Summary
פגיעה נחסך עצב מודל החיה מתואר כאן כמו במודל של עכברים של כאב נוירופטי היקפי הבאים denervation חלקית של עצב השת ידי lesioning הענפים השוקה משותף עצב peroneal, עוזבים את העצב sural שנותרו ללא פגע. שינוי ההתנהגות הנובעים allodynia מכני לכמת ידי חוטים פון פריי.
Abstract
כאב נוירופטי היקפי הוא מצב חמור כאב כרוני אשר עשויים לנבוע מטראומה עצבי התחושה במערכת העצבים ההיקפית. הפגיעה חסך העצב (SNI) מודל גורם לסימפטומים של כאב נוירופתי כגון כאב מכני כלומר allodynia עקב גירויים משושי כי בדרך כלל לא לעורר תגובה כואבת [1].
המודל העכבר SNI כולל קשירת של שניים שלושה סניפים של עצב השת (העצב הטיביאלי ואת העצב peroneal משותף), בעוד העצבים sural נותר בשלמותו [2]. תוצאות פצע רגישות ניכרת באזור הלטרלי של כף רגל, אשר מעוצבבים על ידי עצב sural נחסך. הצד הלא המופעלים על העכבר יכול לשמש כביקורת. היתרונות של המודל SNI הם חוסנו של התגובה וכי היא אינה דורשת כישורים microsurgical מומחה.
סף התגובה לכאב מכני נקבעת על ידי בדיקה עם חוטים פון פריי כוח כיפוף הגדלת, אשר לחצה שוב ושוב על האזור הלטרלי של כף הרגל [3], [4]. תגובה חיובית כאב מוגדר לנסיגה כפה פתאומי, רתיעה ו / או כפה ללקק המושרה על ידי החוט. תגובה חיובית בשלושה מתוך חמישה גירויים חוזרים מוגדר סף הכאב.
כפי שמודגם בפרוטוקול וידאו, עכברים C57BL / 6 allodynia חוויה עמוקה מוקדם ככל למחרת הניתוח לשמור על זה למשך מספר שבועות.
Protocol
1. פון פריי מדידות הבסיס לפני הניתוח
במשך הליך בדיקה פריי פון, עיין בסעיף 5.
2. הרדמה / הכנה
- להרדים את החיות (הזרקה intraperitoneal מתערובת של 100mg/kg קטמין ו - 15 מ"ג / ק"ג Xylazine).
- מניחים את החיה במקום שקט עד בהרדמה מלאה (למשל מכוסה במגבת נייר).
- בדוק רפלקסים על ידי צובט את קצה הזנב ואת הכפות עם פינצטה. וודאו כי בעלי החיים מגיבים לפני שתמשיך.
- להזריק תת עורי (אזור הכתפיים לאחור) סליין איזוטוני 0.5ml עם אנטיביוטיקה, כגון אמפיצילין (כדי למנוע התייבשות ולמנוע זיהום, אם כי זו היא הליך כירורגי מינורי).
- באמצעות מכונת גילוח חשמלית, לגלח את שדה הניתוח של מעט מתחת לאזור הברך לאזור הירך (עבור ימניים אנשים האיבר השמאלית האחורית מומלץ).
- החל משחה עיניים את העיניים עם ניצן צמר גפן.
- מניחים את החיה על צדה הימני והמקום hindlimb שמאל על פלטפורמה קטנה כדי לשמור על מוגבה. אבטח את הרגל עם נייר דבק.
- לחטא את שדה הניתוח לסירוגין סקראבס של אתנול בבטאדין מחוץ לאתר כירורגית.
3. כירורגיה
- אתר את הברך עם האגודל של יד שמאל ולהשתמש אזמל לעשות אפליקציה. 1 ס"מ חתך לכיוון האורך בקרבה הברך.
- פתח את העור על ידי דיסקציה קהה באמצעות קצה של זוג מספריים סטרילית.
