Summary
Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.
Abstract
Miyokard enfarktüsü (MI) 1-3 insanlarda mortalitenin en önemli nedenlerinden biridir. Morbidite ve miyokardiyal iskemi patofizyolojisinde hakkında daha yeterli bilgiye ihtiyacınız MI hastalarda mortalite artırmak için. Bu bilgi, yenilikçi kardiyovasküler tedavileri 4 için yeni tedavi hedefleri tanımlamak için değerli olabilir. Farelerde Deneysel MI modeli MI sol koroner arter (LCA) 5 daimi veya geçici ligasyonu ile indüklenen olduğu preklinik araştırma giderek daha popüler bir küçük hayvan modelidir. Bu videoda, biz farelerde deneysel MI ikna etmek için nasıl adım-adım yöntemi açıklanmaktadır.
Hayvan% 2 izofluran ile ilk anestezi olduğunu. Bilinçsiz fare sonra entübe ve yapay solunum için ventilatöre bağlı. Sol göğüs traş edilir ve orta koltuk altı hat boyunca 1,5 cm'lik bir kesi deri yapılır. Sol pektoralis major kas açıkça dissoc olduğunukaburga maruz kadar iated. Kas tabakaları kenara çekti ve gözünü-retraktörü ile sabitlenir. Bu hazırlıklardan sonra, sol torakotomi uygulandı, kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburga arasında gerçekleştirilir. LCA arter proksimal segmenti sonra genellikle bir infarkt ~ sol ventrikül% 40 tetikleyen bir 7-0 ethilon sütür ile bağlandı edilir. Sonunda, göğüs kapalı ve hayvanlar (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip), ameliyat sonrası analjezi almak edilir. Hayvanlar spontan iyileşme kadar sıcak bir kafes içinde tutulur.
Protocol
1. Protokol Metni
- Cerrahiye geçmeden önce, 6 haftalıktan veya% 2-5 izofluran inhalasyonu ile eski bir erkek fare (C57BL / 6) uyutmak. Hayvan yeterince anestezi olduğunu onaylamak için bir ayak tutam gerçekleştirin.
- Bilinçsiz fare 37 ° C sabit sıcaklıkta korumak için sıcak ped sırtını üzerine yerleştirilir Sol tarafta sadece göğüs göğüs traş edilir.
- Bir izofluran dolu haznesi ile entübasyon cihaza fare sabitleyin. Ağız yoluyla fare trakea içine 0.2 iç çapa sahip bir boru takın ve aseptik bir cerrahi alanı (37 ° C arası bir sıcaklık kontrol cihazı ile) üzerine, entübe fare yer ve bir vantilatör (dakika başına yaklaşık 120 oranı, basınç ile endotrakeal tüp bağlamak 4-6 mmH 2 O); betadin ve% 75 etanol ile bölgeyi dezenfekte.
- Farenin gözleri oftalmik merhem uygulayın. Pençeleri standart EKG elektrotlar yerleştirin ve EKG kaydediciye fare bağlayabilirsiniz. Orta aksiller hat boyunca 1.5 cm'lik bir kesi yapmak için steril makas kullanın. Makas farelerde temel doku hasarı önlemek için neşter yerine kullanılır. Ardından, göğüs duvarından prekordiyal kas teşrih ve geri çekmek için künt uçlu gemi makas kullanın.
- Kalp ve sol akciğer ön yüzeyinde görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburga arasında bir sol torakotomi gerçekleştirin
- Ayrıca görselleştirme ve erişilebilirlik geliştirmek için uygun bir retraktör kullanarak göğüs duvarı geri çekin. Dişli forseps ve künt uçlu makas kullanılarak perikard çıkarın.
- Bağ ve arter arasında bir miyokard bandı ile arter altında iğne (7-0 ethilon sütür ile ekli) koyarak sol koroner arter Arter. Koroner arterin başarılı bir oklüzyon hipokinezi / ön sol ventrikül duvar akinezi tarafından ve EKG kayıt değişiklikleri (tarafından doğrulanır örn: ST segment yüksekliği, QRS broadening)
- Üçüncü ve dördüncü kaburga üzerine iki dikiş (6-0 ethilon sütür) koyarak göğüs kapatın.
- Cilt kapatmak için 5-0 ethilon sütür kullanın.
- Post-operatif analjezi için, buprenorfin (0.05 mg / kg), tek bir intraperitoneal enjeksiyon yönetmek. Hayvanlar kendiliğinden izofluran anestezisi durdurduktan sonra 2-5 dakika içinde iyileşir. Sonuç olarak, sıcak bir kafes içinde fare yer ve 0.6 mg / içme suyu (metin kaplama: içme suyunda 0.6 mg / ml) içinde buprenorfinin ml sağlamak ameliyat sonrası acı önlemek için kullanılır. Yakından cerrahi sonrası ilk 24 saat için fareyi izler.
