Summary
ההליך הניתוחי המשמש ללגרום לאוטם שריר לב בעכברי ניסוי מתחיל בבית חזה שמאלי בין השלישי ואת צלעות 4 כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה שמאלית. העורק הכלל שמאלי גבעול, החזה סגור והעכבר מותר להתאושש באופן ספונטני.
Abstract
אוטם שריר הלב (MI) הוא אחד מהגורמים החשובים ביותר של תמותה בבני האדם 1-3. על מנת לשפר את התחלואה ותמותה בחולים עם אוטם לבבי שאנחנו צריכים ידע טוב יותר לגבי הפתופיזיולוגיה של שריר לב. ידע זה עשוי להיות בעל ערך להגדרת מטרות טיפוליות חדשות לטיפולים חדשניים לב וכלי דם 4. דגם MI ניסויי בעכברים הוא מודל של חיות קטנות יותר ויותר פופולרי במחקר קליני שבאוטם מושרה באמצעות קשירה קבועה או זמנית של עורק הכלל השמאלי (רע"א) 5. בסרטון הזה, אנו מתארים את שיטת צעד אחר צעד כיצד לגרום לאוטם ניסוי בעכברים.
בעלי החיים הם קודם הרדימו עם 2% isoflurane. אז העכבר לא מודע, מחובר לצינורות ומחוברים למכונת נשמה להנשמה מלאכותית. החזה השמאלי מגולח וחתך 1.5 סנטימטר לאורך קו אמצע בית השחי נעשה בעור. השרירים העיקריים הוא שמאל pectoralis בוטות dissociated עד הצלעות חשופות. שכבות השריר משך צידה וקבועה עם עפעף-מפשק. לאחר הכנות אלה, פתיחת בית החזה שמאלית מתבצעת בין הצלעות השלישיות והרביעיות כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה שמאלית. הקטע הפרוקסימלי של עורק רע"א אז גבעול עם תפר 7-0 ethilon אשר בדרך כלל גורם לגודל אוטם ~ 40% מחדר השמאלי. בסוף, החזה סגור ובעלי החיים מקבלים שיכוך כאבים לאחר ניתוח (Temgesic, 0.3 mg/50 מ"ל, IP). אותם מחזיקים בעלי החיים בכלוב חם עד להחלמה ספונטנית.
Protocol
1. טקסט פרוטוקול
- לפני שיעבור לניתוח, להרדים עכבר זכר (C57BL / 6) שהוא 6 שבועות ומעלה על ידי שאיפה של 2-5% isoflurane. בצע קמצוץ בוהן כדי לאשר שהחיה היא מספיק מורדמת.
- העכבר המודע מונח על הגב שלה על משטח חם כדי לשמור על טמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס חזה precordial בצד שמאלו מגולח.
- אבטח את העכבר למכשיר אינטובציה עם קאמרי isoflurane מלא. הכנס צינור בקוטר פנימי 0.2 לתוך קנה הנשימה של העכבר דרך פה, לאחר מכן הנח את עכבר המונשם באזור ניתוח aseptic (37 ° C על ידי בקר טמפרטורה) ולחבר את צינור endotracheal להנשמה (קצב של 120 לדקה, בלחץ של 4-6 mmH 2 O); לחטא את האזור עם פולידין ו75% אתנול.
- החל משחת עיניים לעיניו של העכבר. אלקטרודות לא.ק.ג. הרגיל על הכפות ולחבר את העכבר למקליט אק"ג. השתמש במספריים סטריליות לעשות חתך סנטימטרים 1.5 לאורך קו אמצע בית השחי. מספריים משמשים במקום באזמל כדי להימנע מפגיעה ברקמה שמתחתיו בעכברים. ואז, להשתמש במספריים קהה כולים-עצה כדי לנתח ולחזור בו שריר precordial מקיר החזה.
- מבצע פתיחת בית חזה שמאלית בין הצלעות השלישיות והרביעיות כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה השמאלית
- בהמשך חזר בי קיר בית החזה באמצעות מפשק הולם, על מנת לשפר את ההדמיה ונגישות. הסר את קרום הלב באמצעות מלקחי שיניים ומספריים קהים בקצוות.
- לקשור את העורק הכלל השמאלי על ידי הצבת המחט (מצורף עם תפר 7-0 ethilon) מתחת לעורק עם להקה של שריר לב בין המייתר והעורק. חסימה מוצלחת של עורקים הכליליים מאומתת על ידי hypokinesis / akinesis של קיר החדר השמאלי הקדמי ועל ידי השינויים של הקלטת א.ק.ג. (למשל גובה ST פלח, QRS broadening)
- סגור את החזה על ידי צבת שני תפרים (6-0 תפר ethilon) בצלעות השלישיות ורביעיות.
- השתמש תפר ethilon 5-0 כדי לסגור את העור.
