一个优化的协议饲养 Fopius arisanus Tephritid果寄生蝇

Summary

Fopius arisanus Tephritid水果，是成功地使用这些重要的热带害虫的生物控制苍蝇的卵幼虫寄生。我们在这里描述饲养楼的优化协议arisanus在小规模使用现成材料。

Abstract

Fopius arisanus（Sonan）是一个重要的寄生的Tephritid果蝇，至少有两个原因。首先，它是一个只有三个opiine寄生蜂，已知感染的主机在卵^期 1 。其次，它具有广泛的潜在果蝇主机。也许是由于它的生活历史 ，F. arisanus已成功用于控制在^2-4多个热带地区的生物果蝇。 F.广泛使用的障碍之一控制果蝇的 arisanus是，它是难以建立一个稳定的实验室^殖民地 5-9 。尽管这一困难，在20世纪90年代，美国农业部的研究人员开发了一种可靠的方法来维持楼的实验室种群arisanus ^10-12。有极大的兴趣，是在 F arisanus生物学^13,14，尤其是关于其能力殖民各种各样的Tephritid主机^14-17;利益尤其是惊人的桔小实蝇害虫蔓延驱动，在过去十年中的^新大洲18。 F 上的进一步研究arisanus和额外部署这一物种作为生物控制剂，将有利于从饲养方式的优化和改进。在这个协议和相关视频的文章中，我们描述了一个优化的方法饲养楼arisanus基于先前描述的^方法 12 。我们在这里描述的方法，使饲养楼在没有使用的水果的小规模 arisanus，使用的材料在世界各地的热带地区与相对较低的体力劳动要求。

Protocol

1。准备主机果蝇卵寄生

1. 准备准备琼脂（另外，Gelcarin GP812，FMC生物聚合物，尤因新泽西州，更具成本效益的选项）寄生的果蝇卵充满基板的菜肴，每边长10厘米和1.5厘米的深度。准备在9克每公升水的浓度的琼脂。
2. 填写菜肴与液体培养基（约70毫升）的边缘，并让他们冷却和固化（至少45分钟）。
3. 一旦固体琼脂块，应用纸巾单层（单层的乔治亚太平洋“偏爱”批次组织），覆盖了每个块的顶部。组织应坚持容易因表面水分的琼脂。
4. 套用一个0.5毫升的量果蝇鸡蛋悬浮在水中的组织覆盖的琼脂块表面。在我们的insectary，这相当于约6000桔小实蝇（每毫升12000蛋）鸡蛋。
5. 使用干净的2.5厘米宽刷蘸水果实蝇卵均匀地分布在组织表面。
6. 将果蝇卵蜂笼的底部屏幕下允许产卵。点击屏幕底部的底面，以去除死的寄生虫，这可能会阻碍鸡蛋。这是最好的屏幕底部，如果不碰蛋。
7. 允许寄生虫排卵过夜，到第二天，约21小时。这是高比例的寄生蛋足够的时间。较长的曝光风险superparasitization。

2。孵化和化蛹寄生主机果实蝇

1. 准备饲养容器与朝上鸡蛋放置3至3.5每1.25升果蝇饮食¹⁹的寄生蛋的准备琼脂块。
2. 饮食容器放置在超过一个1.5厘米的细级蛭石或冲砂深层化蛹容器在一个较大的的提升的蛋。化蛹容器盖上盖子和胶带与胶带边缘。蛭石可重复使用过筛后（见下文）。
3. 确保有足够的空间之间的饮食容器的顶部和化蛹容器的盖子，果蝇幼虫爬出来，“流行”到^下面 vemiculite 20。
4. 化蛹容器移动到一个房间在27 ° C和80％相对湿度（RH）为一个星期。与前四天暗布盖的容器，然后取出余下的日子里布。
5. 一周后取出幼虫的饮食，一旦幼虫弹出，进入化蛹蛭石。如果有幼虫在蛭石，让他们一夜之间化蛹。
6. 筛从蛭石蛹。开始用粗筛（约3毫米），然后用一只手筛，蛭石中删除任何剩余的团块。

3。排序和选择

1. 蚕蛹含有F. arisanus可以部分隔离unparasitized果蝇大小。收集蛹1.65和2.26毫米之间，直径，因为这些将丰富寄生^蝇 12 Puparia较小，大多包含矮小的寄生蜂，更大的蛹大多含有苍蝇。还要注意，寄生蛹的女性比例呈正相关， ^大小为12 。
2. 可能采用多种方法，按大小排序的蛹。我们将描述一个机械的方法，使用自定义大小分拣^机 21 。
3. 放置在一个振动给料机慢慢饲料大小排序顶部的漏斗中的蛹。
4. 蛹送入大小分拣机，其中包括一对在30 °的角度稍有分歧，滚动酒吧。单独成一个插槽，分为十个不同的容器通过一个漏斗空阵列大小蛹下降。
5. 从尺寸范围在1.65至2.26毫米的杯子收集蛹和他们出现在一个笼子里放置7天以上，直到大多数苍蝇unparasitized蛹出现。
6. 接下来，使用一个风扇分开空puparia那些仍然含有昆虫。

