Summary
El procedimiento quirúrgico utilizado para inducir el infarto de miocardio experimental en ratones comienza con toracotomía izquierda entre la tercera y las costillas cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. La arteria coronaria izquierda se ligó, el pecho se cierra y el ratón se le permite recuperarse de manera espontánea.
Abstract
El infarto de miocardio (MI) es una de las causas más importantes de mortalidad en los seres humanos 1-3. Con el fin de mejorar la morbilidad y mortalidad en pacientes con infarto de miocardio que necesitamos un mejor conocimiento de la fisiopatología de la isquemia miocárdica. Este conocimiento puede ser útil para definir nuevas dianas terapéuticas innovadoras para tratamientos cardiovasculares 4. Modelo experimental en ratones MI es cada vez más popular modelo de pequeños animales en la investigación preclínica en la que MI es inducido mediante ligadura permanente o temporal de la arteria coronaria izquierda (LCA) 5. En este vídeo, se describe el método paso a paso de cómo inducir MI experimental en ratones.
El animal es primero anestesiados con isoflurano 2%. El ratón inconsciente es entonces intubado y conectado a un ventilador para la ventilación artificial. La parte izquierda del pecho se afeita y 1,5 cm de incisión a lo largo de la línea media axilar se realiza en la piel. La izquierda músculo pectoral mayor es francamente dissociated hasta que las costillas están expuestas. Las capas musculares se llevó a un lado y se fija con un párpado-retractor. Después de estos preparativos, toracotomía izquierda se lleva a cabo entre las costillas tercera y cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. El segmento proximal de la arteria LCA se liga con una sutura 7-0 Ethilon que típicamente induce un tamaño del infarto ~ 40% del ventrículo izquierdo. Al final, el pecho se cierra y los animales reciben analgesia postoperatoria (Temgesic, 0,3 mg/50 ml, ip). Los animales se mantienen en una jaula caliente hasta que la recuperación espontánea.
Protocol
1. Protocolo de Texto
- Antes de proceder a la cirugía, anestesiar a un ratón macho (C57BL / 6) que es de 6 semanas de edad o mayores por inhalación de isoflurano 2-5%. Realizar una pizca dedo del pie para confirmar que el animal es suficientemente anestesiado.
- El ratón inconsciente se coloca sobre su espalda sobre una almohadilla caliente para mantener una temperatura constante de 37 ° C. El pecho precordial en el lado izquierdo se afeitó.
- Asegure el ratón a un dispositivo de intubación con una cámara llena de isoflurano. Insertar un tubo de 0,2 de diámetro interior en la tráquea del ratón a través de la boca, a continuación, colocar el ratón intubado en un área aséptica quirúrgica (37 ° C por un controlador de temperatura) y conectar el tubo endotraqueal a un ventilador (tasa de 120 por min, presión de 4-6 mmH 2 O); desinfectar la zona con betadine y 75% de etanol.
- Aplique ungüento oftálmico de los ojos del ratón. Coloque los electrodos de ECG estándar en las patas y conectar el ratón a la grabadora de ECG. Con unas tijeras estériles para hacer una incisión de 1,5 cm a lo largo de la línea media axilar. Tijeras se utilizan en lugar de un bisturí para evitar lesiones al tejido subyacente en ratones. A continuación, utilice tijeras con puntas romas para disecar los vasos y retraer el músculo precordial de la pared torácica.
- Realizar una toracotomía izquierda entre las costillas tercera y cuarta para visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo
- Además retracción de la pared torácica usando un retractor adecuado con el fin de mejorar la visualización y la accesibilidad. Retire el pericardio mediante el uso de fórceps y tijeras dentadas de punta roma.
- Se liga la arteria coronaria izquierda mediante la colocación de la aguja (que se adjunta con 7-0 sutura Ethilon) debajo de la arteria con una banda de miocardio entre la ligadura y la arteria. Una oclusión satisfactoria de la arteria coronaria es verificada por hipocinesia / acinesia de la pared ventricular izquierda anterior y por las alteraciones del registro de ECG (por ejemplo, elevación del segmento ST, QRS broadening)
- Cierre el pecho colocando dos puntos (6-0 sutura Ethilon) sobre las costillas tercera y cuarta.
- Usar 5-0 Ethilon sutura para cerrar la piel.