- הפרד את שכבת השריר על ידי דיסקציה קהה ממש ליד כלי הדם לעין, קרוב לעצם הירך (עצם הירך). אם נעשה בצורה נכונה, שכבות השריר יהיה בקלות להפריד ללא דימום בכלל, לחשוף את עצב השת ממש מתחת השרירים.
אם הדימום מתרחש למשל על ידי פגיעה כלי דם קרוב הברך, שימוש סטרילי צמר גפן ניצנים או חלקים של המבט כדי לספוג את הדם. לחץ עד שהדימום ייפסק. - מניחים את העכבר תחת מיקרוסקופ סטריאו ובזהירות להפריד את השרירים עם זוג סטרילי פינצטה (מס '2) כדי להמחיש את העצב sciatic. Retractors ניתן גם ליישם.
- זהה את האזור שבו ענפי עצב sural מתוך עצב השת. העצב sural הוא הקטן ביותר מבין שלושת הענפים, הסתעפות ימינה ברגל שמאל.
- החל תפר (6-0 תפר) סביב שני סניפים נוספים אשר עדיין פועלת במקביל (את העצבים peroneal השוקה משותף), נזהר מאוד שלא לגעת סניף sural. זהו צעד קריטי כמו עצב sural צריך להיות שנשאר שלם לחלוטין.
- צור קשר כירורגי חזק. אם הקשר הראשון הוא חזק, התכווצויות של הגפה יקויימו.
- תפוס את העצבים להיות חתך מתחת תפר עם פינצטה (מס '5) לחתוך את העצבים מעל ומתחת פינצטה עם זוג מספריים קטנים. הראשון על ידי חיתוך מעל זוג של פינצטה, משיכת העצבים הוא התחמק.
- חותכים את הקצוות תפר עם זוג מספריים מיקרו בעדינות לסגור את שכבת השריר. הוסף ירידה של לידוקאין אל הפצע תפר עם קשרים כירורגית.
4. לאחר הניתוח
- בדוק אם משחה העין עדיין מספיק.
- מניחים את העכבר בכלוב נקי תחת מגבת נייר בתנוחה נוחה. אם בחדר קר, במקום כרית תחת חום חלק הכלוב (רק תחת חלק הכלוב כמו החיה צריכים להיות מסוגלים לברוח לאזור קר יותר אם מועדפת).
- ודא מים נגיש צ'או.
5. פון פריי בדיקות (הבסיס, ומאותו יום לאחר הניתוח)
- מניחים את הגלילים עכברים באדום פלסטיק צבעוניים על השולחן התיל יומיים, יום אחד לפני הניתוח. להרגיל במשך 15 דקות בתוך צילינדרים לפני הבדיקה. הצבע האדום של הגלילים עוזר העכברים במהירות להירגע כפי שהם לא יכולים לראות אחד את השני נמצאים באזור כהה.
- ודא כי העכברים רגועים וליישם פון חוטים פריי לחלק לרוחב הכף: החל עם החוט גרם 0.02, תחילה להפעיל כוח כדי כפתו השמאלית חמש פעמים על פני תקופה כוללת של 30 שניות (כ 2 שניות לכל גירוי) ו לבחון את התגובה של העכבר אחרי כל יישום. חזור עם נימה אותו ואת כפתו השמאלית של כל העכברים האחרים, ואז להתחיל מחדש עם כף ימין של העכבר הראשון לפני שעבר נימה הבא, למשל:
- עכבר 1: כף רגל שמאל 5 פעמים עם נימה 0.02 גרם
- עכבר 2: כפה שמאל 5 פעמים עם נימה 0.02 גר 'וכו'
- עכבר 1: כף רגל ימין 5 פעמים עם נימה 0.02 גרם
- עכבר 2: כפה ימין 5 פעמים עם נימה 0.02 גר 'וכו'
- עכבר 1: כף רגל שמאל 5 פעמים עם נימה 0.04 גרם
- עכבר 2: כפה שמאל 5 פעמים עם נימה 0.04 גר 'וכו'
- המענה על שלושה לחמישה גירויים נחשבת לתגובה חיובית. חוטים מעל thresholד יכול להיות מיושם כדי לוודא את רמת הסף.
