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Biology

发育研究的窗口鸡蛋

doi: 10.3791/306 Published: October 1, 2007

Summary

易于获取胚胎实验允许使用几种方法,包括鸡鹌鹑嵌合体和联络染色标记的细胞命运映射。在这篇文章中,我们展示了一个鸡蛋的制备方法,已为长期生存时间进行了优化。

Abstract

发展的研究有了很大的资助,由鸡胚作为实验模型。易于获取胚胎实验允许使用几种方法,包括鸡鹌鹑嵌合体和联络染色标记的细胞命运映射。此外,它允许分子扰动几种类型,包括安置蛋白包被的磁珠和引进利用DNA质粒在OVO电。这些实验的中枢和周围神经系统的发展上已经取得了重要数据。对于这些研究很多,有必要打开蛋壳和重合闸不扰动胚胎的成长。在连续发育阶段的胚胎可以检查,通过重新开放的蛋壳。开放这篇文章中的鸡蛋,虽然有几个优秀的方法,我们展示了一个方法,该方法已被长期的生存时间进行了优化。在此方法中,鸡蛋,在于在其一侧切开一个小窗口,在shell。实验程序后,用于支付其发展的持续时间的鸡蛋壳。透明塑料胶带覆蛋壳保护胚胎,并有助于保留在其余的潜伏期水化。此方法已被用于开始在为期两天的孵化,并已获准通过成熟的胚胎年龄的生存。

Protocol

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1。取出鸡蛋从孵化器

  1. 保持在37 °,相对湿度60%以上C。
  2. 取出蛋,翻蛋90 °,使大基地位于水平。

2。以消毒棉签鸡蛋

  1. 饱和一叠非无菌纱布,用70%乙醇。
  2. 使用两到三件拭子5个鸡蛋。丢弃的纱布时弄脏。

3。准备蛋白去除网站

  1. 剪切和地点1“× 1”3M胶带一块,只是留在基地,以保护那里的白蛋白会被抽出的面积。

4。拆除的蛋白

  1. 使用一把剪刀,在磁带中的一个小洞点。
  2. 使用18号,1寸毫针,一个10毫升注射器慢慢地,通过剪刀孔钻针。
  3. 驱动器针对鸡蛋的底部角度在45 ° C。
  4. 针向中心倾斜,并制定3至4毫升的蛋白。

5。窗口

  1. 剪切3“× 3”一块胶带,拉伸,以适合的鸡蛋的顶部。扩展平方米左右的水平面上的鸡蛋的两端圆润的边角,小心不要拉太硬。拉动磁带,这是对没有褶皱的鸡蛋表面紧。
  2. 用一双锐利的直线4“清扫剪刀,捻成磁带放在底部中心的一个洞,慢慢引导到鸡蛋降低刀片的剪刀,一定要保持对里面的提示直接对基地的外壳。刀片,慢慢开始切割的外壳在一个逆时针的方式继续进行。停止之前到达顶部中心。取出剪刀,在相反的方向重复,直到只有一小位鸡蛋仍然是附加检查,以确保卵子受精。关闭窗口。

6。关闭,重新打开和密封鸡蛋。

  1. 剪下约2-3个“长1 / 2”宽胶带和关闭的窗口,所以它适合回切孔。另1 × 1“的磁带片和密封鸡蛋从排水孔。使用一双镊子重新鸡蛋做任何操作,当你准备返回蛋的孵化器,切一块磁带是足够大的密封的窗口和鸡蛋的水平覆盖整个表面。

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Discussion

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这种方法允许长期生存倍以下实验操作。例如,染料标记研究允许生存到E10的命运映射研究(1)或更高版本。此外,它已被用于在OVO电研究提供基因表达水平的改变和所需的开发进行到以后的发育阶段(2-6)。这个窗口技术可以结合使用任何程序,要求操作的胚胎后的生存。

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rotating incubator Profi Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60%
70 % EtOH
gauze
3M plastic tape
10cc syringe 1/egg
18G needles 1½ inch needle, 1/syringe
Dissection scissors 4" sharp straight blades
Fertilized Eggs

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References

  1. Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
  2. Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
  3. Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
  4. Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
  5. Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
  6. Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
发育研究的窗口鸡蛋
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Cite this Article

J. Korn, M., S. Cramer, K. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. J. Vis. Exp. (8), e306, doi:10.3791/306 (2007).More

J. Korn, M., S. Cramer, K. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. J. Vis. Exp. (8), e306, doi:10.3791/306 (2007).

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