- Para la analgesia postoperatoria, administrar una inyección intraperitoneal única de buprenorfina (0,05 mg / kg). Los animales espontáneamente se recuperan en 2-5 minutos después de dejar de anestesia con isoflurano. Por último, colocar el ratón en una jaula caliente y proporcionar 0,6 mg / ml de buprenorfina en el agua potable (superposición de texto: 0,6 mg / ml en el agua potable) para evitar post-operatorio angustia. Vigilar de cerca el ratón durante las primeras 24 horas después de la cirugía.
- La ecocardiografía se realizó para evaluar la función cardíaca 3 días después de un infarto de miocardio. Procedimiento exitoso es verificada por acinesia de la pared ventricular izquierda anterior (ver el video adjunto en los resultados). Al final del experimento, el corazón se recogen y almacenan en-80oC para investigaciones posteriores. Expresión génica es decir.
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Representative Results
| Instrumento | Descripción de funciones |
| Tijeras de punta roma | Se utiliza para cortar la piel, los músculos intercostales del pecho, y las suturas |
| Ojo retractor | Se utiliza para exponer vista quirúrgico |
| Fórceps con puntas romas | Se usa para sujetar la piel y el músculo |
| Soporte de la aguja | Para retener una aguja |
| 5-0 sutura | Utilizado para suturar la piel |
| 6-0 sutura | Se utiliza para suturar músculo del pecho |
| 7-0 sutura | Usados para ligar la arteria coronaria |
Tabla 1. Instrumentos utilizados en el procedimiento de infarto de miocardio.
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Figura A. Antes de la ligadura de la arteria coronaria, la aurícula izquierda, el pulmón izquierdo, y la pared anterior del ventrículo izquierdo fueron expuestos. Los complejos QRS en el ECG muestra eran estrechas y cortas.
Figura B. Después de la ligadura de la arteria coronaria, la pared anterior del ventrículo izquierdo y cianosis desarrollado discinesia. Los complejos QRS se convirtió en significativamente más amplio y los segmentos ST fueron elevados obviamente, en comparación con los de antes ligadura de la arteria coronaria.
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Discussion
El procedimiento quirúrgico para la ligadura de LCA como se demuestra en este informe es un método fiable y reproducible para la inducción de infarto de miocardio experimental en ratones 3, 6. La ligación de LCA de acuerdo con este protocolo induce isquemia miocárdica acoplamiento típicamente ~ 40% de ventrículo izquierdo 3. Esto induce importantes cambios en el ECG en el segmento ST 7 y palidez visible en la superficie anterior del corazón. Debido a la gran infarto de miocardio, la mortalidad puede ser de hasta 30% 8, 9. Una nota debe hacer que la mortalidad por infarto de miocardio y después de la zona de MI-puede ser diferente entre las cepas de varios animales. El método tiene varias ventajas. La colocación de la incisión de la piel a lo largo de la línea axilar media en vez de en la pared anterior del tórax facilita la posterior investigación con ecocardiografía. Los puntos de sutura en la herida operatoria no interfieren con la formación de imágenes por ultrasonido de los segmentos anteriores del corazón. Por otra parte, la intubación de los ratones permite al operadordispongan del tiempo necesario para realizar la cirugía. La ligadura de la LCA "in situ" en el interior del pecho es más "fisiológico", en oposición a la ligadura del ACV después de la externalización de la ya que esto induce bradicardia severa e hipoxia mundial 10. Este enfoque también tiene ventajas sobre el enfoque basado en criolesión como la última está asociada con procesos fisiopatológicos distintos de los de la isquemia inducida por infarto de miocardio que puede confundir los estudios mecanísticos de miocardiopatía isquémica. Creemos que este video y las instrucciones adjuntas será de complemento útil a las técnicas existentes para MI experimental en ratones.
Solución de problemas:
- Para obtener la mejor visualización de las estructuras anatómicas importantes (aurícula izquierda, la pared ventricular izquierda anterior, y el pulmón izquierdo), la toracotomía izquierda se realiza generalmente entre la tercera y la cuarta costilla.
- Tenga en cuenta que la punción accidental de la izquierda atrium resultados en el sangrado grave que puede conducir a la muerte del animal.
- Contusión pulmonar se debe evitar ya que puede causar una mayor mortalidad. Si pulmón izquierdo se cubre el corazón después de la apertura del tórax, el tejido pulmonar se debe retraer suavemente utilizando, por ejemplo algodón-stick.
- La alta concentración de isoflurano se debe evitar. Típicamente 2% de isoflurano es óptima para la consecución de una adecuada anestesia en la cirugía actual.
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Disclosures
No hay conflictos de interés declarado.
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