيكية باستخدام حجم مخصص فارز 21.
- مكان الشرانق في قمع في أعلى المغذية الاهتزاز الذي يغذي ببطء فارز الحجم.
- تغذية الشرانق في حجم فارز ، والذي يتألف من زوج من اختلاف طفيف قضبان المتداول بزاوية 30 درجة. انخفاض حجم الشرانق الواحد إلى مجموعة من الفتحات التي فارغة إلى عشر حاويات منفصلة من خلال القمع.
- جمع الشرانق من الكؤوس في نطاق حجم 1،65-2،26 مم ووضعها في قفص ظهور لمدة 7 ايام اخرى حتى ظهرت معظم الذباب من الشرانق unparasitized.
- المقبل ، استخدام المروحة لفصل puparia فارغة من تلك الحشرات التي لا تزال تتضمن.
4. F. arisanus ظهور والصيانة
- للحفاظ على مستعمرة F. arisanus استخدام قفص الطفيل عقد مع واجهة زجاجية قابلة للإزالة ، وحوالي 25 سم في الطول لكل جانب. القفص وقد 1MM 2 الفرز على أعلى واثنين من الجانبين. ويغطي الجزء الخلفي من القفص في ورقة المطاط مع وجود ثقب 9 سم للوصول. الجزء السفلي من القفص وغطت قطع من في الداخل مع شاشة 2 1 - 2mm وكبيرة بما يكفي للسماح للوضع كتل آغار مع اثنين من البيض ذبابة الفاكهة لoviposition الطفيل.
- يجب أن يكون أيضا أقفاص عقد جزء ملون على طول الربع السفلي من الزجاج الأمامي لتقليل الضوء التي يمكن أن تخلق الطفيل الازدحام على طول الجبهة من القفص ، مما أدى إلى وفيات مرتفعة.
- مكان ما يقرب من 11 غراما من هذه سلكتيد الشرانق في حاويات من البلاستيك حوالي 9 سم في القطر. هذا يجب أن تنتج نحو 600-700 الطفيليات في القفص. يجب اختيار حجم ينتج حوالي 60 ٪ من الإناث.
- إرفاق الأغطية لفحص الحاويات. ينبغي تغطية الجفن مع 2 الفرز 2 ملم ، والتي سوف تسمح للبالغين ف. وسوف يغادر إلى arsianus الحاويات عند ظهور ، ولكن تحتوي على أي ذباب الفاكهة المتبقية.
- الحفاظ على الطفيليات في 24 درجة مئوية ، وحوالي 45 ٪ RH مع الإضاءة والتهوية الجيدة 12:12. إذا لوحظ ارتفاع معدل الوفيات ، قد نقل أقفاص في الهواء الطلق لبضع ساعات في اليوم أو التهوية زيادة الحد منه. وينبغي أن تكون على استعداد لطفيليات oviposit في أسبوع واحد إضافي ، وينبغي أن تكون منتجة لاسبوعين آخرين.
- مخفف متتالية العسل نسج على طول الجزء العلوي من أقفاص لا يقل عن ثلاث مرات في الأسبوع أو كلما العسل المتوفرة الجافة. تطبيق العسل في نسج الشرائط الضيقة باستخدام الإصبع. علما انه اذا الشرائط هي ثقيلة جدا العسل سوف بالتنقيط في القفص ، وإذا كان خفيفا جدا العسل سوف تجف بسرعة وتتطلب إعادة تقديم الطلب المتكرر.
- كتل مكان آغار (10 سم x 10 سم × 4 سم) على قمم من أقفاص لتوفير الرطوبة للطفيليات. يجب تغيير هذه مرتين في الأسبوع.
