Summary
حقن Intravitreous هو التقنية المستخدمة على نطاق واسع في بحوث العلوم البصرية لأمراض العين أو التطبيق المباشر للعلاج المحلية. أثبت هذا الفيديو على بروتوكول للحقن intravitreous باستخدام المحاقن 1ml مع ماصة الزجاج. يتم إعطاء نصائح مفيدة حول تجنب نزيف حاد وتلف العدسة.
Abstract
حقن Intravitreous هو التقنية المستخدمة على نطاق واسع في بحوث العلوم البصرية. يمكن استخدامه لإنشاء النماذج الحيوانية مع أمراض العين أو التطبيق المباشر للعلاج المحلية. يقدم هذا الفيديو كيفية استخدام أدوات بسيطة وغير مكلفة لإنهاء إجراءات حقن intravitreous. ويستخدم استخدام حقنة 1 مل ، بدلا من الحقنة hemilton. يتم إعطاء نصائح عملية لكيفية جعل إبر الحقن المناسبة باستخدام ماصات زجاجية مع نصائح الكمال ، وكيفية الاتصال بسهولة إبرة حقنة مع ماصة الزجاج معا بإحكام.
لإجراء الحقن intravitreous جيدة ، وهناك ثلاثة جوانب التي يجب مراعاتها : 1) موقع الحقن لا ينبغي أن يعطل بنية شبكية العين ، 2) وينبغي تجنب النزيف للحد من خطر العدوى ، 3) وينبغي ألا تمس عدسة ساد لتجنب الصدمة. باختصار ، فإن النقطة الأكثر أهمية هو للحد من انقطاع بنية العين العادية. لتجنب انقطاع من شبكية العين ، وقد تم اختيار المنطقة العلوية من الأنف العين الفئران. أيضا ، فإن النقطة ثقب الإبرة في مستو قدم المساواة ، والذي كان حوالي 1.5 ملم من المنطقة الحوفي من العين الفئران. يتم الضغط بلطف كمية صغيرة من السائل الزجاجي من خلال ثقب ثقب لتخفيض ضغط العين قبل الحقن. مع زاوية 45 ° الحقن ، فإنه من غير المحتمل ان يسبب صدمة الساد في العين الفئران ، وبالتالي تجنب المضاعفات المتصلة بها ، وتأثير العوامل من العدسية. في هذه العملية ، لم يكن هناك قطع للعضلات العين والملتحمة ، عدم وجود نزيف. مع إصابة طفيفة وسريعة ، يمكن القيام حقنة intravitreous ناجحة في غضون دقائق.
تعيين الخطوط العريضة لحقن في هذا البروتوكول غير محددة خاصة للحقن intravitreous. ومع ذلك ، يمكن أيضا الأساليب والمواد المقدمة هنا يمكن استخدامها لحقن الإجراءات الأخرى في توصيل الدواء إلى الدماغ والنخاع الشوكي أو الأجهزة الأخرى في الثدييات الصغيرة.
Protocol
- اعداد الماصات الزجاج باستخدام ماصات مجتذب ، لأنه ربط حقنة 1ml ، وختم الاتصال مع parafilm. سحب 2 مل من محلول في غيض من الماصات والاستعداد للحقن.
- تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق الكيتامين (80mg/kg) وزيلازين (8mg/kg) (نسبة حجم في 2:1).
- تطبيق قطرة واحدة من 0.5 ٪ إلى alcaine أعين الفئران كما التخدير الموضعي قبل الحقن intravitreous.
- موقف للفئران ، وتعريض المنطقة العلوية من الأنف والعين.
- استخدام إبرة قياس 30 إلى ثقب الأنف المتفوقة الصلبة في مستوى مسطح الاسمية. تجنب لمس العين العضلات والأوعية.
- تعطي ضغط العين الكرة خفيفة للتخلص من كمية صغيرة من الجسم الزجاجي من خلال ثقب ثقب من الغرفة الخلفية.
- إدراج غيض من ماصة الزجاج من خلال ثقب ثقب في زاوية 45 درجة من خلال الصلبة في الجسم الزجاجي. حقن 2 مل من محلول في الغرفة الخلفية والاحتفاظ بها في مكان للعن بضع ثوان ، ثم إزالة الإبرة بلطف. تجنب لمس العدسة داخل العين والأوعية.
- بعد الحقن intravitreous ، وتطبيق مرهم للعين Tobrex على العين الفئران لمنع العدوى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
حسن الحقن intravitreous مفيد لإنشاء النموذج الحيواني فضلا عن المعاملة داخل العين مباشرة. أولا ، يجب أن لا تعطل موقع الحقن بنية شبكية العين. وينبغي تجنب الثاني ، ونزيف للحد من مخاطر العدوى. وينبغي ألا تمس الثالثة ، ساد العدسة لتجنب الصدمة. الأكثر أهمية هو للحد من انقطاع بنية العين العادية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وقد تم التعامل مع هذه الحيوانات وفقا لبروتوكول لاستخدام الحيوانات في البحوث التي وافقت عليها لجنة استخدام حيوانات حية في التدريس والبحث (CULATR) من جامعة هونج كونج ورابطة للبحوث في مجال طب العيون والرؤية ببيانات عن استخدام الحيوانات في البحوث البصريات والرؤية.
Acknowledgments
وتدعم دراسة الزرق في هذا المختبر الوطني للأبحاث الزرق من مؤسسة الصحة الاميركية مساعد.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
