Summary
Injection intravitréenne est une technique largement utilisée dans la recherche en sciences visuelle pour les maladies oculaires ou comme application directe de traitement local. Cette vidéo a démontré un protocole d'injection intravitréenne aide d'une seringue de 1ml avec verre pipette. Conseils utiles au sujet d'éviter une hémorragie massive et endommager la lentille sont donnés.
Abstract
Injection intravitréenne est une technique largement utilisée dans la recherche en sciences visuelle. Il peut être utilisé pour établir des modèles animaux de maladies oculaires ou comme application directe de traitement local. Cette vidéo explique comment utiliser des outils simples et peu coûteux pour terminer la procédure d'injection intravitréenne. L'utilisation d'une seringue de 1 ml, au lieu d'une seringue hemilton, est utilisé. Conseils pratiques pour savoir comment faire les aiguilles d'injection appropriés en utilisant des pipettes en verre avec des conseils parfaits, et la façon de connecter facilement l'aiguille de la seringue avec la pipette en verre étroitement ensemble, sont donnés.
Pour effectuer une injection intravitréenne de bons, il ya trois aspects doivent être observées: 1) au site d'injection ne devrait pas perturber la structure rétine; 2) la saignée devrait être évitée afin de réduire le risque d'infection; 3) l'objectif doit être intacte pour éviter la cataracte traumatique. En bref, le point le plus important est de réduire l'interruption de la structure oculaire normale. Pour éviter toute interruption de la rétine, la région supérieure du nez de l'oeil de rat a été choisi. Aussi, du point de ponction de l'aiguille était au pair planaire, qui était d'environ 1,5 mm de la région du limbe de l'oeil chez le rat. Une petite quantité de corps vitré est doucement poussé par le trou de ponction afin de réduire la pression intraoculaire avant l'injection. Avec l'angle de 45 ° injection, il est moins susceptible de provoquer une cataracte traumatique dans l'oeil de rat, évitant ainsi les complications liées à des facteurs d'influence et lenticulaires. Dans cette opération, il n'y avait pas de coupe de la conjonctive et du muscle oculaire, pas de saignement. Avec des blessures mineures et rapide, une injection intravitréenne de succès qui peut être fait en quelques minutes.
L'injection mis décrites dans ce protocole particulier est spécifique pour l'injection intravitréenne. Cependant, les méthodes et les matériaux présentés ici peuvent aussi être utilisés pour les procédures d'injection dans la livraison de médicaments vers le cerveau, la moelle épinière ou d'autres organes chez les petits mammifères.
Protocol
- Préparer les pipettes en verre à l'aide des pipettes extracteur, le relier à une seringue 1ml, et scelle le lien avec du parafilm. Retirer 2 ml de solution dans l'embout de la pipette et soyez prêt pour l'injection.
- Anesthésier le rat par injection intra-péritonéale de la kétamine (80mg/kg) et de xylazine (8mg/kg) (rapport de volume à 02h01).
- Appliquez une goutte d'Alcaine 0,5% pour les yeux rat comme anesthésique topique avant l'injection intravitréenne.
- Position du rat et d'exposer la région supérieure du nez de l'œil.
- Utiliser une aiguille de calibre 30 pour perforer la sclère nasales supérieures au niveau de l'plana nominale. Evitez de toucher les muscles oculaires et des vaisseaux.
- Donner la pression oculaire légère à billes pour se débarrasser d'une petite quantité de corps vitré à travers le trou de ponction de la chambre postérieure.
- Insérez l'extrémité de la pipette en verre à travers le trou de ponction à un angle de 45 ° à travers la sclère dans le corps vitré. Injecter 2 ml de solution dans la chambre postérieure et de garder en place pendant environ quelques secondes, puis retirez délicatement l'aiguille. Evitez de toucher les lentilles intraoculaires et des vaisseaux.
- Après l'injection intravitréenne, appliquer une pommade ophtalmique Tobrex sur l'oeil de rat pour prévenir l'infection.
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Discussion
Bonne injection intravitréenne est utile pour établir des modèles animaux ainsi que le traitement intra-oculaire directe. Tout d'abord, au site d'injection ne devrait pas perturber la structure rétine. Deuxièmement, la saignée devrait être évitée afin de réduire le risque d'infection. Troisièmement, la lentille doit être intacte pour éviter la cataracte traumatique. Le plus important est de réduire l'interruption de la structure oculaire normale.
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Disclosures
Les animaux ont été traités selon le protocole pour l'utilisation des animaux dans la recherche approuvée par le Comité sur l'utilisation d'animaux vivants dans l'enseignement et la recherche (CULATR) de l'Université de Hong Kong et l'Association pour la recherche dans les déclarations de vision et ophtalmologie pour la utilisation des animaux dans la recherche en ophtalmologie et de la vision.
Acknowledgments
L'étude de glaucome dans ce laboratoire est soutenu par la National recherche sur le glaucome de la Fondation américaine adjointe de la santé.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
