Summary
Intravitreale Injektion ist eine weit verbreitete Technik in Visual Sciences Forschung für Augenerkrankungen oder als direkte Anwendung der lokalen Behandlung. Dieses Video demonstriert ein Protokoll für die intravitreale Injektion mit einer 1 ml Spritze mit Glaspipette. Nützliche Tipps zum Vermeiden von massiven Blutungen und Linse beschädigen gegeben sind.
Abstract
Intravitreale Injektion ist eine weit verbreitete Technik in Visual Sciences Forschung. Es kann benutzt werden, um Tiermodelle mit Augenerkrankungen oder als direkte Anwendung der lokalen Behandlung zu etablieren. Dieses Video stellt, wie man einfache und kostengünstige Tools verwenden, um die intravitreale Injektion Vorgang zu beenden. Die Verwendung einer 1 ml Spritze, statt eines hemilton Spritze verwendet wird. Praktische Tipps, wie Sie geeignete Injektionsnadeln mit Glas-Pipetten mit perfekten Tipps, und wie man ganz einfach verbinden die Nadel der Spritze mit der Glaspipette dicht zusammen, gegeben sind.
Zur Durchführung einer guten intravitrealen Injektion, gibt es drei Aspekte zu beachten: 1) an der Injektionsstelle sollte nicht stören Netzhaut Struktur, 2) Blutung sollte vermieden werden, um das Risiko einer Infektion zu verringern; 3) Objektiv sollte unangetastet an traumatische Katarakt zu vermeiden. Kurz gesagt, ist der wichtigste Punkt, um die Unterbrechung des normalen Auges Struktur zu reduzieren. Um zu vermeiden, Unterbrechung der Netzhaut, war die überlegene Nasenregion der Ratte Auge gewählt. Außerdem wurde der Einstichstelle der Nadel an der par planar, was etwa 1,5 mm von der Limbus-Region der Ratte Auge war. Eine kleine Menge des Glaskörpers wird sanft durch das Punktionsloch geschoben, um den Augeninnendruck vor der Injektion zu reduzieren. Mit dem 45 ° Einspritzwinkel, ist es weniger wahrscheinlich, dass traumatische Katarakt in der Ratte Auge verursachen, wodurch Komplikationen und der Einfluss von linsenförmigen Faktoren. Bei dieser Operation gab es kein Schneiden der Bindehaut und der Augenmuskeln, keine Blutungen. Mit schnellen und leichten Verletzungen, kann eine erfolgreiche intravitrealen Injektion in Minuten erledigt werden.
Die Injektion gesetzt in diesem Protokoll beschriebenen ist spezifisch für intravitreale Injektion. Allerdings können die Methoden und Materialien vorgestellt hier auch für andere Injektionsverfahren in Drug-Delivery an das Gehirn, Rückenmark oder anderen Organen in kleine Säugetiere verwendet werden.
Protocol
- Bereiten Sie die Glaspipetten mit Pipetten Abzieher, verbinden Sie es zu einem 1ml Spritze, und versiegeln Sie die Verbindung mit Parafilm. Ziehen Sie 2 ml der Lösung in die Spitze der Pipetten und erhalten für die Injektion bereit.
- Betäuben die Ratte durch intraperitoneale Injektion von Ketamin (80mg/kg) und Xylazin (8mg/kg) (Volumen-Verhältnis bei 2:1).
- Einen Tropfen von 0,5% Alcaine der Ratte Augen, als topische Anästhetika vor intravitrealen Injektion.
- Position der Ratte und setzen die überlegene nasalen Bereich des Auges.
- Verwenden Sie eine 30-Gauge-Nadel zu durchstechen die überlegene nasal Sklera auf der Ebene der par plana. Berühren Sie nicht die Augenmuskeln und Gefäße.
- Geben Sie dem Augapfel leichten Druck loszuwerden eine kleine Menge von Glaskörper durch die Punktionsloch aus der hinteren Kammer.
- Führen Sie die Spitze der Glaspipette durch die Punktionsloch in einem 45 °-Winkel durch die Lederhaut in den Glaskörper. Inject 2 ml Lösung in die hintere Kammer und halten in für etwa ein paar Sekunden, dann entfernen Sie vorsichtig die Nadel. Berühren Sie das Objektiv und intraokularen Gefäße.
- Nach intravitrealen Injektion, gelten Augenheilkunde Tobrex Salbe auf die Ratte Auge um Infektionen zu vermeiden.
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Discussion
Gute intravitrealen Injektion ist nützlich für die Gründung Tiermodell sowie direkte intraokulare Behandlung. Erstens sollte der Injektionsstelle nicht stören Netzhaut-Struktur. Zweitens, Blutungen zu vermeiden, um das Risiko einer Infektion zu verringern. Drittens Objektiv sollte unangetastet an traumatische Katarakt zu vermeiden. Am wichtigsten ist es, die Unterbrechung des normalen Auges Struktur zu reduzieren.
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Disclosures
Die Tiere wurden nach dem Protokoll für die Verwendung von tierischem in der Forschung durch den Ausschuss für den Einsatz von lebenden Tieren in Forschung und Lehre (CULATR) der University of Hong Kong und der Association for Research in Vision and Ophthalmology Statements für das genehmigte behandelt Verwendung von Tieren in Ophthalmic and Vision Research.
Acknowledgments
Die Studie des Glaukoms in diesem Labor wird von der National Glaucoma Research von American Health Assistant Foundation unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
