Summary
Iniezione intravitreale è una tecnica ampiamente utilizzata nella ricerca visiva scienze per le malattie oculari o come applicazione diretta del trattamento locale. Questo video dimostra un protocollo per l'iniezione intravitreale usando una siringa da 1 ml con pipetta di vetro. Consigli utili su come evitare emorragia massiva e danno al cristallino sono dati.
Abstract
Iniezione intravitreale è una tecnica ampiamente utilizzata nella ricerca visiva scienze. Può essere utilizzato per stabilire modelli animali affetti da malattie oculari o come applicazione diretta del trattamento locale. Questo video spiega come utilizzare strumenti semplici e poco costosi per completare la procedura di iniezione intravitreale. L'uso di una siringa da 1 ml, invece di una siringa hemilton, viene utilizzato. Consigli pratici su come rendere aghi da iniezione appropriate con pipette in vetro con punte perfetto, e come collegare facilmente l'ago della siringa con la pipetta di vetro strettamente insieme, sono dati.
Per condurre una bella iniezione intravitreale, ci sono tre aspetti da osservare: 1) al sito di iniezione non deve disturbare la struttura della retina, 2) sanguinamento deve essere evitato per ridurre il rischio di infezione, 3) le lenti devono essere intatte per evitare cataratta traumatica. In sintesi, il punto più importante è quello di ridurre l'interruzione della struttura oculare normale. Per evitare l'interruzione della retina, la regione superiore nasale dell'occhio ratto è stato scelto. Inoltre, il punto di puntura dell'ago era al pari planare, che è stato di circa 1,5 mm dalla regione limbare dell'occhio ratto. Una piccola quantità di vitreo è leggermente spinto fuori attraverso il foro di puntura di ridurre la pressione intraoculare prima dell'iniezione. Con l'angolo di 45 ° ad iniezione, è meno probabilità di causare cataratta traumatica negli occhi ratto, evitando le complicazioni legate e l'influenza da fattori lenticolare. In questa operazione, non c'era il taglio del muscolo e la congiuntiva oculare, nessun sanguinamento. Con danno rapido e minori, una iniezione intravitreale di successo può essere fatto in pochi minuti.
L'iniezione di cui al presente protocollo particolare è specifica per iniezione intravitreale. Tuttavia, i metodi ei materiali qui presentati possono essere utilizzati anche per le procedure di iniezione nella somministrazione di farmaci al cervello, midollo spinale o altri organi di piccoli mammiferi.
Protocol
- Preparare le pipette di vetro con l'estrattore pipette, collegarlo ad una siringa da 1 ml, e sigillare il collegamento con parafilm. Prelevare 2 ml di soluzione nella punta delle pipette e preparati per l'iniezione.
- Anestetizzare il ratto di iniezione intra-peritoneale di ketamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (rapporto tra volume a 2:1).
- Applicare una goccia di 0,5% Alcaine agli occhi ratto come anestetici topici prima iniezione intravitreale.
- Posizionare il ratto ed esporre la regione nasale superiore dell'occhio.
- Utilizzare un ago da 30 gauge per forare la sclera superiore nasale a livello del plana par. Evitare di toccare i muscoli oculari e dei vasi.
- Dare la palla leggera pressione oculare per sbarazzarsi di una piccola quantità di vitreo attraverso il foro puntura dalla camera posteriore.
- Inserire la punta della pipetta di vetro attraverso il foro di puntura ad un angolo di 45 ° attraverso la sclera nel corpo vitreo. Iniettare 2 ml di soluzione nella camera posteriore e tenere in posizione per circa pochi secondi, poi rimuovere delicatamente l'ago. Evitare di toccare le lenti intraoculari e dei vasi.
- Dopo l'iniezione intravitreale, applicare pomata oftalmica Tobrex sull'occhio ratto per prevenire l'infezione.
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Discussion
Iniezione intravitreale bene è utile per stabilire modelli animali, nonché dirette trattamento intraoculare. In primo luogo, sito di iniezione non dovrebbe sconvolgere la struttura della retina. In secondo luogo, il sanguinamento dovrebbe essere evitato per ridurre il rischio di infezione. In terzo luogo, l'obiettivo dovrebbe essere intatto per evitare cataratta traumatica. La cosa più importante è quello di ridurre l'interruzione della struttura oculare normale.
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Disclosures
Gli animali sono stati trattati secondo il protocollo per l'uso di animali nella ricerca approvato dalla commissione per l'uso di animali vivi in didattica e la ricerca (CULATR) dell'Università di Hong Kong e l'Associazione per la Ricerca in Oftalmologia dichiarazioni di visione e per la uso di animali nelle oftalmica e di ricerca Vision.
Acknowledgments
Lo studio del glaucoma in questo laboratorio è supportato da National Research glaucoma da Fondazione Assistente Salute americano.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
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