5. ممثل النتائج :
نحن هنا نتائج التقرير من إجراءات مراقبة الجودة التي أجريت على واو USDA - ARS arisanus عملية تربية في هيلو ، هاواي بين 5 يناير و 22 يونيو ، 2010. وقد بدأت تربية في الموقع حلو على مقياس الموضحة في هذه المقالة الفيديو وبروتوكول في آب 2009 ، وكانت المشاكل الأولية والتسويات مع الموقع الجديد حل معظمها بحلول يناير. ولذلك ، فإن هذه البيانات تمثل نتائج باحثين آخرين قد بدأ الحصول على مستعمرة بها ، إذا ما اتبع بروتوكول كما هو موضح ولها خبرة تربية الحشرات بصفة عامة. خلال هذه الفترة كنا الحفاظ على مستعمرة صغيرة من F. arisanus : 4 الطفيل أقفاص عقد المنتجة في الأسبوع ، أي ما يعادل حوالي 3600 ف. arisanus.
أجري الفحص الأولي لأسعار تطفلل التخصيب عن طريق أخذ عينة ز 2 من الشرانق في نطاق حجم 1،65-2،26 مم (التخصيب) قبل أسبوع إضافي للتنمية عقد في قفص (أي مباشرة بعد إزالة النظام الغذائي واليرقات منخول الشرانق وفرزها الحجم. ونحن نشير إلى هذه بأنها "عذارى المبكر'). خلال الأشهر الثلاثة الأولى من عام 2010 كانت نسبة الطفيليات يعني في العينة المخصب 0.46 (SD = 0.18). خلال الربع التالي كان هذا يعني 0.58 (SD = 0.08) ، مما يعكس استقرار وتربية إجراءات مستعمرة في الموقع الجديد. علما بأن الشرانق التخصيب التي لم تكن مطفول بنجاح تشمل تلك التي لم تسفر عن emergents وتلك التي تنتج الذباب.
بعد أسبوع إضافي في إزالة القفص عقد puparia فارغة لقد التقطت عينة أخرى غرام اثنين ('الشرانق في وقت متأخر"). ذباب الفاكهة يمثل أقل من 1 ٪ من هذه العينة الثانية. انخفاض النسبة المئوية للذباب الفاكهة يرجع جزئيا إلى أن ظهور في وقت سابق من الذباب مقارنة مع الطفيليات ، لذا فإن معظم الذباب لا تزال تحتجز في الحاوية.
أخيرا ، الشكل (1) يعطي غلة العذراء في كتلة من يناير الى يونيو 2010. يتم قياس عوائد من الشرانق المخصب في نطاق حجم الفائدة ، 1،65-2،26 مم. كتلة كبيرة من 'الشرانق المبكر" في بداية العام يشير إلى وجود نسبة عالية من ذباب الفاكهة والشرانق unemerged في ذلك الوقت ، بينما كان يجري تعديلات على المرفق الجديد.
الشكل 1. الربح من اليورانيوم (العذراء قطرها 1.65 - 2.26mm) في وقت مبكر (مباشرة بعد اختيار حجم) و 'الراحل' (بعد عقد لمدة اسبوع وإزالة أغلفة فارغة) الشرانق في مستعمرة USDA - ARS ariasnus واو في هيلو ، هاواي يناير -- يونيو 2010
Discussion
في هذه المقالة الفيديو البروتوكول والمرافق وصفنا وأظهرت وجود بروتوكول الأمثل لتربية F. ariasnus ، وهو الطفيل من ذباب الفاكهة Tephritid ، في إعداد المختبر. وقد تم تنقيح هذا البروتوكول على مر السنين لتقليل كمية من المعدات المتخصصة والعمالة اللازمة للحفاظ على مستعمرة. نلاحظ أن هناك حاجة راسخة ، مستعمرة منتجة ومستقرة لذباب الفاكهة المضيفة لأية محاولة للتربية الطفيليات. لدينا في insectary نستخدم Bactrocera الظهراني كمضيف ذبابة الفاكهة ، ولكن تبين أن الأنواع الأخرى أن تستضيف المختصة فضلا 14-17.