= תגובת נסיגה פתאומית כפה, פתאומי רתיעה, כפתו פתאומי ללקק.
6. נציג תוצאות
1. איור פון בדיקות פריי על C57BL / 6 עכברים גיל 8-10 שבועות בוצעה 1 יום לפני המבצע שוב ושוב לאחר הניתוח. בעלי חיים 4-8 נכללו כל קבוצה. פון בדיקות פריי בצד המופעלות מיוצג על ידי ipsilateral והצד שאינו מופעל לשלוט מיוצג על ידי הנגדי. יום לאחר הניתוח החיות לפתח רגישות יתר משמעותית על כפתו פעלו בזמן הלא פעלו רק מושפעים מעט יחסית עכברים מזויף פעלו. (* <0.05, ** <0.01, *** <0.001, יחסית ipsilateral כדי הנגדי).
Discussion
צעדים קריטיים
פגיעה בעצב sural יש להימנע כדי ללמוד לשינויים פתולוגיים את הפגיעה הבאה שלמים sural עצב את העצבים peroneal השוקה משותף. הנזק הנלווה לעצב sural עלול להוביל לשיתוק ולכן יכול להיות דמיינו כמו גרירה של הגפה האחוריות פעלה.
רק בצד הלטרלי של כף הוא מעוצבבים על ידי עצב sural חסך, ולכן, רק באזור זה מתפתח נוירופתיה. בדיקות בתחומים אחרים, מעוצבבים על ידי העצבים transected, יכול מאוד הטיה הערכת סף מכני שונה.
שינויים אפשריים
סוגים אחרים של ligations עשוי להיות משלים במונחים של לימוד התנאים כאב פתולוגי בעקבות פגיעה עצבית היקפית, כגון פגיעה התכווצות כרונית [5] או קשירת העצב חלקית [6]. כל הליך תוצאות הניסוי לשינויים פנוטיפי ברורים אשר יש לשקול טרם בדיקה שלאחר הניתוח.
יתר על כן, בדיקות חושיות אחרות כגון hyperalgesia תרמית ניתן להחיל [7], אף על פי הפנוטיפ זה SNI הבאים חזקים פחות.
יישומים עתידיים
טכניקה זו יכולה לשמש לבדיקת תרופות לשנות את פיתוח או תחזוקה של allodynia מכני [8]. ניתוח של עצב השת, הגרעינים השורש הגבי (DRG) ו / או חוט השדרה המותני לאפשר מחקר של המנגנונים המולקולריים האחראים הפנוטיפ המושרה.
ניסויים בבעלי חיים בוצע על פי נהלי מעבדה תקינים תוך ציות מלא לתקנות הדנית האירופי. כל הניסויים אושרו על ידי ניסויים בבעלי חיים דנית תחת פקוח משרד המשפטים (מספר רשות 2006/561-1206).
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי קרן לונדבק, קרן קרלסברג ו דגמר קרן מרשל.
References
- Costigan, M., Scholz, J., Woolf, C. J. Neuropathic pain: a maladaptive response of the nervous system to damage. Annu. Rev. Neurosci. 32, 1-32 (2009).
- Decosterd, I., Woolf, C. J. Spared nerve injury: an animal model of persistent peripheral neuropathic pain. Pain. 87, 149-158 (2000).
- Bourquin, A. -F., Süveges, M., Pertin, M., Gilliar, N., Sardy, S., Davidson, A. C., Spahn, D. R., Decosterd, I. Assessment and analysis of mechanical allodynia-like behavior induced by spared nerve injury (SNI) in the mouse. Pain. 122, 14.e1-14.e14 (2006).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J. Neurosci. Methods. 53, 55-63 (1994).
- Bennett, G. J., Xie, Y. -K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33, 87-107 (1988).
- Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain. 43, 205-218 (1990).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutanous hyperalgesia. Pain. 32, 77-88 (1988).
- Erichsen, H. K., Blackburn-Munro, G. Pharmacological characterization of the spared nerve injury model of neuropathic pain. Pain. 98, 151-161 (2002).
