Summary
쥐 실험 심근 경색을 유발하는 데 사용되는 외과 수술은 심장과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 왼쪽 thoracotomy로 시작합니다. 왼쪽 관상 동맥이 출혈도 잡았되어 가슴이 폐쇄되고 마우스가 저절로 복구 할 수 있습니다.
Abstract
심근 경색 (MI)는 1-3 인간의 사망의 가장 중요한 원인 중 하나입니다. 병적 우리가 심근 국소 빈혈의 pathophysiology에 대한 더 지식이 필요 MI 환자의 사망률을 개선하기 위해. 이 지식은 혁신적인 심장 혈관 치료 4 새로운 치료 목표를 정의하는 가치가 될 수 있습니다. 쥐 실험 MI 모델은 MI는 왼쪽 관상 동맥 (LCA) 5의 영구 또는 임시 결합에 의해 유도되는 잠복기 연구에서 점점 인기를 소형 동물 모델입니다. 이 비디오에서 우리는 쥐에 실험 MI를 유도하는 방법을 단계별로 방법을 설명합니다.
동물 2 % isoflurane과 anesthetized 첫번째입니다. 의식이 마우스는 다음 intubated 및 인공 환기를위한 환풍기에 연결되어 있습니다. 왼쪽 가슴이 면도 있으며, 중간 겨드랑 선을 따라 1.5 cm의 절개는 피부에 구성되어 있습니다. 왼쪽 pectoralis 주요 근육은 퉁명스럽게 dissoc입니다갈비가 노출 될 때까지 iated. 근육 층은 떨어지게하고 눈꺼풀 - 리 트렉터로 고정되어 있습니다. 이러한 준비 후, 왼쪽 thoracotomy은 마음과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 늑골 사이에 수행됩니다. LCA 동맥의 근위 세그먼트 그런 다음 일반적으로 경색 크기 ~ 왼쪽 심실의 40 %를 유도 7-0 ethilon의 봉합과 출혈도 잡았 있습니다. 말에 가슴이 닫히고 동물 (Temgesic, 0.3 mg/50 ML, IP) 수술 진통제를받을 수 있습니다. 동물 자연 회복까지 따뜻한 케이지에 보관되어 있습니다.
Protocol
1. 프로토콜 텍스트
- 수술하기 전에, 6 세 주 또는 2-5% isoflurane의 흡입에 의해 나이가 남성 마우스 (C57BL / 6) 마취. 동물이 충분히 anesthetized 있는지 확인하기 위해 발가락 핀치을 수행합니다.
- 의식이 마우스는 37 ° C.의 일정한 온도를 유지하기 위해 따뜻한 패드에의 뒷면에 배치됩니다 왼쪽에있는 precordial 가슴이 면도 있습니다.
- isoflurane 채워진 챔버와 삽관 장치에 마우스를 고정합니다. 입으로 마우스의 기관에 0.2 내부 직경의 튜브를 삽입 한 후 무균 수술 지역 (37 ° C 온도 컨트롤러)에 intubated 마우스를 놓고 환풍기 (분 당 120 속도의 압력에 endotracheal 튜브를 연결 4-6 음 2 O)는, betadine과 75 % 에탄올로 지역을 소독.
- 마우스의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 손에 표준 ECG 전극을 배치하고 ECG 레코더에 마우스를 연결합니다. 중간 겨드랑 선을 따라 1.5 cm의 절개를 만들기 위해 멸균 가위를 사용합니다. 가위는 쥐의 기본 조직에 부상을 방지하기 위해 메스보다는 사용됩니다. 그런 다음 가슴 벽에서 precordial 근육을 해부하고 철회를 야기한 팁 선박 가위를 사용합니다.
- 마음과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하는 세 번째와 네 번째 늑골 사이의 왼쪽 thoracotomy를 수행
- 또한 시각화 및 접근성을 개선하기 위해 적절한 견인기를 사용하여 가슴 벽을 철회. 톱니 포셉 및 야기한 스쳐 가위를 사용하여 심낭을 제거합니다.
- 끈과 동맥 사이에 심근의 밴드와 함께 동맥 아래의 바늘을 (7-0 ethilon의 봉합과 함께 첨부) 배치하여 왼쪽 관상 동맥을 Ligate. 관상 동맥의 성공적인 가림이 hypokinesis / 앞 왼쪽 심실 벽의 akinesis 의해 ECG 기록의 변경 (에 의해 확인 된 예 ST 세그먼트 상승, QRS broadeniNG)
- 세 번째와 네 번째 늑골에 두 바늘 (6-0 ethilon의 봉합)을 배치하여 상자를 닫습니다.
- 피부를 닫으려면 5-0 ethilon의 봉합사를 사용하십시오.