عدة جوانب F. arisanus صيانة مستعمرة لا يزال يتعين استكشافها. وتشمل هذه نسبة التكيف مع المختبرات في هذه الأنواع 10 ، وآليات التعلم (22) والتغيرات الجينية التي قد تحدث مع التكيف والآليات التي يمكن أن تشارك في استضافة الفاكهة اللدونة الطيران.
على مدى السنوات العشر الماضية كانت هناك أمثلة متعددة من انتشار الذباب Dacine في جميع أنحاء العالم ، ولا سيما تلك الموجودة في Bactrocera جنس : B. الظهراني في بولينيزيا الفرنسية ، B. carambolae في أجزاء من أمريكا الجنوبية ، B. المغيرة في أفريقيا وباء. zonata في أفريقيا وشمال البحر الأبيض المتوسط. 3،23،18 اختبار فعالية عناصر المكافحة البيولوجية مثل واو ينبغي arisanus ضد الأنواع الأخرى Bactrocera أن يكون أولوية عالية ، ويحدونا الأمل في أن تطبيق الأساليب الموصوفة في هذا البروتوكول والمادة المصاحبة الفيديو ، وتسريع خطى البحوث في واو arisanus في مجموعة متنوعة من المواقع 24. أخيرا ، قد مزيد من البحث باستخدام هذه الطريقة كنقطة انطلاق أيضا تقديم معلومات هامة للاستعمار الطفيليات البيض رواية 25،1
Disclosures
ليس لدينا أي تضارب المصالح إلى التقرير.
Acknowledgments
نشكر كيث Shigeteni للمساعدة في insectary وSostrom ناتاشا للمساعدة في رسومات الحاسوب. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل وزارة الزراعة الأميركية وتحالف اعادة تحرير. الآراء والنتائج والاستنتاجات أو التوصيات الواردة في هذا المنشور هي آراء المؤلفين ولا تعكس بالضرورة وجهات نظر وزارة الزراعة الأميركية. وزارة الزراعة هو مزود تكافؤ الفرص والعمل.
References
- Wang, X. G., Bokonon-Ganta, A. H., Ramadan, M. M., Messing, R. H. Egg-larval opiine parasitoids (Hym., Braconidae) of tephritid fruit fly pests do not attack the flowerhead-feeder Trupanea dubautiae (Dipt., Tephritidae. Journal of Applied Entomology. 128, 716-722 (2004).
- Vargas, R. I. Potential for areawide integrated management of Mediterranean fruit fly (Diptera : Tephritidae) with a braconid parasitoid and a novel bait spray. Journal of Economic Entomology. 94, 817-825 (2001).
- Vargas, R. I., Leblanc, L., Putoa, R., Eitam, A. Impact of introduction of Bactrocera dorsalis (Diptera : Tephritidae) and classical biological control releases of Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae) on economically important fruit flies in French Polynesia. Journal of Economic Entomology. 100, 670-679 (2007).
- Harris, E. J. Suppression of melon fly (Diptera: Tephritidae) populations with releases of Fopius arisanus and Psyttalia fletcheri (Hymenoptera Braconidae) in North Shore Oahu, HI, USA. Biocontrol. 55, 593-599 (2010).
- Haramoto, F. H. The Biology of Opius oophilus Fullaway (Hymenoptera: Braconidae) [dissertation]. , University of Hawaii. Honolulu, HI. (1988).
- Chong, M. Production methods for fruit fly parasites. Proceedings of the Hawaiian Entomological Society. 18, 61-63 (1962).
- Snowball, G. J., Wilson, F., Lukins, R. G. Culture and consignment techiques used for parasites introduced against Queensland fruit fly (Strumeta tryoni (Frogg).). Australian Journal of Agricultural Research. 13, 233-248 (1962).
- Ramadan, M. M., Wong, T. T. Y., Beardsley, J. W. Reproductive Behavior of Biosteres arisanus (Sonan) (Hymenoptera:Braconidae), an Egg-Larval Parasitoid of the Oriental Fruit Fly. Biological Control. 2, 28-34 (1992).