- Ekokardiyografi 3 gün miyokard infarktüsü sonrası kardiyak fonksiyonunu değerlendirmek için yapılır. Başarılı prosedürü ön sol ventrikül duvarında akinezi (Sonuçlar ekteki videoyu görmek) tarafından doğrulanmıştır. Deneyin sonunda, kalp daha ileri araştırmalar için toplanmış ve in-80oC saklanır. Yani gen ifadesi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
| Alet | Fonksiyon açıklaması |
| Blunt-ucu makas | Cilt, interkostal göğüs kas ve sütürler kesmek için kullanılır |
| Göz retraktör | Cerrahi görünümü ortaya çıkarmak için el |
| Blunt-ucu forseps | Deri ve kas kavramak için kullanılır |
| İğne tutucu | Bir iğne tutun |
| 5-0 sütür | Deri dikiş el |
| 6-0 sütür | Göğüs kas dikiş el |
| 7-0 sütür | Koroner arter Arter için kullanılır |
Miyokard infarktüsü yordamda kullanılan Tablo 1. Aletleri.
/ Ftp_upload/3093/3093figA.jpg "/>
Koroner arter ligasyonu önce A. Şekil, sol atriyum, sol akciğer ve sol ventrikül ön duvarı ortaya çıkarılmıştır. EKG gösterilen QRS dar ve kısa idi.
Koroner arter ligasyonu sonra Şekil B., siyanoz ve diskinezi gelişen sol ventrikül ön duvar. QRS kompleksleri önemli ölçüde geniş oldu ve ST segment Açıkçası koroner arter ligasyonu öncesine göre, yükselmişti.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu raporda gösterildiği gibi LCA ligasyon için cerrahi prosedür fareler 3, 6 deneysel MI indüksiyonu için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntemdir. Bu protokole göre LCA ligasyonu genellikle çekici miyokardiyal iskemiye neden olur ~ sol ventrikül 3 40%. Bu kalbin ön yüzünde ST segment 7 ve görünür solukluk önemli EKG değişiklikleri indükler. Büyük miyokardiyal enfarktüs nedeniyle, ölüm oranı% 30 oranında 8, 9 olabilir. Not, miyokard enfarktüslü alan ve ölüm sonrası MI çeşitli hayvan türleri arasında farklı olabilir, ki yapılmalıdır. Bu yöntem çeşitli avantajlar vardır. Yerine göğüs ön duvarında daha orta aksiller hat boyunca cilt kesisi Yerleştirme ekokardiyografi ile daha sonra incelemek kolaylaştırır. Operatif yara dikiş kalp anterior segment ultrason görüntüleme ile karışmaz. Ayrıca, farelerin entübasyon operatör olanak tanırameliyatı gerçekleştirmek için yeterli zamanımız var. Göğüs içine LCA "in situ" The ligation bu ağır bradikardi ve küresel hipoksi 10 neden olacak gibi bir dışsallaştırılmasını sonra LCA ligasyonu karşıt olarak daha fazla "fizyolojik" dir. Ikincisi iskemik kardiyomiyopati mekanik çalışmalar yanıltabilecek iskemiye bağlı miyokard infarktüsü olanlar farklı patofizyolojik süreçleri ile ilişkili olarak bu yaklaşım aynı zamanda cryoinjury-temelli yaklaşım üzerinde avantajlara sahip. Bu video ve ekli talimatlar farelerde deneysel MI için mevcut teknikler için yararlı kompleman olacağını düşünüyoruz.
Sorun Giderme:
- Önemli anatomik yapılar (sol atriyum, sol ön ventrikül duvar ve sol akciğer) en iyi görselleştirme elde etmek için, sol torakotomi genellikle üçüncü ve dördüncü kaburga arasında yapılır.
- Unutmayın ki sol ATR yanlışlıkla ponksiyonhayvanın ölümüne neden olabilir şiddetli kanama ium sonuçlar.
- Bu artmış mortaliteye neden olabilir Akciğer kontüzyonu kaçınılmalıdır. Sol akciğer göğüs açıldıktan sonra kalp kapatıyorsa, akciğer dokusu pamuk sopa gibi kullanarak yavaşça geri çekilmelidir.
- Izofluran yüksek konsantrasyon kaçınılmalıdır. İzofluran Genellikle 2% bugünkü cerrahisinde uygun anestezi başarı için en uygunudur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
References
- Tabrizchi, R. Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).
- Pell, S., Fayerweather, W. E. Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983. N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).
- Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology. J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).
- Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee. Circulation. 113, 85-151 (2006).
- van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).
- Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction. Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).
- Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).
- Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model. J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).
- Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat. J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).
- Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).