4 楼arisanus出现和维护

1. 为了保持F 的殖民地arisanus使用一个可移动的玻璃前一个寄生的控股笼，约25厘米，每边长。笼子的顶部和两侧两个1毫米²甄别。笼的后面是在为9厘米的洞访问的橡胶板覆盖。笼子的底部为1 - 2mm ^2的屏幕大到足以让两个琼脂块的位置与果蝇卵寄生蜂产卵在里面长满了削减。
2. 控股笼也应该有一个沿着前面的玻璃底部季度的有色部分，以尽量减少光可以创建沿笼前蜂拥挤，导致死亡率升高。
3. 将这些选择性约11克特德蛹成塑料容器直径约9厘米。这应该产生约600-700每笼寄生虫。尺寸的选择应导致约60％为女性。
4. 将屏蔽盖的容器。盖子应覆盖²毫米2筛查，这将允许成年楼arsianus离开后出现的容器，但将包含任何剩余的果蝇。
5. 寄生虫保持在24℃，相对湿度约45％具有12:12的光照和通风良好。如果死亡率高，户外移动了几个小时，每天或增加通风的笼子，可能会降低。寄生虫应准备排卵，在延长一个星期，应为两个星期的生产。
6. 纺沿着笼子的顶部数稀释的蜂蜜至少3次每星期或可用蜂蜜干燥时。应用在窄条纹，用指尖旋转蜂蜜。请注意，如果条纹太重的蜂蜜滴进笼子的蜂蜜，如果太淡会干出快速和需要频繁地重新申请。
7. 将琼脂块（10厘米× 10厘米× 4厘米），笼子的顶部提供水分寄生虫。这些应改为每周两次。

5。代表性的成果：

我们在这里报告美国农业部F.进行质量控制程序的结果arisanus饲养在希洛，夏威夷1月5日和2010年6月22日之间的操作。在希洛的位置就在这个视频文章和协议所描述的规模养殖开始于2009年8月，最初的问题，并与新的位置调整已大多由一月解决。因此，这些数据的结果可能会得到其他研究人员开始他们的殖民地，如果他们按照协议所述的代表，一般有经验的饲养昆虫。在此期间，我们保持了 F的小殖民地arisanus：4寄生控股笼每周产生，相当于约3600 楼arisanus。

丰富的寄生率的初步检查即幼虫的饮食后，立即被删除，并进行的蛹2 g样品在尺寸范围为1.65 - 前一家控股笼发展的一个额外的一周（2.26毫米（丰富）蛹筛选和大小排序，我们称之为“初蛹”这些）。在丰富的样品在2010年首3个月的平均比例寄生虫为0.46（SD = 0.18）。这意味着在下一季度为0.58（SD = 0.08），反映了在新的位置的殖民地和饲养程序的稳定。请注意，没有成功寄生蛹的丰富，包括那些没有产生emergents产生苍蝇。

在为期一周的额外空puparia控股笼拆除后另两个克样品被送往（“晚蛹”）。果蝇代表根据这第二个样本的1％。果蝇的比例很低，部分原因是较早出现苍蝇相比，寄生虫，所以在控股容器保持最苍蝇。

最后，图1给出了从1月至2010年6月的产量在蛹质量。产量是衡量从蛹利益的大小范围，丰富了1.65-2.26毫米。 “初蛹”在今年年初的大肿块，表明果蝇的高比例和unemerged当时蛹，而正在作出调整，新的设施。

图1。产量丰富（蛹直径1.652.26毫米），早期（大小选择后立即）和“晚”（后一个星期，删除空弹壳）的ARS，USDA F. ariasnus殖民地蛹在希洛，夏威夷2010年1月 - 6月

Discussion

在本议定书所附的视频文章，我们已经描述并演示了一个优化的协议 ，饲养楼ariasnus，Tephritid果蝇寄生在实验室环境中， 。多年来，该协议已经细化，以尽量减少所需的劳动力和专门设备，以维持一个殖民地。我们注意到，需要一个完善的，生产和稳定主机果蝇的殖民地饲养寄生蜂的任何企图。我们的insectary，我们在使用一台主机果蝇桔小实蝇，但其他物种已被证明才能胜任的^主机 ，以及14-17。

F.几个方面arisanus殖民地维护有待探讨。这些措施包括^这 10种在实验室适应率， ^学习 22的机制和遗传变化与适应，这可能是在主机果蝇可塑性的机制，可能会发生。

在过去的十多年，已有Dacine苍蝇传播世界各地的多个例子，尤其是那些属实蝇：在法属波利尼西亚，B.的桔小实蝇在南美洲，B部分carambolae在非洲和 B invadens zonata在非洲和地中海北部如​​F.生物控制剂的有效性^。3,23,18测试实蝇对其他物种的 arisanus应予以高度重视，这是我们希望在本议定书和影随行的文章中介绍的方法，应用程序将加速F上的研究arisanus在更广泛的地点^24。最后，进一步研究为出发点，使用这种方法也可提供重要的信息，以新颖的卵寄生蜂的^定植 25.1