- Ramadan, M. M., Wong, T. T. Y., McInnis, D. Reproductive biology of Biosteres arisanus (Sonan), an egg-larval parasitoid of the oriental fruit fly. Biological Control. 4, 93-100 (1994).
- Harris, E. J., Okamoto, R. Y. A Method for rearing Biosteres arisanus (Hymenoptera, Braconidae) in the laboratory. Journal of Economic Entomology. 84, 417-422 (1991).
- Bautista, R. C., Harris, E. J., Lawrence, P. O. Biology and rearing of the fruit fly parasitoid Biosteres arisanus: clues to insectary propagation. Entomologia Experimentalis Et Applicata. 89, 79-85 (1998).
- Bautista, R. C., Mochizuki, N., Spencer, J. P., Harris, E. J., Ichimura, D. M. Mass-rearing of the tephritid fruit fly parasitoid Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae). Biological Control. 15, 137-144 (1999).
- Bautista, R. C., Harris, E. J., Vargas, R. I., Jang, E. B. Parasitization of melon fly (Diptera : Tephritidae) by Fopius arisanus and Psyttalia fletcheri (Hymenoptera : Braconidae) and the effect of fruit substrates on host preference by parasitoids. Biological Control. 30, 156-164 (2004).
- Rousse, P., Gourdon, F., Quilici, S. Host specificity of the egg pupal parasitoid Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae) in La Reunion. Biological Control. 37, 284-290 (2006).
- Quimio, G. M., Walter, G. H. Host preference and host suitability in an egg-pupal fruit fly parasitoid, Fopius arisanus (Sonan) (Hym., Braconidae). Zeitschrift fur Angewandtes Entomologie. 125, 135-140 (2001).
- Calvitti, M., Antonelli, M., Moretti, R., Bautista, R. C. Oviposition response and development of the egg-pupal parasitoid Fopius arisanus on Bactrocera oleae, a tephritid fruit fly pest of olive in the Mediterranean basin. Entomologia Experimentalis Et Applicata. 102, 65-73 (2002).
- Montoya, P., Suarez, A., Lopez, F., Cancino, J. Fopius arisanus oviposition in four Anastrepha fruit fly species of economic importance in Mexico. Biocontrol. 54, 437-444 (2009).
- Vargas, R. I., Shelly, T. E., Leblanc, L., Piñero, J. C. Recent Advances in Methyl Eugenol and Cue-Lure Technologies for Fruit Fly Detection, Monitoring, and Control in Hawaii. Pheromones. 83, 575-595 (2010).
- Tanaka, N., Steiner, L. F., Ohinata, K., Okamoto, R. Low-cost larval rearing medium for mass production of oriental and Mediterranean fruit flies. Journal of Economic Entomology. 62, 967-968 (1969).
- Vargas, R. I. Mass production of tephritid fruit flies. World crop pests. Fruit flies: Their biology, natural enemies and control. 3, 141-151 (1989).
- Spencer, J. P., Mochizuki, N., McInnis, D. O., Liquido, N. J. Mechanical separation of parasitoid sexes based upon size of fruit fly host pupae. Abstracts of the 2nd meeting of the Working Group on Fruit Flies of the Western Hemisphere Vina Del Mar, Chile, , (1996).
- Dukas, R., Duan, J. J. Potential fitness consequences of associative learning in a parasitoid wasp. Behavioral Ecology. 11, 536-543 (2000).
- Drew, R., Tsuruta, K., White, I. A new species of pest fruit fly (Diptera: Tephritidae: Dacinae) from Sri Lanka and Africa. African Entomology. 13, 149-154 (2005).
- Argov, Y., Gazit, Y. Biological control of the Mediterranean fruit fly in Israel: Introduction and establishment of natural enemies. Biological Control. 46, 502-507 (2008).
- Bokonon-Ganta, A. H., Ramadan, M. M., Messing, R. H. Reproductive biology of Fopius ceratitivorus (Hymenoptera : Braconidae), an egg-larval parasitold of the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata (Diptera : Tephritidae). Biological Control. 41, 361-367 (2007).