- לשיכוך כאבים שלאחר ניתוח, להזריק לintraperitoneal יחיד של עצירות (0.05 מ"ג / ק"ג). בעלי החיים באופן ספונטני להתאושש בתוך 2-5 דקות לאחר הפסקת הרדמת isoflurane. לבסוף, מקם את העכבר בכלוב חם ולספק 0.6 מ"ג / מיליליטר העצירות בשתיית המים (כיסוי טקסט: 0.6 מ"ג / מ"ל במי שתייה) למניעת מצוקה שלאחר הניתוח. לעקוב מקרוב אחר העכבר במשך 24 השעות הראשונות שלאחר ניתוח.
- אקו מבוצע כדי להעריך את תפקוד לב 3 ימים לאחר אוטם שריר לב. הליך מוצלח מאומת על ידי אקינזיה בקיר החדר השמאלי הקדמי (ראה וידאו המצורף בתוצאות). בתום הניסוי, הלב ייאסף ויאוחסן ב- 80oC לחקירות נוספות. ביטוי גנים, כלומר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
| מכשיר | תיאור פונקציה |
| מספריים קהים קצה | משמש לחיתוך עור, שריר חזה בין צלעות, ותפרים |
| מפשק עין | לחשיפת נוף כירורגית |
| מלקחיים קהים קצה | נהג לתפוס עור ושרירים |
| בעל מחט | להחזיק מחט |
| 5-0 תפר | נהג לתפור עור |
| 6-0 תפר | נהג לתפור שריר חזה |
| 7-0 תפר | נהג לקשור עורקים הכליליים |
לוח 1. מכשירים המשמשים בהליך של אוטם שריר לב.
/ Ftp_upload/3093/3093figA.jpg "/>
איור א לפני קשירת עורק הכלל, אטריום שמאל, הריאה שמאלית, והקיר קדמי של חדר השמאלי נחשפו. מתחמי QRS מוצגים בא.ק. ג היו צרים וקצרים.
איור ב 'לאחר קשירת עורק הכלל, קיר הקדמי של חדר שמאלי פתח כיחלון וdiskinesia. מתחמי QRS הפכו משמעותי יותר ומגזרי ST ברור היו גבוהים, בהשוואה לאלו לפני קשירת עורקים כלילית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ההליך כירורגי לרע"א קשירה כפי שמודגם בדוח זה הוא שיטה אמינה ולשעתק לאינדוקציה של MI ניסוי בעכברים 3, 6. הקשירה של רע"א על פי פרוטוקול זה גורמת איסכמיה לבבית עוסקת בדרך כלל ~ 40% מחדר השמאלי 3. זה גורם לשינויים משמעותיים במגזר א.ק.ג. ST 7 וחיוורון גלוי על פני השטח הקדמיים של הלב. בשל אוטם שריר הלב הגדול, התמותה יכולה להיות עד 30% 8, 9. הערה צריכה להיעשות שאזור ולאחר אוטם שריר הלב infarcted תמותה עשויה להיות שונה בין זני בעלי חיים שונים. לשיטה זו יש כמה יתרונות. מיקום של חתך בעור לאורך קו אמצע בית השחי ולא בבית חזה קדמי מאפשר חקירה מאוחר יותר עם אקו. את stiches בפצע הניתוח לא מפריע להדמית אולטרסאונד מהמגזרים הקדמיים של הלב. יתר על כן, אינטובציה של עכברים מאפשרת למפעיליש מספיק זמן כדי לבצע את הניתוח. קשירת רע"א "באתרו" בתוך החזה היא יותר "פיזיולוגית" בניגוד לקשירת רע"א לאחר החצנה של כזה יניע ברדיקרדיה חמורה והיפוקסיה העולמית 10. גישה זו מחזיקה גם יתרונות על פני גישת cryoinjury המבוססת כמו זה האחרון קשור בתהליכים שונים מאלו של אוטם שריר לב איסכמיה המושרה שעשוי לבלבל את מחקרים מכניסטית של קרדיומיופתיה איסכמית pathophysiological. אנו מאמינים כי בוידאו זה וההוראות הנלוות יהיו משלימים שימושיים לטכניקות קיימות לאוטם ניסוי בעכברים.
פתרון בעיות:
- כדי לקבל ההדמיה הטובה ביותר של מבנים אנטומיים חשובים (אטריום שמאל, קיר של חדר השמאלי קדמי, וריאה שמאלית), פתיחת בית החזה השמאלית מתבצעת לרוב בין 3 והצלע הרביעית.
- להיות מודע לכך שינקבו מקרי של ATR השמאליתוצאות ium בדימום חמור שעלולים להוביל למוות של בעל החיים.
- contusion ריאות יש להימנע ככל שהוא עלול לגרום לעלייה בתמותה. אם ריאה שמאלית מכסה את הלב אחרי הפתיחה של החזה, רקמת הריאה צריכה להיות חזרה בי עדינות באמצעות מקל צמר גפן למשל.
- ריכוז גבוה של isoflurane יש להימנע. בדרך כלל 2% מisoflurane הם אופטימליים להשגת הרדמה תקינה בניתוח ההווה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
References
- Tabrizchi, R. Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).
- Pell, S., Fayerweather, W. E. Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983. N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).
- Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology. J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).
- Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee. Circulation. 113, 85-151 (2006).
- van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).
- Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction. Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).
- Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).
- Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model. J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).
- Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat. J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).
- Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).