- 수술 진통제를 들어, buprenorphine (0.05 밀리그램 / kg)의 단일 intraperitoneal 주사를 관리 할 수 있습니다. 동물은 저절로 isoflurane 마취을 중지 한 후 2-5 분 이내에 회복됩니다. 마지막으로, 따뜻한 새장에 마우스를 놓고 0.6 밀리그램 / 식수 (텍스트 오버레이 : 마시는 물에 0.6 MG / ML)에 buprenorphine의 ML 제공 수술 손해를 방지하기 위해합니다. 밀접하게 수술 후 첫 24 시간 동안 마우스를 모니터링 할 수 있습니다.
- Echocardiography는 삼일 심근 경색 후 심장 기능을 평가하기 위해 수행됩니다. 성공적인 절차는 앞 왼쪽 심실 벽의 akinesia (결과에 동봉 된 동영상을 참조)에 의해 확인된다. 실험의 끝에서 심장이 더 조사를 위해 수집 및 인 80oC 저장됩니다. 즉, 유전자 발현이.
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Representative Results
| 기계 | 기능 설명 |
| 무딘 팁 가위 | 피부, 갈비 가슴 근육, 그리고 봉합을 잘라하는 데 사용 |
| 눈 트렉터 | 수술보기를 노출하는 데 사용 |
| 무딘 팁 포셉 | 피부와 근육을 파악하는 데 사용 |
| 니들 홀더 | 바늘을 잡아 |
| 5-0 봉합 | 피부를 봉합하는 데 사용 |
| 6-0 봉합 | 가슴 근육을 봉합하는 데 사용 |
| 7-0 봉합 | 관상 동맥을 ligate하는 데 사용 |
심근 경색의 절차에 사용되는 표 1. 악기.
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관상 동맥 결합하기 전에 A. 그림, 왼쪽 아트리움, 왼쪽 폐, 그리고 왼쪽 심실의 앞쪽 벽이 노출되었다. ECG에 표시된 QRS의 단지가 좁고 짧은이었다.
관상 동맥 결합 후 그림 B., 청색증과 diskinesia을 개발 왼쪽 심실의 앞쪽 벽. QRS의 단지가 크게 넓어되고, ST 세그먼트는 분명히 관상 동맥 결합하기 전에 그에 비해 상승했다.
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Discussion
이 보고서에 보여준으로 LCA 결합에 대한 수술 절차는 마우스 3, 6 실험 MI의 유도를위한 신뢰할 수 있고 재현 방법입니다. 이 프로토콜에 따라 LCA의 결합은 일반적으로 참여 심근 국소 빈혈을 유도 ~ 왼쪽 심실 세의 40 %입니다. 이것은 심장의 앞쪽 표면에 ST 세그먼트 7 보이는 증상에 상당한 ECG 변화를 유도한다. 큰 심근 경색으로 인해, 사망률은 최대 30 % 8, 9가 될 수 있습니다. 참고 infarcted 심근 지역과 포스트 MI 사망률은 다양한 동물의 변종들 사이에서 다를 수 있습니다하여야한다. 방법은 여러 가지 장점이 있습니다. 오히려 앞 가슴 벽에 비해 중간 겨드랑 선을 따라 피부 절개의 위치는 echocardiography과 나중에 조사를 용이하게한다. 수술 상처의 stiches은 심장의 앞부분은 세그먼트의 초음파 영상을 방해하지 않습니다. 또한, 마우스의 삽관 법은 운영자가 수행 할 수 있습니다수술을 수행 할 충분한 시간이 있습니다. 가슴 내부의 LCA "에 원위치"의 결합이 심각한 bradycardia과 글로벌 hypoxia 10 유도하므로의 externalization 후 LCA의 결합에 반대하는 일환으로 "생리"입니다. 후자는 허혈성 심근증의 기계론의 연구를 먹이고 있습니다 국소 빈혈 유발 심근 경색의 사람들 별개의 pathophysiological 프로세스와 관련된되기 때문에 이러한 접근 방식은 또한 cryoinjury 기반의 접근 방식 이상의 장점을 가지고 있습니다. 우리는이 동영상과 함께 지침 쥐 실험 MI에 대한 기존 기술에 유용하게 보완 될 것이라고 생각합니다.
문제 해결 :
- 중요한 해부학 적 구조 (왼쪽 아트리움, 왼쪽 앞 심실 벽과 왼쪽 폐)의 최대 시각화를 얻으려면, 왼쪽 thoracotomy는 일반적으로 세 번째와 네 번째 늑골 사이에 수행됩니다.
- 주의 그 왼쪽 ATR의 우발적 인 구멍동물의 사망으로 이어질 수 있습니다 과다 출혈에 ium 결과이다.
- 가 증가 사망을 일으킬 수 있으므로 폐 타박상은 피해야합니다. 좌측 폐는 가슴 개통 후 마음을 다루는 경우, 폐 조직은면 - 스틱 예를 사용하여 부드럽게 후퇴해야합니다.
- isoflurane의 높은 농도는 피해야한다. isoflurane의 일반적으로 2 %는 현재 수술에 적절한 마취의 달성을위한 최적입니다.
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Disclosures
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
References
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